Обработка антителами

Обработка антител меркаптоэтанолом приводит к разрыву дисульфидных связей, при помощи которых цепи связаны друг с другом, и позволяет получить препараты мономерных легких и тяжелых цепей. При ферментативном гидролизе пептидных цепей иммуноглобулинов появляются чрезвычайно гетерогенные пептидные фрагменты. Этот результат не был неожиданным, поскольку уже давно известно, что в организме содержатся буквально тысячи различных антител, каждое из которых имеет специфический участок связывания для различных антигенных детерминант. Если раньше было неясно, как формируются различные участки связывания, то [c.381]

Перед использованием матриксы, особенно сыворотки, должны быть проверены на патогены, например на поверхностный антиген вируса гепатита, а также соответствующим образом обработаны с целью удаления или снижения до минимума содержания определяемого вещества. Для этих целей используют обработку антителами, активированным углем, силикагелем и ионообменными смолами. Некоторые из этих методов и реагентов дают плохо воспроизводимые результаты например, различные партии активированного угля имеют различные адсорбционные характеристики. Большинство методов, разработанных для удаления определяемого вещества из сыворотки в промышленном масштабе, хранится в секрете. [c.28]

Сэндвич-анализ по способу проведения аналогичен последовательному анализу. Образцы вносят в соответствующие пробирки и помещают в прибор. В зоне нанесения конъюгата производится обработка антителами против ферритина, меченными ферментом, а в зоне нанесения субстрата — субстратом. На рис. 20-9 показаны типичные калибровочные кривые для анализа образцов с содержанием ферритина до 600 нг/мл, а также влияние продолжительности периода инкубации на ход калибровочной кривой. Для получения таких данных перемещение фильтров в приборе осуществляли с интервалами 50, 60 и 70 с. Интервалам 50 с соответствуют инкубационный [c.311]

Рис. 21-11. Обнаружение аномальных изоферментов креатинкиназы при иммунохимическом тестировании КК-МВ. а — препарат после обработки буфером б— препарат после обработки антителами против КК-ММ и суспензией иммобилизованных вторых антител в — препарат после обработки антителами против КК-ВВ и суспензией иммобилизованных вторых антител.

Для решения вопроса о том, являются ли антитела сывороточными глобулинами или же они только связаны с этой фракцией, можно использовать специфические методы очистки антител. Обычно эти методы включают два основных этапа 1) образование преципитата антиген—антитело и 2) диссоциацию преципитата и выделение чистого антитела. Первые успешные опыты этого рода были предприняты Фелтоном [42], который преципи-тировал антигенные полисахариды пневмококков соответствующей иммунной сывороткой, а затем разлагал преципитат, обрабатывая его гидроокисью бария. При такой обработке антитела переходят в раствор, нерастворимые же бариевые соли полисахаридов остаются в осадке. Гейдельбергер и его сотрудники успешно расщепляли подобные преципитаты, обрабатывая их концентрированными растворами хлористого натрия [43, 44]. В лаборатории автора для получения чистых антител преципитаты азобелков обрабатывались разведенными кислотами в присутствии нейтральных солей. При этом большая часть антител отщеплялась и переходила в раствор, а антиген и недиссоцииро-ванная часть антител оставались в осадке [45]. Растворы антител, полученные при помощи этих методов, содержат глобулины, не отличающиеся по свойствам от описанных выше нормальных глобулинов. Дальнейшие исследования показали, что больше 90% выделенных подобным образом глобулинов осаждается соответствующим антигеном. Это весьма убедительно подтверждает, что данные глобулины действительно идентичны с настоящими антителами. [c.336]

Перенесенные на нитроцеллюлозные пластинки белки обрабатывают 2,4-ди-нитрофторобензолом. Образующиеся производные белка могут быть обнаружены в количестве 10 нг при обработке антителами к динитрофенильным. (ДНФ) группам с помощью пероксидаза-антипероксидазного комплекса. Метод в 100 раз более чувствителен, чем окрашивание кумасси, и в то же время лишен осложнений, возникающих при использовании комплекса сереб])а. [c.312]

РаЪ-фрагмент (РаЬ fragment) - сщин из двух или нескольких идентичных фрагментов с одним антигенсвязывающим центром, образующихся при обработке антител протеолитическим ферментом. [c.265]

Во избежание связывания радиоактивного белка А с первым иммунным слоем последний формировали не из целых специфических антител, а из их фрагментов F( b,)j, полученных обработкой антител пепсином. Эти фрагменты, как известно, сохраняют способность связывать антигены, но не взаимодействуют с белком А. На рис. 30 изображена схема образующегося в местах расположения искомых колоний сэндвича [Erli h et al., 1978]. [c.293]

Незрелые и зрелые В-клетки отвечают на антиген по-разному. При обработке антителами ан-ти-IgM или антигеном и те и другие теряют sIgM, молекулы которого удаляются путем кэппинга и эндоцитоза. Однако ресинтез sIgM наблюдается в культуре только у зрелых В-клеток рис. 12.16). Такая индуцированная потеря антигенного рецептора может служить одним из механизмов приобретения аутореактивными В-клетками толерантности в процессе их созревания. [c.230]

Мышам вводили 20 мкг мышиного тиреоглобулина (Тг) для индукции толерантности (контроль - без индукции толерантности). Половине толерантных животных затем инъецировали in vivo элиминирующие антитела анти-С04 для истощения пула Т-клеток D4+. Клетки селезенки каждой мыши из этих трех групп (нетолерантные мыши толерантные мыши толерантные мыши, получившие анти-С04) переносили облученному сингенному реципиенту. Затем реципиентам вводили мышиный Тг и ЛПС, после чего определяли продукцию антител против Тг при помощи иммуно-ферментного анализа (ELISA, см. гл. 29). Обработка антителами анти-С04 устраняла перенос толерантности. [c.243]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология