Секреция рекомбинантных белков

Секреция гетерологичных белков, синтезируемых S. erevisiae В дрожжевых клетках гликозилируются только секретируемые белки, поэтому для получения рекомбинантных белков, которые для перехода в активную форму должны подвергнуться N-или 0-гликозилированию, необходимо использовать системы секреции. Для этого перед кДНК, которая кодирует интересующий исследователя белок, нужно поместить так называемый пре-про-а-фактор - лидерную (сигнальную) последовательность гена фактора спаривания дрожжей. Синтезируемый рекомбинантный белок сможет в этом случае эффективно секретироваться дрожжами. [c.139]

Использование дрожжевых систем экспрессии в биотехнологии и научных исследованиях. Крупномасштабный синтез рекомбинантных белков является одной из основных целей, для достижения которой конструируются системы экспрессии рекомбинантных генов в клетках дрожжей [255]. Синтезируемые рекомбинантные белки могут накапливаться в цитоплазме клеток, после чего их выделяют по традиционной схеме с использованием многостадийной очистки из бесклеточных экстрактов, получаемых после разрушения клеток. Популярными также являются системы, обеспечивающие секрецию рекомбинантных белков в культуральную среду. В этом случае секрецию можно обеспечить, например, включением в рекомбинантный белок аминокислотной лидерной последовательности препро-а-фактора S. erevisiae, которая направляет синтезируемые молекулы в секреторные гранулы [256]. [c.173]

Для выявления рекомбинантных клонов, синтезирующих экзоглюканазу, использовали иммунный скрининг, позволяющий идентифицировать белок-мишень с помощью специфичных к нему антител секреция белка при этом необязательна. Рекомбинантные клетки лизи-ровали in situ (парами хлороформа), перенесли цитоплазматические белки на найлоновый или нитроцеллюлозный фильтр и провели иммунологический тест. Использованный при этом метод реплик позволил сохранить жизнеспособные клетки для дальнейших исследований. [c.298]

Гонадотропин зародыша человека, структура которого была определена Хендриксоном и соавт., является гликопротеиновым гормоном плаценты (237 аминокислотных остатков), стимулирующим секрецию поддерживающего беременность стероидного гормона прогестерона [566]. Как рекомбинантный [8е-Ме1]-белок, он был синтезирован в клетках яичника хомяка. Этот несколько неожиданный факт свидетельствует, что эукариотические клетки млекопитающих могут быть столь же высоко толерантны, как и прокариотические клетки Е. oli, к пол- [c.162]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология