Метод перфузии клеток

Однако на более мелких объектах этот метод трудно применять. В Институте физиологии им. А. А. Богомольца АН УССР под руководством Героя Социалистического Труда академика П. Г. Костюка разработан метод внутриклеточной перфузии сомы нейронов моллюсков. Суть метода заключается в следующем. Исследуемый нейрон диаметром от 40 до 200 мкм помещается в конусообразную пору перегородки ( 1 = 200—300 и 2=25—80 мкм), разделяющей верхний и нижний отсеки экспериментальной камеры. Стены поры покрыты клейкой массой, изготовленной на основе вазелинового масла. В нижней камере создается отрицательное гидростатическое давление, обеспечивающее слипание мембраны клетки со стенками поры и частичное разрушение участка мембраны, контактирующего с нижним отсеком. Окончательное разрушение барьерных свойств этого участка достигается пропусканием через нижний отсек изоосмотического раствора соли калия, не содержащего кальция. После этого гидростатическое давление снимается. Верхний отсек камеры заполняется раствором Риигера. Контактирующий с ним рабочий участок клеточной мембраны полностью сохраняет возбудимость и генерирует полноценные потенциалы действия, которые отводятся электродами, находящимися в обоих отсеках камеры. [c.89]

Магнитный стержень индуцирует только радиальные перемещения и не вызывает подъема жидкости и турбуленций. Ротор типа морского винта более эффективен в суспензионных культурах, чем ротор типа турбины с плоскими лопастями, применяемый во многих бактериальных системах, поскольку ротор типа винта обеспечивает лучшее перемешивание при низких скоростях вращения. Если клетки слишком хрупки или если достаточное перемешивание не может быть достигнуто при скоростях, не создающих еще повреждающих сил сдвига, следует прибегнуть к другим системам перемешивания с использованием пневматической энергии (перемешивание при пробулькивании воздуха, как, например, в ферментёрах с воздушным лифтом) или гидравлической энергии (перфузия средой). Использование этих методов позволяет увеличивать масштаб культивирования без повышения подводимой мощности. Для увеличения эффективности механического перемешивания можно изменить конструкцию лопастей мешалки (как, например, в случае культур с микроносителями) или использовать несколько роторов. Некоторые примеры приведены на рис. 3.8. [c.99]

Клетки можно культивировать либо после извлечения из органа при перфузии, например коллагеназой, либо клонированием, т. е. воспроизводством единичной клетки. Первый метод все еще не дал удовлетворительных результатов. Получение клеточных линий из единичных нервных клеток оказалось очень, успешным [10]. Такие клеточные линии и опухолевые клетки возникают только из клеток на ранней стадии развития, поскольку зрелые дифференцированные нейроны не делятся. В частности, клетка нейробластомы опухоли мыши (С 1300), открытая в 1940 г. и затем воспроизведенная как перевиваемая опухоль, была клонирована в 1969 г. и с тех пор стала классической модельной системой. [c.368]

Были разработаны различные другие методы, позволяющие увеличить рабочую поверхность сосуда, на которой могут расти клетки. Во всех случаях проблема заключается в необходимости поддержания адекватного обеспечения клеток питательными веществами, включая кислород, и отведения продуктов отхода, особенно кислот. Фирма New Brunswi k S ientifi o. (приложение 3) производит аппараты, обеспечивающие постоянную перфузию вращающихся бутылок с помощью вращающихся пробок, через которые проходят различные питающие трубки. [c.37]

Использование заключенных в полимерный матрикс клеток в ферментёрных культурах представляется заманчивой техникой получения клеточных продуктов. Во многих случаях в этом методе могут быть использованы преимущества культуры с микроносителями (гранулы с растущими на их поверхности клетками) в смене среды и в соотношении объемов клеток и среды. Кроме того, заключение клеток в матрикс может быть использовано для облегчения перфузии или смены среды, и продукты можно будет получать свободными от клеток. [c.107]

Наконец, суш,ественное преимущество метода срезов при ионо-форетических исследованиях заключается в возможности поисков ионных механизмов, лежащих в основе наблюдаемых эффектов. Так, в клетках срезов стриатума как ортодромная стимуляция, так и аппликация ГАМК вызывают торможение. Оно уменьшается или полностью исчезает при перфузии срезов раствором, в котором отсутствуют ионы хлора, что указывает на зависимость регистрируемых тормозных процессов от этих ионов (Miller, 1981) [c.53]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология