Культура клеток преимущества

Тимидин легко включается в клетки, синтезирующие ДНК. поэтому включение меченого тимидина как специфического предшественника ДНК широко используется при изучении биосинтеза ДНК. Быстрое включение N -T или С -Т непосредственно в ДНК было продемонстрировано на крысах [87], зародышах цыплят [93], клетках костного мозга [94], растущих клетках из кончика корня лука [95] и в культуре тканей [96]. При радиоавтографических исследованиях процесса воспроизведения хромосом недавно начали применять тимидин, меченный тритием [39, 97—100], обладающий особыми преимуществами. Ни/ке мы остановимся еще на использовании меченого тимидина при изучении биосинтеза ДНК в бесклеточных препаратах из тканей млекопитающих [101—105]. [c.181]

Более того, при работе с культурами клеток существенные результаты могут быть получены при использовании очень небольшого количества клеток. Эксперименты, требующие для выяснения того или иного вопроса использования 100 крыс или 1000 человек, могут быть с равной статистической достоверностью поставлены на 100 культурах на покровных стеклах. Если каждую клетку рассматривать как независимый объект эксперимента, то одна культура на покровном стекле даст более достоверный ответ, чем целая клиника, полная больных. Это является важным преимуществом, когда дело касается человека, и, кроме того, снимает многие этические проблемы, возникающие при необходимости использовать для эксперимента большую группу животных, в ряде случаев на конечных стадиях эксперимента все же возникает необходимость в опытах на целых животных, однако ничто не мешает при этом использовать клеточные культуры в предварительных исследованиях. [c.9]

Главным преимуществом использования клеточных культур является возможность непрерывного наблюдения за клетками в ходе всего эксперимента. Поскольку живые клетки почти прозрачны, такое наблюдение осуществляется, как правило, с помощью фазово-контрастного микроскопа. Клетки растут на дне флакона или на боковой стороне бутыли, и толщина сосуда оказывается слишком велика, чтобы через нее можно было бы сфокусировать объектив микроскопа на клетки. В связи с этим были сконструированы микроскопы, у которых объективы рас- [c.106]

Учитывая ТОТ факт, что в 1 см каллусной культуры содержится до 1 млн. клеток, каждая из которых способна трансформироваться в новое растение, становятся понятными все преимущества метода стерильного вегетативного размножения растений в лабораторных условиях-на средах с фитогормонами при последующей пересадке их в почву. Отбирая нужные клетки, можно вывести новые сорта растений, удовлетворяющие запросы по одному или ряду показателей (устойчивость к микробным заболеваниям, урожайность, особая окраска цветов, повышенная продуктивность вторичных метаболитов и т. д.). [c.507]

Необходимо отметить, что, хотя иммобилизованные клетки обладают целым рядом преимуществ по сравнению с системами свободно суспендированных клеток, описанные выше возможности все же ограничены. Концентрирование клеток может, например, приводить к заметному падению удельных скоростей реакций из-за диффузионного торможения, что снижает общий уровень увеличения скорости процесса. Иммобилизация также может вызывать изменения в метаболизме и физиологии клеток, следствием чего является уменьшение продуктивности или, в случае естественных смешанных культур (как при очистке сточных вод), изменение состава микробной популяции с возможными нежелательными эффектами. Приготовление иммобилизованных клеток часто дороже, чем свободно суспендированных, так как необходимы специальные носители и, кроме того, тре- [c.168]

Оказывается, что, за исключением культур растительных и животных тканей, использование иммобилизованных клеток при периодическом культивировании не дает каких-либо преимуществ и, возможно, даже невыгодно из-за затрат на иммобилизацию и низких удельных скоростей реакций. Преимущества проявляются при повторном культивировании, например, при производстве уксуса. В таких случаях производительность реактора можно считать близкой стандартному периодическому процессу, но с большим объемом инокулята. Наибольшие различия в производительности между системами с иммобилизованными и свободно суспендированными клетками наблюдаются при непрерывном культивировании, так что следующие разделы будут посвящены именно таким процессам. [c.181]

Важным преимуществом растений по сравнению с животными является возможность получения целого растения из одной клетки, основанная на свойстве тотипотентности. Результаты генетической инженерии растений во многом зависят от разработки методов культуры тканей, особенно методик регенерации различных растений. [c.49]

Методы, основанные на измерении светорассеяния, широко используются для изучения роста чистых культур. Они очень эффективны и часто бывают полезны, но иногда при их использовании можно получить ошибочные результаты. Основными преимуществами методов являются быстрота и то, что при их применении клетки сохраняются в интактном состоянии. С помощью методов светорассеяния можно получить информацию о содержании макромолекул, что обычно не представляет первоочередного интереса для бактериолога, но с их помощью нельзя определить число клеток. Физические и математические основы светорассеяния сложны, однако и при упрощенном рассмотрении этого явления можно получить ответы на большинство интересующих микробиолога вопросов. [c.474]

Анализ перечисленных изданий и тех оригинальных работ,. предметом изучения которых служили клетки, культивируемые вне организма, показывает, что возможности культуры ткани в качестве объекта биохимии и молекулярной биологии далеко ие исчерпаны. Однако, на мой взгляд, основным преимуществом этого метода остается то, что только в тканевых культурах можно наблюдать жизнь клеток, их движение, характер взаимодействия с субстратом, деление и т. д. [c.5]

Часто некоторые клетки перевиваемых первичных клеточных культур претерпевают генетические изменения, в результате которых ускоряется их рост. Культуры клеток, которые при этом приобретают селективные преимущества, оказываются способными к неофаниченному росту in vitro и называются устойчивыми клеточными линиями. Одни клеточные линии сохраняют основные биохимические свойства исходных клеток, другие нет. У больщинства клеток, способных к неофаниченному росту, имеются значительные хромосомные изменения, в частности отмечается увеличение числа одних хромосом и потеря других. В молекулярной биотехнологии устойчивые клеточные линии иногда используют для размножения вирусов и для выявления белков, которые кодируются клонированными последовательностями ДНК. Кроме того, они применяются для крупномасиггабного производства вакцин и рекомбинантных белков. [c.28]

Главное преимущество культивируемых клеток, которое полностью используется клеточными биологами, но часто игнорируется биохимиками, — это возможность прижизненного наблюдения клеток с помощью микроскопа. Существенно то, что при работе с культурами клеток в эксперименте используются здоровые клетки и что они сохраняют жизнеспособность в течение всего эксперимента. Убедиться в этом можно, периодически тестируя культуру клеток. Более того, легко оценивать относительное содержание жизнеспособных клеток. При опытах же на целом животном состояние почек, например, можно оценить лишь в конце эксперимента, и к тому же обычно лишь качественно. [c.8]

Клеточные культуры обладают многими преимуществами перед интактными животными, когда речь идет о включении радиоактивной метки и изучении действия лекарственных препаратов и гормонов. При использовании культур метка или лекарственный препарат могут быть добавлены и удалены в определенное время, их внеклеточная концентрация и удельная активность могут поддерживаться постоянными и, кроме того, на их метаболизм не будут влиять клетки других органов. Это не означает, конечно, что использование изотопов в культурах клеток лишено своих собственных подводных камней. [c.163]

Если исследуют мутации, дающие селективное преимущество, то мутантов легко выявить методом отпечатков, или реплик, предложенным Э. и Дж. Ледерберг (рис. 12.2). Например, при изучении мутаций устойчивости Е. соИ к бактериофагу Т1 (мутанты Топ" ) клетки бактерии высевают на агаризованную среду в чашки Петри таким образом, чтобы на них образовались отдельные колонии. Затем при помощи бархатной печатки эти колонии перепечатывают на чашки с нанесенной суспензией частиц фага TI. Большая часть клеток исходной (чувствительной) культуры (Топ) не будет образовывать колоний, поскольку их лизирует бактериофаг. Вырастут лишь отдельные мутантные колонии (Топ"), устойчивые к фагу. Сравнивая частоту мутантов в контрольном и опытном (например, облученном ультрафиолетовым светом) вариантах, легко определить частоту индуцированных мутаций. [c.298]

Стандартный многопластинчатый блок состоит из 10 камер с рабочей поверхностью 600 см каждая. Камеры скреплены друг с другом и снабжены соединяющими их каналами. Это позволяет проводить каждую операцию для всех камер одновременно. Следовательно такой блок можно рассматривать как сосуд с рабочей поверхностью 600 см , использующий 2 л среды и занимающий объем 12 500 см . Этот блок удобен для практического использования и позволяет получать такие же хорошие результаты, как и при выращивании в пластиковых флаконах. Блок сделан из полистирола и предназначен для одноразового использования. Один из недостатков этой системы может обернуться ее преимуществом. На практике бывает трудно удалить все клетки после их открепления от подложки трипсином или другими агентами. Однако остающиеся в блоке клетки можно использовать в качестве инокулята для новой культуры при добавлении свежей среды. С помощью надежной асептической техники сбора клеток этот блок одноразового пользования. может быть повторно задействован 3—4 раза. Система нескольких соединенных между собой блоков используется в промышленности для производства интерферона [10]. Кроме того, поставляются также блоки с рабочей поверхностью 1200 24 ООО см . [c.81]

Если гибридомные клетки выращивали в панелях для культуры тканей с объемом лунок 2 мл (процедура гибридизации Б), а клонирование проводили в мягком агаре, как описано выше, то в некоторых случаях необходимо было проанализировать большое число колоний, прежде чем удалось обнаружить антителообразующую колонию. По этой причине клонирование проводили в 96-луночных плоскодонных планшетах для микротитрования с помощью последовательных разведений клеточной взвеси. Преимущество такого подхода заключается в том, что образование антител единичными колониями, растущими в лун- [c.140]

После получения различных сомаклональных вариаций от исходного растения наступает следующий этап — отбор необходимых сочетаний признаков. Данный вопрос решается с помощью клеточной селекции, которую проводят практически на любом объекте, введенном в культуру in vitro. Однако удобнее использовать суспензионную культуру или изолированные протопласты. Преимущество этих объектов состоит в быстром росте культуры и равномерном действии селективного фактора на все клетки. Для отбора сомаклональных вариаций соответствующие селективные факторы (соли в высоких концентрациях, гербициды и др.) добавляют в питательную среду для выращивания культуры клеток либо растущие культуры помещают в селективные условия (низкая или высокая температура, освещенность и т.д.). Существует несколько методов клеточной селекции [c.187]

Существует несколько способов сохранения генофонда высших растений заповедники, национальные парки, банки семян. В последнее время большое внимание уделяется созданию и развитию новых способов пересадочных коллекций каллусных клеток, депонированию культур клеток и, наконец, криосохранению, т. е. хранению объектов при очень низкой температуре, обычно это температура жидкого азота (-196 °С). Криосохранение имеет существенные преимущества по сравнению с остальными методами. При сохранении в глубоко замороженном состоянии полностью прекращается обмен веществ, отсутствуют значительные физикохимические молекулярные изменения не только в клетке, но и в окружающей водной среде. Сохраняется генофонд, а следовательно, все свойства замороженного объекта. Единственный негативный фактор, которого не удается избежать, — это фоновая ионизирующая радиация. Однако, по мнению М.Ашвуд-Смита, потребуется примерно 32000 лет для накопления 10% летальных хромосомтлх повреждений. Следовательно, криогенный метод дает возможность неограниченно долго хранить растительный материал без существенных изменений сохраняются жизнеспособность клеток, их свойства, а также способность к морфогенезу и регенерации целых растений. [c.200]

Разработаны и другие схемы отбора с доминантным маркером, например с использованием фермента глутаминсинтетазы (GS), обеспечивающей устойчивость к цитотоксическому действию метионинсульфоксимина. В этой системе применяется вектор, несущий G -ген. Его вводят в культуру клеток млекопитающих и для отбора клеток, несущих больщое количество копий вектора, повышают концентрацию метионинсульфоксимина в среде. При этом в хозяйских клетках тоже должна присутствовать GS, поскольку только множественные копии ( 5 -гена могут обеспечивать устойчивость к метионинсульфоксимину. Такая схема обладает определенными преимуществами перед описанной выще. [c.150]

Более чувствительны микроскопические методы, основанные на учете способности живых клеток редуцировать соли тетразолия в формазан и позволяющие установить соотношение живых и мертвых клеток в культурах. Eidus с соавт. (1959) рекомендуют для этих целей неотетразо-лийхлорнд, который проникает внутрь клеточных оболочек, хорошо окрашивает структуру клеток, позволяет оценить их метаболическую активность по интенсивности цвета образуемого формазана (пурпурные более активные клетки, красные — менее активные, мертвые клетки остаются бесцветными). Б качестве преимуществ ТТХ от.мечепа его меньшая но сравнению с остальными соединениями тетразолия токсичность. [c.108]

Количественные работы и успехи генетических исследований. Методы, с помощью которых можно выращивать в лаборатории микроорганизмы, разработали О. Брефельд, Р. Кох и его школа в прошлом веке. Введение в практику прозрачных питательных сред, уплотненных желатиной или агаром, позволило изолировать отдельные клетки, следить за их ростом в колонии и получать чистые культуры. Разработка стандартных методов стерилизации и приготовления питательных сред привела к быстрому развитию медицинской микробиологии. Хотя еще Кох описал количественные методы, их преимущества при работе с микроорганизмами были поняты только в последние 50 лет. Малые размеры микроорганизмов позволяют получать в одной пробирке или чашке Петри и исследовать популяции, состоящие из 10 -10 отдельных клеток, и благодаря этому выявлять такие редкие события, как мутация или передача приобретенного признака, не нуждаясь в сложных вспомогательных средствах и довольствуясь малым пространством. Огромные успехи биохимических и генетических исследований не в последнюю очередь достигнуты благодаря легкости обращения с бактериями. [c.21]

Достижения в области культуры клеток и тканей привели к созданию принципиально нового метода вегетативного размножения — клонального микроразмножения (получение в условиях in vitro (в пробирке), неполовым путем растений, генетически идентичных исходному экземпляру). В основе метода лежит уникальная способность растительной клетки реализовывать присущую ей тотипотентность, т. е. под влиянием экзогенных воздействий давать начало целому растительному организму. Этот метод, несомненно, имеет ряд преимуществ перед существующими традиционными способами размножения [c.106]

Формирование эмбриоидов в культуре тканей происходит в два этапа. На первом этапе клетки экспланта дифференцируются за счет добавления в питательную среду ауксинов, как правило, 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-Д) и превращаются в эмбриональные. На следующей стадии необходимо заставить сформировавшиеся клетки развиваться в эмбриоиды, что достигается уменьшением концентрации ауксина или полного его исключения из состава питательной среды. Соматический эмбриогенез возможно наблюдать непосредственно в тканях первичного экспланта, а также в каллусной культуре. Причем последний способ менее пригодный при клональном микроразмножении, так как посадочный материал, полученный таким методом, будет генетически нестабилен по отношению к растению-донору. Как правило, соматический эмбриогенез происходит при культивировании каллусных клеток в жидкой питательной среде (суспензия) и является наиболее трудоемкой операцией, так как не всегда удается реализовывать свойственную клеткам тотипотентность. Однако этот метод размножения имеет свои преимущества, связанные с сокращением последнего (третьего) этапа клонального микроразмножения, не требующего подбора специальных условий укоренения и адаптации пробирочных растений, так как соматические зародыши представляют собой полностью сформированные растеньица. При использовании соответствующей техйики их капсулирования из этих эмбриоидов возможно получать искусственные семена. [c.114]

Однако, несмотря на некоторые недостатки, данный метод имеет положительные стороны и преимущества. Во-первых, он является эффективным и экономически выгодным, так как в процессе размножения из каждой индивидуальной каллусной клетки при благоприятных условиях культивирования может сформироваться адвентивная почка, дающая начало новому растению. Во-вторых, в ряде случаев он является единственно возможным способом размножения растений в культуре тканей. В-третьих, представляет большой интерес для селекционеров, так как растения, полученные данным методом, различаются генетически и морфофизиологически. Это дает возможность селекционерам проводить отбор растений по хозяйственно-важным признакам и оценивать их поведение в полевых условиях. Этот метод целесообразно применять лишь к тем растениям, для которых показана генетическая стабильность каллусной ткани, а вариабельность между растениями-регенерантами не превышает уровня естественной изменчивости. К таким растениям можно отнести амариллис, томаты, спаржу, некоторые древесные породы и другие культуры. Через каллусную культуру были размножены сахарная свекла, некоторые представители рода Brassi a, кукуруза, рис, пшеница и другие злаковые, подсолнечник, лен, разработаны условия, способствующие регенерации растений из каллуса огурца, картофеля, томатов. [c.115]

Теперь мы уже вполне подготовлены к тому, чтобы приступить к вопросу, поставленному в гл. VU, а именно к вопросу о молекулярном механизме возникновения тех изменений в последовательности нуклеотидов ДНК, которые приводят к мутациям. Действительно, исследование характера возникновения мутаций Т-четных фагов с использованием методов генетического анализа с высоким разрешением дает большие возможности для проникновения в природу мутационного процесса. Использование фагов имеет еще одно важное преимущество по сравнению с ис-лользованием бактерий. Мутации фаговой ДНК можно изучать как в том случае, когда она находится в состоянии покоя вне клетки в составе инфекционной фаговой частицы, так и когда она находится в реплицирующемся, внутриклеточном, вегетативном состоянии. Уже самые первые исследования Херши и Лурия показали, что частота спонтанных мутаций в покоящейся ДНК очень мала — столь мала, что в течение многих лет считалось (как потом оказалось, ошибочно), что внеклеточные фаговые частицы вообще не мутируют месяцами и даже годами. Таким образом, новые мутации появляются в основном во время вегетативного размножения фага в клетке-хозяине. Рассмотрим следующий пример. Культуру Е. oli заражают препаратом фага Т2/- с титром 10 частица/мл. Фагу дают размножиться в течение нескольких циклов, пока все бактерии в культуре не подвергнутся лизису, а титр фага не достигнет величины 10 частица/мл. Оказывается при этом, что с каждым циклом размножения доля г-мутантов во всей популяции фагов увеличивается (примерно с 10" в начале до 10 в конце). Следовательно, мутанты фага возникают в результате ошибок копирования при внутриклеточной репликации его генетического материала. Репликация ДНК родительского фага является очень точным процессом. И все же при репликации иногда происходит ошибка, порождающая в одной из вегетативных реплик изменение последовательности нуклеотидов, или мутацию. Мутантная реплика генетического материала включается затем при созревании в инфекционную фаговую частицу, которая в свою очередь заражает новую бактериальную клетку. В этой клетке очень точно копируется уже измененная информация, содержащаяся в мутантной частице поэтому все потомство такой частицы оказывается тоже мутантным. Поскольку репликация ДНК вегетативного фага происходит в соответствии с постулированным Уотсоном и Криком полуконсервативным механизмом, размножение фагового генома можно рассматривать как процесс бинарного деления и с точки зрения статистического анализа совершенно аналогичным процессу размножения генома бактерий. Следовательно, уравнение, связывающее долю мутантных особей п среди общего числа N потомков одного исходного родителя, возникших после g генераций, с частотой мутаций а [c.315]

Впоследствии другие исследователи обнаружили, что трансформация непатогенных штаммов пневмококка в патогенные может осуществляться и в лабораторной культуре клеток. Изредка возникающие трансформированные клетки легко отделить от нетрансформированных, поскольку они не агглютинируются сывороткой, содержащей антитела против клеток типа IIR. Агглютинировавшие клетки IIR осаждаются хлопьями на дно культурального сосуда, тогда как трансформированные клетки не слипаются, а свободно размножаются, образуя мутную суспензию клеток IIIS (рис. 4.4). Развитие такого метода выделения трансформированных клеток in vitro ( в пробирке ) дало важное преимущество, поскольку позволило исследовать природу трансформирующего фактора убитых нагреванием клеток IIIS непосредственно, не вводя их мышам и не дожидаясь гибели последних. [c.94]

Традиционные методы генетического анализа, разработанные Менделем, основаны на переходе из диплоидного состояния в гаплоидное в процессе мейоза. Восстановление диплоидности происходит при оплодотворении. Изменения плоидности обеспечивают сегрегацию генов, то есть их распределение в потомстве. Несколько десятилетий назад было показано, что соматические клетки эукариот можно размножать in vitro, т.е. поддерживать в виде так называемых клеточных культур (рис. 18.1). У этих культивируемых in vitro клеток в норме не происходит смены диплоидной и гаплоидной фаз. Тем не менее существуют различные способы, позволяющие изучать определенные генетические феномены на культурах клеток. Существенным преимуществом клеточных культур является то, что возникновение новой клеточной генерации занимает несколько часов, тогда как появление нового поколения на уровне целой особи-это месяцы или годы. Дополнительное преимущество для изучения генетики человека-это возможность комбинировать наследственные детерминанты клеток в культуре, поскольку проведение направленных скрещиваний между людьми, естественно, невозможно. Недавно были разработаны способы получения гибридных клеток, содержащих наследственную информацию различных видов организма, например человека и мыши. Такие гибриды нельзя получить другими способами, т.е. на уровне целых организмов. [c.290]

Существенное преимущество растений по сравнению с животными, важное для генетики соматических клеток, заключается в том, что гаплоидные клетки растений можно культивировать in vitro. В процессе онтогенеза всех растений происходит смена гаплоидных и диплоидных фаз. У мхов и печеночников доминирует гаплоидная фаза. Эта фаза, называемая гаметофитом, сохраняется и у высщих растений, хотя у них она сильно редуцирована. В процессе мейоза образуются мужские и женские клетки, которые проходят несколько митотических делений. Диплоидность восстанавливается при оплодотворении. Клетки гаплоидной фазы можно поддерживать в культуре. В такой культуре клеток легко тестировать проявление рецессивных маркеров подобно тому, как это делается при работе с ауксотрофными маркерами бактерий. При использовании соответствующих селективных сред можно проводить скрининг больщих популяций клеток, подбирая условия, при которых способность к пролиферации сохраняют только нужные мутанты. [c.329]

Аномальные клетки, не повинующиеся социальным сдерживающим факторам, пролиферируют с образованием опухолей в организме они также появляются при трансформации в культуре клеток Хотя это часто приводит к гибели всего организма, как индивидуальные клетки они получают селективное преимущество, и поэтому их легко выделять. Трансформация клетки часто сопровождается мутацией или сверхэкспрессией специфических онкогенов, во многих случаях выявленных благодаря их наличию в РНК опухолевых вирусов (ретровирусов). Нормальные гомологи таких вирусных онкогенов в здоровых клетках, называемые протоонкогенами, по-виоимому, кодируют ключевые ком- [c.437]

Одним из преимушеств метода НВЧ является возможность его использования в отсутствие способа культивирования бактерий на твердой среде. Второе преимущество заключается в том, что он удобен в случае высокой вариабельности кинетики роста. Предположим, что некоторые клетки из смешанной культуры растут быстро, образуя на агаре крупные колонии, которые, распространяясь по поверхности, маскируют появляющиеся позже мелкие колонии интересующего нас микроорганизма. Хотя количество таких мелких колоний может быть больше, их невозможно учесть на чашках из-за присутствия колоний более подвижных или быстрее растущих бактерий. Третье преимущество метода НВЧ состоит в том, что в присутствии не представляющих интереса организмов и в отсутствие подходящего метода селекции его можно использовать для выявления легко обнаруживаемых продуктов (например, пигментов или антибиотиков), продуцируемых изучаемыми микроорганизмами. В этом случае, несмотря на более выраженный рост контаминирующих микроорганизмов, количество исследуемых батерий определяют по числу пробирок, где образование характерных продуктов отсутствует. И наконец, метод НВЧ используют в случае, если агар или другие отвердители содержат некоторые факторы (например, тяжелые металлы), которые изменяют достоверность подсчета или взаимодействуют с изучаемыми бактериями. [c.467]

В 1960 г. Барски с сотр. в смешанной культуре опухолевых клеток двух разных, но родственных линий мышей идентифицировали клетки, возникшие в результате спонтанного слияния. Эти клетки содержали внутри единственного ядра хромосомные наборы обеих родительских линий. Позже группа исследователей во главе с Эфрусси пришла к выводу, что гибридизоваться могут не только клетки близко-родственных линий мышей, но и линий с более выраженными генетическими различиями. Однако выяснилось, что частота спонтанного слияния клеток очень низка, а клетки многих типов спонтанно вообще никогда не сливаются и этот процесс необходимо индуцировать. Кроме того, для накопления гибридных клеток при культивировании они должны обладать селективным преимуществом. [c.200]

Микроносители представляют собой мелкие твердые частицы (поддерживаемые в суспензии благодаря перемешиванию), на которых клетки растут в форме монослоя. Использование микроносителей дает клеткам, обладающим адгезивными свойствами, все преимущества крупномасштабных суспензионных культур. Поверхность бус-микроносителей может иметь положительный заряд, а различные клетки характеризуются оптимальным ростом при несколько различных поверхностных зарядах. По уверению фирмы Flow Laboratories (приложение 3), выпускаемые ими супербусы обладают поверхностным зарядом, пригодным для максимального числа типов клеток. [c.40]

Преимущества метода криогенного хранения состоят в следующем малой вероятности заражения культуры, сохранении стабильными свойств микроорганизмов, затрате небольшого времени и небольшого количества материалов при подготовке культуры к хранению. Клетки можно легко извлечь из рефрижератора и использовать без пересевов в качестве прямого ино-кулята. [c.154]

Система замкнутого перфузионного контура постоянно (или по сигналу) извлекает среду из культуры и пропускает ее через устройство для оксигенации, а затем возвращает в культуру. Этот метод обладает многими преимуществами, если легко отделять среду от клеток для пропускания через перфузионный контур. Среда в устройстве для оксигенации эффективно про-булькивается для насыщения кислородом и другими компонентами, такими, например, как ЫаОН для контроля pH, который может повреждать клетки, если его добавлять непосредственно в культуру. Этот метод используется в системах со стеклянными бусами (разд. 3.6.1) и оказывается особенно эффективным в системах с микроносителями (разд. 3.6.3). [c.70]

Использование заключенных в полимерный матрикс клеток в ферментёрных культурах представляется заманчивой техникой получения клеточных продуктов. Во многих случаях в этом методе могут быть использованы преимущества культуры с микроносителями (гранулы с растущими на их поверхности клетками) в смене среды и в соотношении объемов клеток и среды. Кроме того, заключение клеток в матрикс может быть использовано для облегчения перфузии или смены среды, и продукты можно будет получать свободными от клеток. [c.107]

Преимущества органной культуры заключаются в поддержании целостности ткани и межклеточных взаимодействий таким образом, органная культура наиболее приближается к ситуации in vivo по сравнению с другими известными методами культивирования. Количественная оценка действия лекарств на клетки в органной культуре затруднительна хотя бы из-за значительной клеточной гетерогенности "эксплантатов. Так что, хотя этот метод и нашел широкое применение в исследованиях чувствительности к гормонам соответствующих тканей, использова- ше органных культур в исследованиях чувствительности к лекарствам остается ограниченным. Эта проблема обсуждена в недавно опубликованной обзорной статье [12], а также в гл. 7 этого сборника. [c.259]

I. Кратковременные культуры (4—24 ч). Кратковременное поддержание клеток в суспензии для анализа чувствительности к препаратам возможно для клеток из любого источника. Если клетки получены из биопсийного материала опухоли человека, то тест-система имеет ряд теоретических преимуществ способность к росту не является лимитирующим фактором, поскольку рост в этой системе не требуется разрастание клеток стромы и клональный отбор сведены к минимуму, так что результаты могут быть получены быстро, что особенно важно, если испытание проводится с клиническими целями. Метод получил широкое использование в ФРГ при изучении чувствительности к ряду химиотерапевтических препаратов различных типов опухолей [13, 14]. Модифицированный метод с использованием либо клеток, либо фрагментов тканей был применен Силвестрини с сотрудниками [10] также для различных типов опухолей. В обоих вариантах исследовали включение нуклеотидов, меченных тритием, в ДНК или РНК. Ограничения этого метода заключаются главным образом в короткой продолжительности опыта это исключает возможность длительного воздействия лекарственных средств в течение одного или нескольких клеточных циклов. Следовательно, этим методом нельзя исследовать обратимость действия лекарства и остаточную цитотоксичность, что существенно ограничивает круг исследуемых препаратов. Было показано, что при использовании этой тест-системы получаются ложно-отрицательные результаты действия адриамици-на [14], хотя имелись сообщения об успешном применении системы при анализе действия других лекарств с иными механизмами действия [10]. [c.260]

Клетки, получаемые непосредственно из опухолей, можно клонировать на стекле в виде монослойной культуры. Однако в последнее время появляется все больше данных о клонировании клеток в суспензии, при котором удается избавиться от стро-мальных элементов, которым необходима для роста твердая подложка. Теоретически преимущество клонирования в суспензии состоит в том, что в такой системе эффектам подвержены лишь клетки с высокой способностью к самообновлению (возможно, стволовые клетки опухолей) клетки с низкой пролифе-ративнои активностью, составляющие большую часть опухоли, в формировании ответа не участвуют. Это, однако, справедливо только в том случае, когда колонии представляют собой истинные клоны (то есть возникают из единичной клетки, а не из клеточного агрегата) и подсчет их производится после многих клеточных генераций. В реальных исследованиях эти требова- [c.262]

Обычно между 18-м и, 25- м днями супернатанты исследуют на антительну1Ю активность. К этому времени гибридомные клетки практически образуют монослой и среда имеет выра-жен ную желтую окраску. Это гарантирует, что супернатант содержит оптимальное количество антител для скрининга. Скрининг супернатантов из всех 48 лунок, включая и лунки, где не Наблюдается роста, имеет то преимущество,. что позволяет провести положительный отбо р на фоне остаточных антител. Чтобы определить, возрастает или снижается продукция антител данной отдельной культурой, целесообразно проводить последовательное тестирование содержания антител в супернатантах, отбираемых через каждые 2—3 дня. Снижение уровня антител может. быть связано как с проблемой остаточного фонового роста в данной лунке, так и с повышенной ростовой активностью несекретирующих гибридных клеток по сравнению с линией гибридомы. Трудно спасти антителосе кре-тирующие гибридомы из, лунок, где в супернатантах выявляется прогрессивное снижение, продукции антител. Кроме того, целесообразно попытаться клонировать отдельные клетки, но это не всегда приводит к желаемому результату. [c.132]

Если клетки после слияния рассевают в лунки панели для микротитрования, то гибридомы, продуцирующие антитела нужной специфичности, затем пересаживают в 24 луночные панели для культуры тканей с объемом лунок 2 мл. Далее при образовании монослоя и окращивания среды в желтый цвет, супернатант можно повторно тестировать, используя определенный набор антигенов. Если результаты тестирования удовлетворительные, то гибридому наращивают в нескольких лунках, затем в универсальных контейнерах и далее во флаконах постепенно возрастающего объема. К этому времени обычно уже происходит самопроизвольное клонирование клеток. Тот клон, который отличается наилучщим ростом (предполагаемый источник антител), постепенно получает преимущество над всеми другими в культуре. [c.138]

В качестве альтернативы описанному выше подходу или дополнения к нему, для размножения клеток, образующих антитела, и доведения культуры до состояния моноклональности можно использовать простые методы клонирования. Одни исследователи проводят клонирование на как можно более ранних стадиях культивирования, т. е. непосредственно после заражения клеток ВЭБ [11]. Другие дают ВЭБ-зараженным клеткам подрасти и затем клонируют их [12]. Преимущество клонирования заключается в том, что культивируемая линия клеток, образующих антитела, с самого начала становится моноклональной. Непреодолимый недостаток клонирования, особенно в тех случаях, когда не применяется обогащение кле- [c.160]

Методы культивирования в полужидкой среде основаны на ее высокой вязкости, что обеспечивает разъединенность внесенных в культуру клеток и, следовательно, дискретность развивающихся колоний. Растворимые компоненты легко диффундируют в полужидком носителе — матриксе и вследствие этого равномерно распределяются по всему объему культуры. Два главных преимущества клонирования клеток в полужидком агаре состоят в том, что с помощью этого метода легко проанализировать большое число клеток и легко визуализировать образующиеся клоны. Правда, недостаток всех методов клонального анализа — возможность случайного совмещения клонов, — разумеется, присущ и культивированию в полужидкой среде. Вероятные при этом ошибки оценивают в экспериментах по титрованию, которые позволяют установить порядок наблюдаемых событий. Для этого подбирают условия, при которых в ограниченном числе оказываются клетки только одного типа. Данные условия определяют по линейной зависимости между числом вносимых в культуру клеток и числом подсчитываемых событий (т. е. числом колоний). Таким образом были найдены условия как для роста sIg+В-клеток (Kin ade, 1981 а, Ь), так и для роста предшественников В-клеток (Paige, 1983, 1984 Paige et al., 1984). [c.255]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология