Рестриктаза подкласса IIS

Таблица 1.4. Рестриктазы подкласса П8

Рис. I.II. Схема метода направленного введения разрыва в кольцевую одноцепочечную ДНК фага М13 с помощью рестриктазы подкласса 1IS (Fo/d).

Рестриктазы подкласса TIN узнают палиндромы, прерываемые несколькими произвольными нуклеотидами. Примером является 1-сайт [c.165]

Особенности рестриктаз подкласса IIS используют также при создании специализированных клонирующих векторов, имеющих большое значение для сборки генов из химически синтезированных блоков. [c.21]

В ряде случаев для клонирования фрагментов ДНК необходимы плазмиды, содержащие специальным образом введенные участки узнавания рестриктаз подкласса П8, которые гидролизуют молекулы ДНК на некотором расстоянии от этих участков (см. табл. 1.4). Первые плазмиды такого типа созданы в 1984 г В. Н. Добрыниным с соавторами для эндонуклеазы ВЬу]1. Этот фермент расщепляет ДНК в положении 2/6 (места расщепления соответственно верхней и нижней цепей) справа от последовательности [c.95]

Рестриктазы подкласса П узнают пента- и гептанутшеотид-ные палиндромы, в центре которых находится один из двух альтернативных нуклеотидов или любой нуклеотид (N). Фланкирующие нуклеотиды, стоящие в симметричных положениях, также могут быть альтернативными [c.165]

По способу расщепления ДНК рестриктазы класса II распадаются на два типа. Одни осуществляют ступенчатый разрез нитзй ДНК (пеложения гидролизуемых связей на разных нитях не совпадают), а другие — прямой (расщепляются совпадающие связи). В результате у фрагментов ДНК образуются, соответственно, выступающие однонитевые или ровные (тупые) концы. Конечно, в местах разрезов (i,T) выступающие последовательности нуклеоти-[ов, относящиеся к разным нитям ДНК, являются комплементарными (липкими). В случае действия рестриктаз подкласса IIP, узнающих палиндромные сайты, все рестрикты обладают липкими концами. Пример этого типа рестриктаз — эндонуклеаза ЕсоШ, образующая 5 -выступающие концы [c.166]

Молекулярная масса ресчриктаз класса И достигает нескольких десятков килодальтон. Рестриктазы (и метилазы) этого класса ферментов действуют как отдельные белки. Расщепляя двуните-вую ДНК, они образуют, как правило, 5 р- и З ОН-концы. Самые важные характеристики этих рестриктаз — структура их сайтов узнавания и способ расщепления ДНК. По этим признакам их можно разделить на несколько подклассов. [c.165]

Более половины всех рестриктаз относится к подклассу IIP, который представлен ферментами, узнающими тетра-, гекса- и октануклеотидные последовательности с вращательной симметрией второго порядка (подобные структуры называют пaJ индpoмa-ми). Рестриктазы этого подкласса действуют либо на определенные сайты, например, [c.165]

Внутри рассматриваемого класса рестриктаз открыты ферменты, узнающие непалинд-ромные структуры и расщепляюпще ДНК на строго фиксированном расстоянии от участка узнавания с образованием как тупых, так и липких концов (табл. 1.4). По предложению В. Ши-бальского данные ферменты отнесли к подклассу IIS (от англ. shift — сдвиг). Особенно интересны рестриктазы, образующие при гидролизе достаточно длинные липкие концы. В каждом месте гидролиза молекулы ДНК такие липкие концы имеют уникальную последовательность. Это позволяет при необходимости направленно собирать генерированные данными рестрикта- [c.20]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология