Денатурированная ДНК, кинетика реассоциации

Рис. 107. Кинетика реассоциации денатурированных препаратов ДНК. (Значения Со/ (скорости реассоциации) отложены в логарифмическом масштабе.)

Рой Бриттен (Roy Britten) и его сотрудники исследовали кинетику реассоциации ДНК, денатурированной нафеванием, и обнаружили, что эукариотическая ДНК в отличие от прокариотической ДНК содержит много повторяющихся последовательностей оснований. В этих экспериментах ДНК дробили на короткие фрагменты и затем денатурировали нафеванием раствора выще температуры плавления ДНК (Т ). Затем полученный раствор одноцепочечной ДНК охлаждали до температуры примерно на 25°С ниже Т , оптимальной для реассоциации комплементарных цепей с образованием двухспиральной ДНК. Кинетику реассоциации можно регистрировать самыми различными способами. Один из методов состоит в измерении поглощения раствора при 260 нм (разд. 24.9). При этой длине волны коэффициент поглощения двухцепочечной ДНК примерно на 40% ниже, чем соответствующая величина для одноцепочечной ДНК это явление называется гипохромизмом. В основе другого экспериментального подхода лежит тот факт, что двухцепочечная ДНК связывается колонками с гидроксиапатитом (фосфатом кальция), а одноцепочечная проскакивает. В этом методе привлекает то, что он позволяет фракционировать больщие количества ДНК на основе скорости ее реассоциации после тепловой денатурации. [c.138]

С помощью колонок с гидроксилапатитом можно исследовать кинетику реассоциации денатурированных фрагментов ДНК [56]. Работу в этом случае осуществляют в следующей последовательности 1) фрагментированную ДНК денатурируют нагреванием в 0,12 М фосфатном буфере pH 6,7 при 100° в течение 10 минут, 2) фрагментированную и денатурированную ДНК инкубируют при 60° в течение различных промежутков времени (от нескольких минут до нескольких часов) 3) ин- [c.90]

Кинетика реассоциации денатурированной ДНК 186 [c.351]

Очень ценным является изучение кинетики реассоциации фрагментированной денатурированной ДНК [92—95]. Этот процесс подчиняется кинетике второго порядка (гл. 6, разд. А.З), описываемой уравнением (2-16). Его легко получить, проинтегрировав уравнение (6-8) в интервале от О до при [А] = [В] =С. [c.144]

Кинетика реассоциации денатурированной нагреванием ДНК показывает, что эукариотическая ДНК в отличие от прокариотической содержит много повторяющихся последовательностей оснований. ДНК [c.164]

Рис. 107. К нетика реассоциации денатурированных препаратов ДНК. (Зна-чения Со/ (скорости реассоциации) отложены в логарифмическом масштабе.) в — значения ot tt уменьшаются обратно пропорционально содержанию ДНК в геномах ага и бактерии б — кинетика реассоциации ДНК тимуса теленка, стрелки указынают значения для фракций генома.

НО исследовать кинетику реассоциации однонитевых денатурирован-ных фрагментов ДНК, определяя в каждый данный момент реакции количество ренатурировавшей двуспиральной ДНК- Кинетические параметры реакции количественно характеризуют степень разнообразия последовательностей ДНК, или сложность ДНК (рис. 107, а). Скорость реассоциации ДНК пропорциональна at(v=K t), где Со — молярная концентрация нуклеотидов ДНК t — вре.мя, с. Значение oiVj, когда реассоциирует 50 % ДНК. характеризует степень сложности генома.Оказывается, что значение l U для ДНК Е. соИ < 9) примерно в 30 раз больше, чем для ДНК фага Т4 (3-10- ). Действительно, содержание ДНК в клетках . сой (5-10 п-н.) также в 30 раз больше, чем в составе частицы фага (1,7-10" п. н.). Сложность ДНК определяется общей длиной (в нуклеотидных парах) разных последовательностей ДНК. содержащихся в исследуемом образце ДНК. С увеличением степени полиплоидиза-ции сложность геномной ДНК, как и кинетика реассоциации, меняться не будет. [c.187]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология