Картирование rГ-мутаций с помощью делеций

Картирование г/ мутаций с помощью делеций [c.170]

Протяженность делеций можно определить несколькими способами. Первый из них заключается в том, что попарно скрещивают между собой фаги с различными делециями. Второй состоит в их картировании с помощью гетеродуплексного анализа. Третий заключается в том, чтобы испытать каждую делению на способность рекомбинировать с точковыми мутациями и на основании этих данных построить карту делений. Если есть время, то можно попробовать все эти методы. Как проводить картирование, подробно описано в методике 10. Поскольку нас интересует ген -лактамазы, то для выявления тех актов рекомбинации, которые привели к появлению устойчивости к ампициллину, можно использовать чащки Red (методика 7) или лизогенизацию с последующей проверкой на устойчивость к этому антибиотику. [c.39]

После того как получен набор Xdgal фагов с картированными левыми концами, уже легко оказывается определить положение неизвестных точечных мутаций относительно этих концов требуется лишь узнать, образуются ли рекомбинанты дикого типа между неизвестным мутантом и фагом соответствующей линии Xdgal. Эта методика аналогична методике картирования r/7-мутаций с помощью делеций (см. гл. 6). [c.211]

Картирование тонкой структуры с помощью делеций позволяет определтъ местоположение мутации. В табл. 34 представлены результаты попарных скрещиваний между шестью г//-делециями ("+" - наличие рекомбинантов, - отсутствие). Постройте генетическую карту с указанием относительной ДJШны каждой делеции. Какие из этих шести мутаций могли бы быть точечными и при этом результаты, представлеппые в таблице, не изменились [c.62]

Делецией называют потерю части нуклеотидов в геноме организма. Такой вид мутаций удобнее всего использовать для локализации (картирования) функционально значимых участков в генах и кодируемых этими генами белках. Действительно, последовательное удаление все новых и новых участков ДНК на границах генов с помощью делеций оказалось исключительно плодотворным в обнаружении регуляторных элементов генов, исследовании их структурно-функциональных особенностей, взаимного расположения и влияния друг на друга. В то же время укорочение полипептидных цепей белков путем введения делеций в их гены дает возможность получать мини-белки и мини-ферменты для струк-турно-функциональных исследований и биотехнологии. Простой и эффективный метод создания делеций любого размера разработан с использованием экзонуклеазы Ва131 [15]. Метод позволяет удалять нуклеотиды в окрестностях сайтов рестрикции (рис. 32). [c.287]

Для того чтобы тонкое генетическое картирование можно было осуществить на практике, необходим еще один метод. Была составлена генетическая карта для ряда мутантных бактериофагов с делециями, захватывающими большие участки гена г11. С помощью этих мутантов можно было легко определить, в каком именно участке гена соответствующего мутанта находится данная мутация. Последующие эксперименты по рекомбинации с использованием предварительно идентифицированных мутаций позволяют уточнить локализацию мутации в ранее исследованном участке гена. Таким способом Бензеру удалось идентифицировать более 300 мутаций в гене гИ. Он пришел к выводу, что минимальное расстояние между двумя мутантными участками полностью согласуется со строением гена, предложенным Уотсоном и Криком. [c.250]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология