Определение молекулярной массы полинуклеотидов

Для электрофоретического разделения различных полинуклеотидов используют эффект молекулярного сита, присущий целому ряду гелей. Детальные исследования показали, что посредством электрофореза в гелях можно получить данные о некоторых характеристиках молекул нуклеиновых кислот. Так, например, методом электрофореза можно определить молекулярную массу того или иного полинуклеотида и установить, является ли он рибо- или дезоксирибонуклеотидом. Кроме того, можно выяснить, состоит ли данная молекула из одной или двух полинуклеотидных цепей, а в случае ДНК определить, какую форму имеет молекула — линейную или кольцевую. Несмотря на существование более точных физических и химических методов определения указанных свойств, электрофорез в некоторых отношениях имеет преимущество перед ними. Оно состоит в том, что электрофоретические методы относительно просты, требуют сравнительно недорогого оборудования и могут быть использованы в тех случаях, когда для анализа доступно лишь небольшое количество неочищенного материала. Некоторые физические параметры разделенных нуклеиновых кислот изучают, не прибегая к их элюции из гелей. Например, Роз-нер и др. [1115] исследовали тепловую денатурацию нуклеиновых кислот, разделенных путем электрофореза в гелях. Фраг- [c.368]

II 1.2. Определение молекулярной массы полинуклеотидов [c.390]

В отличие от мочевины, формамид является весьма сильным денатурирующим агентом. Он полностью разрушает вторичную Структуру полинуклеотидов—как водородные связи, так и стэ- инг-взаимодействие между плоскостями гетероциклических ко-Мп нуклеиновых оснований. Электрофоретическая подвижность нуклеиновых кислот в гелях с формамидом зависит только от молекулярной массы, что открывает возможность ее определения р помощью маркеров и для высокомолекулярной РНК. [c.135]

Гоулд и Хэмлин [457] слегка модифицировали исходный метод Стайнова и др. [1226]. Они рекомендуют забуферивать формамид 0,02М диэтилбарбитуровой кислотой до pH 9,0, а затем деионизировать его с помощью амберлита. Для точного определения молекулярной массы следует построить калибровочную кривую, используя для этого полинуклеотиды с известными молекулярными массами (рис. 125). [c.392]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология