Обработка реципиентов клеток

Фактор F можно смело охарактеризовать как половой фактор. Содержащие его клетки — это и есть клетки F, в клетках F он отсутствует. Самое же странное и удивительное заключается в следующем достаточно небольшого числа клеток F, чтобы в кратчайший срок все находящиеся в пределах досягаемости клетки F превратились в клетки F. Этот процесс опережает размножение бактерий. Половой фактор размножается независимо от бактерий и быстрее, чем они, и распространяется в популяции реципиентов подобно эпидемии (к понятию эпидемический мы еще вернемся). Но случается и так, что F-фактор безвозвратно теряется, причем это может произойти как спонтанно, так и в результате облучения или обработки акридиновыми красителями (1). [c.172]

Полагают, что фактор F представляет собой фрагмент ДНК и является плазмидой, причем в клетках F эта плазмида автономна, в то время как в клетках Hfr она включена в хромосому. Это предположение подтверждается тем, что при обработке клеток F акридиновым оранжевым плазмида F утрачивается, по тот же краситель не оказывает действия на клетки Hfr. Особенностью донорных клеток является наличие на их поверхности выростов, которые называют F-пилями, играющих роль в конъюгации, в процессе которой происходит спаривание клеток ири помощи F-пилей. В свою очередь ДНК плазмиды F внедряется в хромосому клетки-донора и разрывает ее кольцевую структуру. Затем линейный участок ДНК, оканчивающийся отрезком, соответствующим ДНК плазмиды F, внедряется в клетку-реципиент. При этом участок ДНК плазмиды F редко попадает в реципиентную бактерию. В результате конъюгации образуется зигота. Донорская ДНК в зиготе может интегрироваться в хромосому реципиента, а также реплицироваться независимо от генома реципиентной клетки. Полагают, что механизм интеграции представляет собой разрыв — воссоединение . [c.110]

Рис. 15.16. Взаимоотношения между половыми типами Es heri hia oli. Клетка F может служить только реципиентом. При конъюгации с клеткой штамма F + или Hfr она может получить фактор F и в результате стать клеткой F. В клетке F + фактор F представляет собой кольцевую молекулу ДНК. Этот фактор можно удалить путем обработки клеток акридиновым оранжевым. При включении фактора F в бактериальную хромосому клетка переходит в состояние Hfr. Фактор может включиться в разные участки хромосомы и в различной ориентации от этого зависит, с какого места начнется и в каком направлении будет происходить перенос хромосомы (показано красными стрелками). В случае неправильного выключения фактора F из хромосомы он может превратиться в фактор F, содержащий кусочек хромосомной ДНК.

Часть полученной таким образом культуры пневмококков переносили на среду со стрептомицином, убивающим все нетрансформированные клетки. В результате указанной обработки остаются только устойчивые к стрептомицину клетки и им можно дать количественную оценку. В опыте Хочкиса получилось около 17% трансформн-рованных клеток. Эга величина зависит от многих факторов, например от подбора клёток-реципиентов. Некоторые штаммы характеризуются весьма высокой восприимчивостью к трансформирующему фактору. Трансформация определяется также концентрацией ДНК и временем ее воздействия на клетки. Наиболее удачным для трансформации моментом является период, наступающий сразу же после клеточного деления. [c.85]

Для восстановления их функции после обработки проназой эмбрионы культивировали в течение 3 ч. Затем эмбрионы без прозрачной оболочки культивировали в течение 1 ч в антисыворотке к клеткам печени овцы, три раза отмывали и помещали в раствор (1 4) сыворотки крови морской свинки на 1 ч. Лизированные клетки трофобласта удаляли пипетированием, а изолированную внутреннюю клеточную массу вводили проколом инъекционной пипетки через зону пеллюциду в трофобласт бластоцисты реципиента. После пересадки этих бластоцист получены химерные ягнята как по признакам фупп крови, так и по внешним признакам. [c.215]

Препарат хромосом человека, не содержащий примеси клеток, может быть получен при соответствующей обработке, вскрывающей плазматическую и ядерную мембраны клетки. В семидесятых годах были разработаны методы фракционирования и проточной микрофлуоримет-рии, позволяющие осуществлять сортировку хромосом на фракции, содержащие индивидуальные хромосомы человека высокой чистоты (рис. 18.13). Когда свободные хромосомы добавляют к культивируемым клеткам мыши, то эти клетки могут захватывать целые хромосомы в процессе эндоцитоза. Внутри реципиентной клетки захваченные хромосомы обычно деградируют, распадаясь на фрагменты. Если такие фрагменты содержат центромерные области, то они могут поддерживаться как единое целое. Фрагменты, лишенные центромеры, могут транслоцироваться на мышиные хромосомы. В том и другом случае определенные человеческие гены будут экспрессироваться в гибридных клетках (рис. 18.14). Встраивание фрагментов в хромосому мыши происходит с очень низкими частотами, от 10 " до 10 на клетку. Встраиваемые фрагменты могут быть как очень мелкими, не видимыми в световой микроскоп, так и достаточно крупными, включая плечи хромосом и даже целые хромосомы. Такой перенос генетического материала от донора, сопровождающийся встраиванием в хромосомы реципиента, называется трансформацией (как у бактерий) или трансфекцией. [c.304]

Мышам вводили 20 мкг мышиного тиреоглобулина (Тг) для индукции толерантности (контроль - без индукции толерантности). Половине толерантных животных затем инъецировали in vivo элиминирующие антитела анти-С04 для истощения пула Т-клеток D4+. Клетки селезенки каждой мыши из этих трех групп (нетолерантные мыши толерантные мыши толерантные мыши, получившие анти-С04) переносили облученному сингенному реципиенту. Затем реципиентам вводили мышиный Тг и ЛПС, после чего определяли продукцию антител против Тг при помощи иммуно-ферментного анализа (ELISA, см. гл. 29). Обработка антителами анти-С04 устраняла перенос толерантности. [c.243]

Иммунокомпетентные клетки донора А введены реципиенту С, предварительно подвергнутому иммуносу-прессивной обработке (Х-облучение), или нормальному реципиенту (А х В)Р1. Организм облученного реципиента С не способен отторгнуть клетки А, а животные Р1 полностью толерантны к клеткам родительской линии А. В обоих случаях клетки донора А распознают чужеродные антигены реципиентов В или С. Они делятся, реагируют на тканевые антигены реципиента и привлекают большое число клеток хозяина в область воспаления. Очень часто этот процесс ведет к гибели реципиента. [c.492]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология