Методы анализа ферментных препарато

Первый раздел Практикума должен помочь студентам освоить методические приемы и основы аналитической биохимии. Он содержит описание основных принципов и методов концентрационного анализа, принятых в биохимии (спектрофотометрического, колориметрического, манометрического), в частности, для количественного определения гликогена, глюкозы, неорганического фосфата, фосфорных эфиров углеводов, молочной и пировиноградной кислот. В раздел включены работы, посвященные анаэробному превращению углеводов. Каждая задача, выполняемая студентом, предусматривает анализ чистоты исходного препарата углевода или его фосфорного эфира, получение ферментного препарата (гомогената или экстракта ткани), постановку биохимического эксперимента, количественную оценку результатов. Количественное определение веществ проводится несколькими методами, результаты сопоставляются. Так, выполняя задание по теме Превращение фруктозо-1,6-дифосфата в молочную кислоту , студент анализирует фруктозо-1,6-дифосфат по фруктозе и по фосфату, молочную кислоту определяет спектрофотометрическим и колориметрическим методами. Подобным образом выполняются работы, связанные с превращением других фосфорных эфиров углеводов, гликогена, глюкозы. [c.5]

Определение активности ферментных препаратов основывается на методах аналитической и физической химии (метод титрования, колориметрия, спектрофотометрический анализ, измерение вязкости, нефелометрия, поляриметрия, рефрактометрия, потенциометрия). [c.27]

Во второй том 11-го издания включены общие методы анализа, в том числе отбор проб лекарственных средств, стерилизация, определение активности ферментных препаратов, определение цинка в препаратах инсулина, определение консервантов в гормональных препаратах, индикаторы, реактивы и др. Включены общие статьи на лекарственные формы (аэрозоли, капли глазные, гранулы, инъекционные лекарственные формы, мази и т. д.), лекарственное растительное сырье. [c.400]

Вполне уместно завершить эту книгу разделом о кристаллизации ферментов, поскольку получение кристаллов част представляет собой конечную стадию очистки и изучения фермента. Часть этого раздела следовало бы поместить в гл. 3,, потому что кристаллизация как метод осаждения—это очень-хороший и часто используемый способ очистки ферментов. Но-все же более уместно обсудить его в общих чертах в этом разделе. Кристаллизация играет важную роль в научных исследованиях по меньшей мере четырех типов она используется -1) как метод очистки ферментов, 2) для подтверждения гомогенности ферментных препаратов, 3) как метод стабилизации ферментов при хранении и 4) для определения третичной структуры ферментов методом рентгеноструктурного анализа. [c.332]

Перед использованием аффинного сорбента рекомендуется отмыть его от 0,02%-ного азида натрия, который обычно добавляется в коммерческие препараты для предотвращения биодеградации носителя. Примеси белков или свободного лиганда удаляют кратковременной промывкой 1 М раствором уксусной кислоты с последующей тщательной промывкой обычным нейтральным буферным раствором. Перед нанесением образца на колонку необходимо определить специфическую активность исследуемого белка. Концентрацию белка целесообразно определять с помощью иммунохимического метода, например иммуно-ферментным или радиоиммунным анализом. [c.185]

Помимо прямого пути - изолирования ферментных препаратов и изучения их химическим - наметились косвенные пути исследования, которые принесли, однако, большие плоды, ""Один из этих косвенных путей, - писал В. А.Энгельгардт, - это применение ядов, или таких реактивов, которые действу-, ют на определенные химические группировки. Далее идет метод спектрального анализа. Следующий прием изучения -это использование так называемых ферментных моделей, искусственное создание таких систем, которые воспроизводят свойства фермента, дают возможность изучения зависимости этих систем от их химической структуры и таким образом открывают подход к выяснению свойств и структуры самого фермента как такового. [c.141]

Применение иммобилизованных ферментов, позволяющих проводить массовые химические анализы в отдельных пробах или в потоке (с многократным использованием одного и того же препарата фермента), в значительной степени снимает проблему высокой стоимости ферментных методов анализа и зачастую повышает точность аналитического метода. Существуют два общих подхода к аналитическому определению концентрации реагентов (субстратов) в исследуемой системе. В одном из них ферментативную реакцию доводят до полного израсходования определяемого вещества (или до установления в системе равновесия между исходными реагентами и продуктами реакции), регистрируя при этом изменение какого-либо подходящего физического или химического свойства системы, и по количеству образовавшегося продукта рассчитывают количество субстрата в исходном образце. Во втором подходе используют кинетические методы анализа для определения скорости появления продукта или исчезновения субстрата в ферментативной реакции и вычисление исходной концентрации субстрата по соответствующей калибровочной кривой. Этот метод применим также для определения концентрации эффекторов (ингибиторов или активаторов), присутствующих в реакционной системе. Оба данных подхода были реализованы на практике с применением иммобилизованных ферментов. [c.16]

Для широкого внедрения ферментных методов анализа в медицину, экологию и технологическое производство необходимо было решить несколько практически важных задач найти более дешевые и доступные источники ферментов, повысить стабильность биокатализаторов, сделать возможным многократное использование препаратов. Это достигается методами биотехнологии, технической микробиологии и генной инженерии. [c.87]

При помощи ферментов производятся точные количественные определения содержания, кроме сахара, также молочной, пировиноградной и а-кетоглютаровой кислот. Такие данные важны для понимания нарушений в обмене веществ в организме. С использованием ферментов связано и определение аденозинтрифосфор-ной, аденозиндифосфорной и аденозинмонофосфорной кислот, позволяющее узнать о количестве мобильных энергетических резервов, об их превращениях и утилизации в обмене веществ. Методы биохимического и клинического анализов, основанные на применении ферментных препаратов, как реактивов, обычно чувствительны и точны. [c.315]

Однако в последней четверти XIX в. начинаются систематические исследования химичес кой природы ферментов. На первых порах эти исследования не простираются далее использования цветных реакций и проведения анализов элементарного состава ферментных препаратов. В 1883-1885 гг, И.Визнер пытается даже разработать специ()и1ческий реактив на ферменты. В качестве такового он предложил спиртовой раствор орцина для обработки фермента в присутствии соляной кислоты (45). При этом он указал, что различные ферменты дают окрашивание различного оттенка, и построение соответствующей цветовой шкалы может помочь их идентификации. Но этот метод оказался естественно совершенно неспецифичным, и от него отказались сразу же, так же как и от предложений распространить гваяковую пробу Шёнбайна на все ферменты помимо окислительных. [c.125]

При анализе методом двойной иммунодиффузии препарат GGT, очищенный из почек быка с применением иммуноаффинной хроматографии, дает с гомологичными антителами три отдельные дуги преципитации, каждая из которых проявляет GGT-активность. Ферментный препарат может быть также разделен на четыре активные фракции изоэлектрическим фокусированием. GGT из почек крысы, очищенная на иммуноадсорбенте, дает с гомологичными антителами две дуги преципитации, обладающие ферментативной активностью. Эти наблюдения подтверждают предположение, что GGT присутствует в виде нескольких молекулярных форм, которые могут отличаться по содержанию сиаловой кислоты. Тэйт и Мейстер [34] впервые продемонстрировали, что чистая легкая форма GGT из почек крысы может быть разделена на несколько ферментных форм. Эти наблюдения делают очевидным тот факт, что молекулярные формы, очищенные на иммуноадсорбентах, иммунологически неразличимы. [c.162]

При анализе ферментов или при определении требующихся кофакторов ферментные препараты иногда содержат ингибиторы с низкой молекулярной массой или собственно кофакторы. При изучении некоторых молекул физическими методами (например, флуоресцентной спектроскопией) в образце могут присутствовать вещества, искажающие результаты. Такие небольшие молекулы можно легко удалить на геле декстрана или полиакриламида. [c.203]

В результате очистки подучен ферментный препарат протеазн, содержащий 85 белка и обладающий активностью 1 0 ед/г препарата (степень очистки по активности - в Ш раз, по-.бедку - в 10 раз). Раствор фермента (4 мг/мл) имеет характерную для белков кривую поглощения в ультрафиолетовой зоне спектра с максимумом при 278 нм. Молекулярная масса- протеазы, определенная методами седиментационлого анализа и электрофореза в ПААГ в присутствии /-додецилсульфата, равна 45 ООО (рис.20). [c.75]

В настоящее время 30% всех иммуноанализов в США включают применение изотопных меток. Остальные 70% выполняются в основном с помощью методов, в которых роль меток выполняют флуорофоры или ферменты. Применение нефелометрии ограничено анализом иммунных белков. Инфекционные заболевания в основном диагностируют с помощью гетерогенных методов с применением ферментных меток и бусин в качестве носителей, хотя 30% анализов выполняются с помощью более дешевых методик типа РИА. Контроль лекарственных препаратов осуществляют с помощью гомогенных методик, включающих применение ферментных меток или регистрацию поляризации флуоресценции. В случае анализа гормонов имеется большой выбор как гомогенных, так и гетерогенных методик с радиоактивными, ферментными и флуоресцентными метками. Доля неизотопных методов составляет 65% и имеет тенденцию к росту. Альтернативные методы йммуноана-лиза часто используются внутри определенной диагностической группы, например в анализах на тиреоидный статус. В США наиболее важным фактором является стоимость анализа, а различные технические аспекты обычно имеют второстепенное значение. В частности, 50% инструментального парка, используемого в иммуноанализе, работает с промышленно выпускаемыми реагентами. [c.19]

В работе [17] находили содержание добавленного к пробам крови этанола с помощью ферментного сенсора на основе Оз-электрода, используя коммерческие препараты алкогольоксидазы из andida boidinii. Отклонение результатов от полученных методом газовой хроматографии составило всего 2,5%. Сенсор на основе алкогольоксидазы использовали также в проточной системе для определения этанола в пиве [61]. Отклик сенсора линейно зависел от концентрации этанола до 30 ммоль/л, половина срока службы составляла 6,5 дней, частота измерений 60 анализов в час. Эта система позволяет довольно точно определять этанол в пиве. [c.269]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология