Прямая локализация антител

ПРЯМАЯ ЛОКАЛИЗАЦИЯ АНТИТЕЛ [c.299]

Главное внимание исследователей было сосредоточено на попытках локализовать методом иммунной электронной микроскопии белки 30S субчастицы Е. соИ. Однако, несмотря на возможность получения специфических антител ко всем 21 индивидуальным белкам, эта задача оказалась не простой, и метод дал много ложных локализаций. Дело в том, что этот метод, кажущийся столь прямым и демонстративным, таит опасности различных артефактов, обусловленных недостаточной очисткой антител, неспецифическим присоединением антител к некоторым участкам поверхности частиц, искажением специфического положения антитела на частице вследствие ее ориентации на подложке и т. д. Тем не менее, в настоящее время можно выделить наиболее надежные результаты в отнощении 30S субчастицы. Первой такой надежной локализацией было, по-видимому, определение положения белка S14 на головке частицы (рис. 65) антигенный детерминант белка был найден на поверхности головки со стороны, противоположной боковому выступу ( платформе ) 30S субчастицы (рис. 68). Недалеко от него были локализованы также антигенные детерминанты белков S10 и S19. Ниже этой группы белков, в районе борозды, разделяющей головку и тело, был локализован белок S3, а еще ниже, близко к борозде, но уже на теле субчастицы, белок S5 (рис. 68). Белки S6 и S11 были локализованы по другую сторону 30S субчастицы, а именно на ее боковом выступе ( платформе ). Белок S8, согласно иммунной электронной микроскопии, располагается также у бокового выступа, где-то между ним и телом, на внешней (обращенной от 50S субчастицы) стороне 30S субчастицы. [c.112]

Этот метод сводится к локализации антител путем прямого связьшания с флуоресцирующим антигеном. [c.299]

При механической желтухе в плазме больных обнаруживается особый липопротеид (Lp-X), который по своей плотности принадлежит к ЛНП и обладает характерным липидным и белковым составом. Выявление Lp-X на электрофореграмме основано на его миграции к катоду при обычных условиях электрофореза в агаровом геле. Для увеличения катодной подвижности Lp-X пластины агарового геля необходимо выдерживать перед электрофорезом не менее 6 ч [990, 1166]. Надежная локализация этого белка стала возможной благодаря применению специфических антисывороток [1164]. Петек и др. [990] сравнили три различных способа проведения иммунопреципитации. При первом способе антисыворотку помещают в канавки, подобно тому как это делается при иммуноэлектрофорезе по методу Шайдеггера. Во втором способе после электрофореза в геле вырезают круглые лунки для антител на расстоянии 4 мм от лунок для антигена. В обоих случаях время, необходимое для диффузии, составляет 12—16 ч. Второй способ является более экономным с точки зрения расходования антисыворотки. При использовании третьего способа (иммунофиксация) антисыворотку прямо наносят на поверхность геля на расстоянии [c.355]

Были сделаны попытки установить местоположение фитохрома в клетке. Наиболее прямой подход состоит в использоваиии иммуиоцитохимйческих методик. Для этого сначала получают кроличьи антитела против чистого фитохрома и обрабатывают ими срезы растительных тканей. Молекулы кроличьих антител взаимодействуют с молекулами фитохрома, находящегося в клетке. Затем срез обрабатывают бараньей антисывороткой к кроличьим антителам, что приводит к образованию кроличьего аитипероксидазио-пероксидазного комплекса, так что каждая молекула фитохрома метится ферментом пероксидазой, локализацию которого можно определить гистохимическими методами (рис. 8.7). Таким путем было установлено, что фитохром в форме Рк не имеет строгой локализации в клетке и может находиться в митохондриях и пластидах, а также в цитоплазме, ио не в ядрах или вакуолях. Одиако, перейдя в форму Р дк в [c.307]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология