Иммунофиксация

Плоскостной электрофорез имеет те же преимущества, что и плоскостная хроматография, т. е. позволяет на одной элект-рофореграмме сравнивать одновременно несколько образцов. Методом электрофореза можно, как и в двумерной бумажной или тонкослойной хроматографии, разделять вещества в двух направлениях, в частности в буферах с различным значением pH. Возможен и другой вариант, когда для разделения в двух взаимно перпендикулярных направлениях используют различные носители. Например, сначала проводят электрофорез в узкой полоске агарозного геля, в котором подвижность молекул определяется их зарядом, а затем — в пластинке агарозного геля, в котором вещества разделяются в соответствии с размерами их молекул. Способы качественного и количественного анализа электрофореграмм сходны с используемыми в бумажной и тонкослойной хроматографии. Белки можно обнаруживать также с помощью моноспецифических антител (иммунофиксация). [c.29]

Этот же принцип Альпер и Джонсон использовали для иммунофиксации белков после электрофореза в крахмальном геле [27]. При этом они увеличивали время инкубации с антителами до 2 ч и затем тщательно отмывали гели в солевом растворе и воде. Гель окрашивали так же, как при обычном электрофорезе в крахмальном геле. [c.246]

Фельгенхауэр [370] проводил иммунофиксацию белков после микроэлектрофореза в полиакриламидном геле. Гель помещали в небольшие сосудики, содержавшие 50—60 мкл антисыворотки. Преципитация происходила при 4°С в процессе встряхивания сосудиков. Преципитаты окрашивали после удаления непрореагировавшего белка путем промывания гелей. Крейг и Вайхер [716] предложили аналогичную методику для столбиков геля обычных размеров. Коттон и Мильштейн [249] разде-, ляли белки методом изоэлектрофокусирования на пластинах полиакриламидного геля. Затем электрофореграммы покрывали полосками фильтровальной бумаги (ватман № 3 ММ), пропитанными антисывороткой в соответствующем разведении. Гель вместе с полосками фильтровальной бумаги инкубировали в течение 24 ч при 37 °С во влажной атмосфере. После интенсивного промывания гель окрашивали. При разделении радиоактивных антигенов высушенные гели подвергали радиоавтографии. [c.246]

Рис. 110, Генетически детерминированные варианты обогащенного глицином Р-гликопротеида (В-фактора), выявляемые с помощью электрофореза в агарозном геле при pH 8,6 и последующей иммунофиксации специфической антисывороткой [29]. / — тип 55 //-тип Р8 ///-тип РР.

При механической желтухе в плазме больных обнаруживается особый липопротеид (Lp-X), который по своей плотности принадлежит к ЛНП и обладает характерным липидным и белковым составом. Выявление Lp-X на электрофореграмме основано на его миграции к катоду при обычных условиях электрофореза в агаровом геле. Для увеличения катодной подвижности Lp-X пластины агарового геля необходимо выдерживать перед электрофорезом не менее 6 ч [990, 1166]. Надежная локализация этого белка стала возможной благодаря применению специфических антисывороток [1164]. Петек и др. [990] сравнили три различных способа проведения иммунопреципитации. При первом способе антисыворотку помещают в канавки, подобно тому как это делается при иммуноэлектрофорезе по методу Шайдеггера. Во втором способе после электрофореза в геле вырезают круглые лунки для антител на расстоянии 4 мм от лунок для антигена. В обоих случаях время, необходимое для диффузии, составляет 12—16 ч. Второй способ является более экономным с точки зрения расходования антисыворотки. При использовании третьего способа (иммунофиксация) антисыворотку прямо наносят на поверхность геля на расстоянии [c.355]

Отметим еще одно преимущество использования агарозы для ИЭФ в пластинах. Благодаря крупнопористости гелей агарозы и, следовательно, легкости выхода из них белков для их идентификации можно использовать иммунофиксацию. Для этого на влажный гель агарозы после окончания ИЭФ накладывают на 12 ч лист фильтровальной бумаги, пропитанной антисывороткой. Выходящие из агарозы в бумагу антигены образуют в ней иммунопреципитаты, которые можно обнаружить одним из методов, подробно описанных в следующей части книги. С помощью такого приема недавно была продемонстрирована микрогетерогенность тироксин-связывающих глобулинов сыворотки человека [ВитеЦ е а ., 1980]. [c.45]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология