Анализ третьей группы (первый способ)

Способы получения требуемых последовательностей нуклеотидов из клонотек генов можно разделить на три группы. При использовании первой группы методов рекомбинантные бактерии или фаговые частицы исследуют на присутствие в них искомых последовательностей нуклеотидов путем последовательного перебора случайных клонов. При таком подходе, получившем название скрининга, творческие усилия исследователя направлены только на облегчение самого процесса анализа клонов, например, на его автоматизацию. Во втором случае, присутствие нужных последовательностей обнаруживают косвенно, по появлению в бактериальных клетках или фаговых лизатах бляшек продуктов экспрессии искомых генов - РНК, белков или ферментативной активности, т.е. определенного фенотипа, который отличает такие клоны от соседних, не содержащих соответствующих последовательностей. В этом случае исследователь среди большого количества суммарных клонов осуществляет выбор тех, которые резко отличаются от соседних по своему фенотипу, например, цвету колоний. При таком подходе производится выбор требуемого фенотипа среди большого числа других фенотипов. Реализация третьего подхода требует создания селективных условий, при которых преимущество в размножении получают те клоны, которые отвечают требованиям отбора, например, приобрели способность к росту на селективных питательных средах в присутствии антибиотика или в отсутствие аминокислоты в случае исходно ауксотрофного штамма. Последний подход, кроме своего необыкновенного изящества в замысле, демонстрирует самую высокую эффективность, так как позволяет в одно касание освободиться от всех нежелательных примесей в виде ненужных клонов. [c.162]

Очевидно, что точность определения концентрации любых функциональных групп таким способом будет зависеть от точности измерения следующих величин. Во-первых, это интенсивность световых потоков падающего — /о и прошедшего — I через анализируемый образец. Во-вторых, молярное поглощение — е (V) искомой атомной группировки на той частоте, на которой проводится анализ. Эта величина всегда вычисляется из оптических плотностей эталонных образцов с известной концентрацией искомых группировок и позтому тоже определяется точностью измерения световых потоков, или, иначе, коэффициента пропускания образца. Наконец, в-третьих, если используется пе метод внутренних стандартов, то совершенно очевидно, точность количественных измерений будет зависеть от величины относительной ошибки, допускаемой при нахождении толщины образца. [c.178]

Такая расшифровка полос спектра проводится следующими четырьмя способами. Первый способ—-чисто эмпирический и наиболее широко используемый—состоит в получении большого числа спектров соединений, молекулы которых содержат какую-то общую структурную единицу затем все эти спектры сравнивают между собой, находят общую, остающуюся приблизительно постоянной частоту и приписывают ее этой структурной единице. Успех такой операции обусловлен тем обстоятельством, что колебательные энергии и частоты определяются в основном массами атомов и сравнительно сильным взаимодействием между валентно связанными атомами и между связями этих атомов взаимодействие между валентно несвязанными атомами и между отдаленными связями неизмеримо слабее. Таким образом, хотя каждое колебание является, строго говоря, колебанием всей молекулы в целом, механическое взаимодействие между отдельными связями обычно настолько незначительно, что разрешает приписать отдельные колебания индивидуальным связям и группам. Во втором методе, который является полуэмпирическим развитием первого, спектр сложной молекулы сравнивается с поддающимся математической обработке спектром очень простого соединения, содержащего идентичные структурные группы анализ спектра простого соединения дает возможность расшифровать спектр гораздо более сложного вещества. Третий метод заключается в сравнении инфракрасного и раман-спектров одного итого же соединения правила отбора для процессов поглощения и рассеяния различны, и ко- [c.365]

При анализе неизвестных галогенорганических соединений когда энергию связи заранее оценить нельзя, рекомендуются способы разложения третьей группы. Дополнительным преимуществом этих способов по сравнению со способами двух первых групп является то, что в качестве реагента в них используют газ, который обычно имеется в очень чистом виде (или легко очищается), и поэтому избыток его не загрязняет раствор, содержащий галогенид-ионы, и не увеличивает в нем концентрацию посторонних ионов. [c.350]

Точность измерительных приборов и правильное выполнение первой и третьей операций очень важны, без этого невозможно получить точные результаты анализа. Однако, когда говорят о том или другом методе анализа, имеют в виду прежде всего определенную реакцию или последовательность реакций. Поэтому разделение методов химического количественного анализа на отдельные группы связано с химической реакцией. Прежде всего принимается во внимание способ использования реакции и затем тип химической реакции. [c.22]

Рассмотрим теперь, как влияет разница (20—25%) в количестве проб и эталонов на результаты анализа. Для этого из канала угольных электродов (диаметр канала 2 мм, глубина 5 мм) в стандартных условиях испаряли пробу, приготовленную на основе угольного порошка и содержащую по 0,1 % железа, алюминия и меди по 0,02% олова, хрома и никеля и 0,01% серебра. Результаты фотометрирова-ния сравнивали с данными, полученными при испарении отличающегося на 20—25% количества пробы. За эталон были приняты электроды, заполненные при помощи вибратора (группа № 1). При этом в канале помещается 11 мг пробы. Количество пробы изменяли четырьмя различными способами. По первому способу канал заполняли вручную без вибратора (группа № 2), что позволило увеличить количество пробы в канале до 13 мг. По второму способу группу электродов заполняли при помощи вибратора только на 80% (группа № 3). По третьему способу (группа № 4) канал электродов снача- [c.71]

Денситометрические методы были применены к трем группам веществ, являющихся характерными представителями целого ряда веществ, весьма удобных для анализа таким способом. Первая группа — Соп1ит алкалоиды — представляет собой ненасыщенные соединения, поэтому даже при успешном элюировании малые количества их нельзя определить спектрометрически в ультрафиолетовой области. Для этих целей Ферберн и др. [16] разработали методику газовой хроматографии, но она оказалась недостаточно чувствительной. Вторую группу — алкалоиды опиума— можно проанализировать методом хроматографии на бумаге с количественным определением в зонах путем измерения площади зон [7]. Но хотя этот метод весьма надежен, он достаточно трудоемок. Для третьей группы — алкалоидов митрагины — Шеллард и Элам [17] предложили ТСХ-систему, в которой конечные зоны были красного цвета на белом фоне, что весьма удобно для денситометрии. Благодаря этой [c.25]

Все методы, применяемые для наблюдения за процессом выделения белков и фракционирования смесей, в которых содержатся белки, можно подразделить на три группы. В первую группу входят главным образом методы определения общего содержания белка. Сюда могут быть также отнесены методы анализа других классов веществ, с которыми соединяются белки, например липи-дов, углеводов и нуклеиновых кислот. Вторая группа охватывает специфические (химические или биологические) методы определения индивидуальных составных частей смеси. Каждая предполагаемая составная часть должна быть определена в отдельном опыте с помощью другого метода. Эти методы, особенно некоторые биологические способы анализа, различаются по своей чувствительности и специфичности. К третьей группе относятся методы (преимущественно физико-химические) оценки гомогенности белковых препаратов. В пределах применимости используемых методов при каждом из таких определений учитывается все количество белка. [c.16]

Предположение о согласованности в нативной конформации белка всех внутримолекулярных взаимодействий открывает принципиальную возможность для поэтапного, фрагментарного подхода к решению проблемы структурной организации белковой макромолекулы. Это можно осуществить путем последовательного анализа трех видов взаимодействий, определяющих конформационное состояние каждого аминокислотного остатка в трехмерной структуре. К ним следует отнести, во-первых, взаимодействия атомов одного остатка между собой и с атомами двух смежных пептидных групп (ближние взаимодействия), во-вторых, взаимодействия остатка с соседними в последовательности остатками (средние взаимодействия) и, в-третьих, взаимодействия остатка с удаленными по цепи остатками (дальние взаимодействия) (рис. 1.1). Предложенное разделение взаимодействий до некоторой степени условно. Однакр среди возможных других оно представляется наиболее естественным и, как можно будет убедиться впоследствии, удобным с методологической точки зрения. Выделение трех видов невалентных взаимодействий (а не двух или четырех) не является полностью формальным, так как они довольно четко различаются по своим функциям в организации пространственной структуры молекулы белка. Но главное все же состоит не в способе разделения взаимодействий. Последовательное рассмотрение ближних, средних и дальних взаимодействий, как и взаимодействий, разделенных иным способом, может иметь смысл и привести к предсказанию нативной конформации белка только в том случае, если отобранные на предшествующих этапах наборы конформационных состояний аминокислотных остатков будут непременно включать состоя-Иия, удовлетворяющие условиям последующих этапов. Гарантом здесь Является постулированное в теории положение о согласованности всех видов взаимодействий валентно-несвязанных атомов в нативной конформации белка. [c.105]

Для качественного анализа и установления структуры сме сеи ХМС дает различные возможности Во первых это полные масс спектры компонентов, являющиеся как бы отпечаткамп пальцев молекулярной структуры и характеризующие молеку лярную массу и массы основных структурных фрагментов, по которым можно установить их состав и наличие определенных функциональных групп Масс спектры высокого разрешения позволяют с большой точностью установить элементный состав молекулярного и осколочных ионов а значит, и структур исходной молекулы Во вторых, масс хроматограммы дают воз можность определить времена удерживания (или индексы удер живания) дтя всех разделенных компонентов, причем благода ря селективному ионному детектированию и специальным мето дам обработки данных степень разделения масс хроматограмм как правило, значительно выше, чем обычных хроматограмм регистрируемых другими хроматографическими детекторами Селективный характер детектирования с помощью масс спект рометра позволяет выделить определенные классы веществ из сложной и даже неразделенной хроматограммы В третьих, разные методы ионизации обладают селективностью по отно шению к некоторым структурным или функциональным особен ностям анализируемых молекул Выбирая соответствующий способ ионизации, можно осуществить селективный анализ оп ределенных типов структур или удостовериться в наличии опре деленных функциональных групп [c.89]