Гель-электрофорез маркеры с известными молекулярными массами

При разделении нуклеиновых кислот используют те же методы, что и при фракционировании белков, однако имеются ограничения, обусловленные большим диапазоном величин молекулярной массы (2-10 —Ы0 ° Да), отклонениями от глобулярной формы, различиями в четвертичной структуре (двухнитевые, однонитевые, кольцевые), значительным отрицательным зарядом в нейтральной области pH. Поэтому методы гель-фильтрации и ионообменной хроматографии не получили широкого распространения при фракционировании нуклеиновых кислот и значительно уступают ультрацентрифугированию и электрофоретическому разделению в геле агарозы, полиакриламидном геле или их смеси. Поскольку величина отрицательного заряда нуклеиновых кислот и продуктов их расщепления мало зависит от pH, а отношение заряда к молекулярной массе сохраняется практически неизменным, разделение нуклеиновых кислот при электрофорезе определяется не их зарядом, а размером молекул. При наличии маркеров с известной молекулярной массой возможно определение молекулярной массы препаратов нуклеиновых кислот и их фрагментов. [c.171]

Помимо указанных методов для разделения гистонов и определения их молекулярной массы широко применяют электрофорез в полиакриламидном геле, содержащем ДСН. Следует,, однако, иметь в виду, что при определении молекулярной массы гистонов методом электрофореза в полиакриламидном геле иногда получают ошибочные результаты, если для построения калибровочной кривой используют белки с усредненным аминокислотным составом. Этой опасности можно избежать, приме> нив в качестве маркеров гистоны с известной молекулярной массой [964]. [c.307]

Электрофоретическая подвижность и ) жесткого комплекса белок—ДДС-На оказывается связанной с молекулярной массой белка (Л1) простым соотношением и =А—В lg М, где А и В — коэффициенты, зависящие от пористости геля, температуры и других условий эксперимента. Величину и удобнее представлять в относительных единицах, выражающих отношение путей миграции белка и бромфенолового синего за время электрофореза, т. е. в знaчjeнияx введенной ранее величины / /. Такая замена отразится только на значениях коэффициентов Л и В. Нет смысла определять эти коэффициенты в каждом опыте. Одновременно с фракционированием исследуемой смеси можно провести электрофорез набора белков- марке-ров , молекулярные массы которых точно известны. Разумеется, вся предварительная обработка ДД -Na и меркаптоэтанолом должна быть строго одинаковой для исследуемого препарата и маркеров. При электрофорезе в пластине для смеси маркеров можно отвести отдельный трек. При использовании трубок маркеры лучше добавить прямо в препарат, так как нельзя гарантировать строгой даентичности условий электрофореза в двух разных трубках, д [c.57]

Во многих случаях электрофореза, описанных ниже, бывает желательно оценить молекулярные размеры (или молекулярную массу) фракционируемых нуклеиновых кислот. Для этой цели удобно иметь набор молекул того же типа, но известной длины. Проведя разделение смеси таких маркеров в отдельном треке пластины геля, можно сопоставить положение полосы исследуемой нуклеиновой кислоты в параллельном треке с расположением полос маркерного набора. Для РНК с этой целью используют тРНК, 5S, РНК,, рибосомальные и другие РНК известного размера. Для ДНК роль маркеров выполняет обычно набор фрагментов известной длины, полученных при расщеплении хорошо [c.125]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология