Полиэдрин

Бакуловирусы инфицируют только беспозвоночных, в том числе многих насекомых. В ходе инфекционного процесса образуются две их формы. Одна представлена отдельными вирио-нами, которые высвобождаются из инфицированной клетки хозяина, как правило клетки средней кищки, и способны инфицировать другие клетки этого органа. Вторая состоит из множества вирионов, заключенных в белковый матрикс. Белок этого матрикса называется полиэдрином, а сама структура - полиэдроном. Синтез полиэдрина начинается через 36-48 ч после инфекции и продолжается 4-5 сут, пока зараженные клетки не лизируют и хозяйский организм не погибнет. После этого множество таких частиц высвобождается и попадает в среду, где от инактивации их защищает белковый [c.143]

Промотор гена полиэдрина чрезвычайно сильный, а цикл развития вируса не зависит от наличия самого гена. Следовательно, замена последнего геном чужеродного белка с последующей инокуляцией полученным рекомбинантным бакуловирусом культуры клеток насекомого может привести к синтеззу большого количества гетерологичного белка, который благодаря сходству систем внесения посттранс-ляционных модификаций у насекомых и млекопитающих будет близок (а возможно, и идентичен) к нативной форме того белка, который интересует исследователя. Исходя из этого на основе бакуловирусов были разработаны векторы для экспрессии генов, кодирующих белки млекопитающих и вирусов животных. [c.144]

Рис. 7.9. Замещение гена полиэдрина A MNPV единицей экспрессии транспортного вектора в результате двойного кроссинговера в 5 - и 3 -фрагментах.

Система на основе бакмид позволяет создать еще одну плазмиду Е. соИ, в которой между промотором и сайтом терминации гена полиэдрина встроен ген-мищень (плазмида-донор). В донорной плазмиде ген устойчивости к гентамицину и единица экспрессии гена-мищени фланкированы нуклеотидными последовательностями, которые [c.147]

Полиэдрин (Polyhedrin) Белок капсида бакуловирусов накапливается в больших количествах в ядрах пораженных клеток насекомых. [c.557]

Интерес к бакуловирусам как потенциальным переносчикам рекомбинантных генов и системам, обеспечивающим их экспрессию, возник после обнаружения их способности к синтезу большого количества вирусных белков на поздних стадиях инфекции. В частности, это касается вирусных полиэдрина и белка р10, гены которых находятся под контролем сильных поздних промоторов и которые могут быть удалены без ущерба для размножения вирусов. Поэтому замещение указанных генов рекомбинантными сопровождается усиленной экспрессией последних. [c.182]

Интерфероновые гены клонированы в экспрессирующих векторах в бактериальных и дрожжевых клетках, в клетках насекомых и млекопитающих. В качестве промоторов использовали переносные промоторы Пташне и сотр. [235], промотор фага Я, [55], промотор полиэдрина [224а] и промотор 1гр [78, 278]. Интерфероны также экспрессировали в виде гибридного белка [c.44]

Субгруппа А состоит из вирусов ядерного полиэдроза (КРУ), которые в процессе внутриклеточного развития образуют в ядре клетки кристаллические белковые тела включения — полиэдры, более или менее геометрически правильная форма и размеры которых являются специфичными для каждого вида вируса. Полиэдры состоят из белка полиэдрина, и размеры их колеблются от 1 до 15 мкм. При кристаллизации полиэдрина в ядрах клеток палочковидные вирусные частицы, формирующиеся здесь же, во множестве попадают внутрь полиэдров. Поверхность полиэдров покрывается полисахаридной мембраной. [c.415]

Регуляторные механизмы, обеспечивающие синтез полиэдрина или гранулина, представляют значительный интерес, так как эти белки продуцируются в больших количествах, чем ка-кие-либо другие известные вирусные белки, синтезируемые при инфицировании эукариотических клеток. Полиэдрин к исходу инфекции [c.415]

Важно отметить, что полиэдрин, синтезирующийся в цитоплазме клетки, транспортируется в ядро, где он кристаллизуется. Возможно, таким образом полиэдрин удаляется из внутриклеточного пула, что уменьшает негативное влияние суперпродукции данного чужеродного белка на метаболизм клетки и обусловливает его продолжительный синтез. [c.416]

Одновременно с полиэдрином в большом количестве синтезируется белок р10. Данный белок представляет собой структурный элемент скоплений волокон, выявляемых в ядре и цитоплазме клеток, инфицированных бакуповиру-сом, и играет важную роль в формировании электронно-плотных образований в ядре и в сборке поверхностной полисахаридной мембраны полиэдров. [c.416]

С помощью разработанной векторной системы вируса ядерного полиэдроза калифорнийской совки в лаборатории Л. Миллера в 1984 г. был создан вариант данного вируса, в геноме которого под контролем промотора гена полиэдрина находился структурный ген /3-галактози-дазы Е. соИ. При добавлении в среду галактози-да Xgal бляшки гибридного вируса окрашивались в синий цвет. Данный фенотипический маркер затем с успехом использовали в других лабораториях и для других вирусов. [c.418]

Pu . 15.2. Нуклеотидная последовательность плазмид интеграции в районе встроенного в ген полиэдрина ДатШ-линкера. Инициаторный и терминаторный триплеты обведены рамкой. Последовательность линкера подчеркнута. Пробелы в последовательностях обозначают делецию [c.419]

Точка инициации транскрипции гена полиэдрина находится в положении - 49. [c.420]

Успехи экспериментов по клонированию и экспрессии чужеродных генов в составе гена полиэдрина вируса ядерного полиэдроза калифорнийской совки (табл. 15.2) демонстрируют перспективность применения данного вектора для эффективной продукции белков самого различного происхождения. В настоящее время ба-куловирусная система суперпродукции чужеродных белков является неотъемлемой частью многих генно-инженерных исследований. [c.421]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология