РНК Рибосомная зонд III

Если вы повторите этот эксперимент с зондом, комплементарным началу гена VSG, то обнаружите, что транскрипция инактивируется примерно в 7 раз быстрее, чем в случае зонда 4 транскрипционной единицы рибосомной РНК. [c.151]

В случае Нозерн -гибридизации РНК-зонды оказались гораздо более чувствительными, чем ДНК-зонды. Мелтон и др. [5] сообщали о достигнутом ими 10-кратном повышении чувствительности метода при использовании РНК-зондов как выяснилось, это общее правило. РНК-РНК-гибриды более стабильны в растворах формамида, чем аналогичные ДНК-ДНК-гибриды, что и порождает проблему неспецифичности гибридизации. В частности, связывание некоторых зондов, обладающих способностью к перекрестной гибридизации с рибосомной РНК, стало серьезной проблемой, и для выявления специфических гибридов приходится варьировать степень жесткости отмывки. В общем случае лучше с осторожностью относиться к полосам РНК, по размеру совпадающим с 28- или 185-РНК, до тех пор, пока не будут получены еще и другие доказательства того, что они появились в результате специфической гибридизации. Для удаления неспецифических гибридов некоторые исследователи предлагают проводить отмывку в присутствии РНКазы. В этом случае фильтры нельзя использовать повторно. [c.30]

Отсутствие заметной гомологии между ДНК многих микоплазм было отмечено еще в работах конца 60-х годов [58—60]. По более точным количественным данным перекрестной гибридизации ДНК разных микоплазм в растворах было установлено, что гомология по ДНК у большинства видов не превышает 2 %, и только у нескольких пар сравниваемых микоплазм гомология составила от 4 до 21 % [61—63]. В нашей работе [64] по перекрестной блот-гибридизации ДНК ряда микоплазм показано, что при низком уровне гомологии ДНК исследованных видов эта гомология касается отдельных протя- женных фрагментов генома, а не коротких участков, распределенных по всей его длине. Более того, у некоторых микоплазм единственными гомологичными участками ДНК оказываются рибосомные гены., На основании этих результатов мы начали использовать в качестве гибридизационных зондов для обнаружения и идентификации микоплазм тотальные препараты ДНК, полученные из микоплазм, выращенных на специальных средах. Такие зонды оказались высокоэффективными и достаточно специфичными, но их нельзя рекомендовать к широкому применению, так как получение чистых культур микоплазм и их выращивание в препаративных количествах связаны со значительными техническими трудностями. В связи с этим мы предприняли клонирование случайных рестриктазных фрагментов ДНК микоплазм в бактериальной плазмиде pBR322 и проверку рекомбинантных Ь лазмиЯ на специфичность в опытах по блот- и дот-гибридизации с ДНК различных микоплазм и ДНК клеток эукариот. Был составлен комплект плазмид-зондов, содержащих фрагменты ДНК, видоспецифичные для каждой из взятых микоплазм. В дальнейшем этот комплект должен быть расширен. [c.118]

Рис. 9-23. Строение транскрипционной единицы рибосомной РНК (4) и чувствительность к ультра-фнолету транскрипционных единиц 58-РНК и других рибосомных РНК (i) задача 9-28). А. Указано расположение гибридизационных зондов относительно промотора (левый конец стрелки) в транскрипционной единице. Б. Транскрипция в зависимости от дозы облучения ультрафиолетом, выявленная при дот-гибридизации (слева) и представленная в виде графика (справа).

Б. Транскрипция гена VSG в семь раз чувствительнее к облучению ультрафиолетом, чем транскрипция генов рибосомной рРНК в области зонда 4, расположенного на расстоянии 7 т. п. н. от своего промотора. Следовательно, начало гена VSG отстоит от промотора на расстояние примерно 50 т.п.н. (7 х 7). В этих расчетах принимается, что ДНК, расположенная между промотором VSG и геном VSG, обладает примерно такой же чувствительностью к ультрафиолету, что и транскрипционная единица рибосомной РНК. [c.402]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология