Разделение клеток седиментацией

Теория седиментации применительно к клеткам подробно рассмотрена в недавно опубликованном обзоре [4]. Равновесное центрифугирование в градиенте плотности требует достаточно высокой скорости вращения и/нли достаточно продолжительного времени, чтобы клетки смогли перераспределиться вдоль градиента в соответствии с их плавучей плотностью. Этот метод имеет известные ограничения, поскольку разделение клеток производится в соответствии с их плотностью, а плавучие плотности многих типов клеток частично перекрываются [5]. Другими недостатками этого метода являются необходимость приложения больших центробежных сил и возможная токсичность материалов, используемых для создания [c.166]

Аппараты могут быть использованы для нанесения ограниченного количества клеток (максимум 10 клето(к) на поверхность градиента сыворотки, бычьего сывороточного альбумина или фиколла. При большом количестве клеток создаются проблемы на границе раздела градиента и образца, где клетки проваливаются в градиент. Этого можно избежать, если создавать промежуточный слой между клетками и градиентом. Главным недостатком седиментации в поле силы тяжести является длительность разделения. [c.167]

Однонитевые разрывы ДНК. Индуцированные облучением однонитевые разрывы ДНК (ОР) впервые были продемонстрировены с помощью метода "седиментации в щелочном градиенте сахарозы". Для продольного разделения ДНК на составляющие ее нити используют экстремальные щелочные условия (pH = 12). Клетки помещают в специально при-готовленнь1Й раствор сахарозь , затем центрифугируют при большой скорости. [c.35]

Двойные разрывы ДНК. Как показано на рис. 2.5, двойные разрывы ДНК (ДР) могут быть или результатом единичного события ионизации или следствием совпадения однонитевых разрывов в комплементарных нитях. ДР измеряют при помощи метода седиментации в нейтральном градиенте. При биохимической экстракции в нейтральных условиях не происходит разделения молекулы ДНК на единичные цепи, и число ДР измеряют по уменьшению среднего молекулярного веса фрагментов дву-нитевой ДНК. Однако эта техника применима для обнаружения разрывов в том случае, если ДНК находится в виде относительно небольших фрагментов (1 - 3 10 дальтон). Поэтому требуется облучение в довольно больших дозах (50 — 100 Гр), чтобы разбить молекулу ДНК на достаточно мелкие части. Метод седиментации имеет некоторые недостатки при изучении ДНК млекопитающих. Они в основном связаны с тем, что трудно определить истинное количество ДР, поскольку ДНК образует комплексы с мембранами и другими компонентами клетки, что приводит к аномалиям седиментации. [c.38]

Метод ультрацентрифугирования основан на разделении частиц по их массе в гравитационном поле, Вируссодержащая суспензия содержит набор частиц, начиная от ионов неорганических солей до обломков клеток. Скорость осаждения в большей степени зависит от размера (диаметра) и плотности частицы. Так как плотность различных компонентов клетки и вирусов находится в сравнительно небольшом диапазоне — 1,1—1,4 г/см , то осаждение подобных частиц прежде всего зависит от их размера Например, ядра оседают при 800 g за 10—15 минут, митохондрия-дри 10000 g за 30 минут, а большинство известных вирусов — при 30000 — 100000 за 0,5—3 часа. При низкоскоростном центрифугировании из вируссодержащей суспензии удаляются обломки клеток и их компоненты. При ультрацентрифугировании надосадка вирусные частицы оседают, а основная часть растворимого белка и другие низкомолекулярные соединения остаются в надосадочной жидкости Таким образом, с помощью цикла дифференциального центрифугирования удается разделить вирусную суспензию на ряд фракций, содержащих однородные по скорости осаждения частицы. Но вирусный осадок в таком случае обычно содержит, кроме вируса, некоторое количество сопутствующих веществ с одинаковыми коэффициентами седиментации 293]. Большую часть этих сопутствующих веществ в дальнейшем можно отделить от вирусных частиц, так как они отличаются по своим свойствам. [c.55]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология