Вирусные суспензии

Электрофорез. Обычно при нейтральных величинах pH вирусы несут отрицательный заряд [33], и при помещении вирусной суспензии в электрическое поле они перемещаются к катоду. Этот принцип был использован для концентрирования бактериофагов в воде [34]. Разработана простая процедура, при которой концентрации фагов возрастает в 100 раз. Путем модификации этот метод может быть использован и для концентрации энтеровирусов. [c.282]

Асептическую технику применяли при приготовлении рабочего раствора, при переносе бактерий и вирусной суспензии и при фильтровании. Песок, используемый в фильтрах, не выдерживали в автоклаве, так как было определено, что деионизированная вода, проходящая через песок, не содержала частиц вирусов. Кроме того, были опасения, что поверхностные характеристики зерен песков могут измениться в результате обработки в автоклаве. [c.80]

Для получения бляшек разные разведения вирусной суспензии наносят на однослойные культуры ткани в плоских флаконах или чашках Петри и покрывают их слоем агарового покрытия. При этом репродукция вируса и ЦПД ограничиваются только первоначально инфицированными и соседними с ними клетками. Очаги клеточной дегенерации (бляшки) выявляют путем окрашивания культуры нейтральным красным, который либо включают в состав агарового покрытия, либо добавляют непосредственно перед учетом результатов. Бляшки состоят из погибших клеток, не окрашиваются нейтральным красным и поэтому выглядят в виде светлых пятен на фоне розово-красного монослоя. [c.267]

Фильтрация вирусной суспензии последовательно через фильтры с диаметром пор 220, [c.294]

Встряхивание равных объемов вирусной суспензии и эфира в течение 20 мин при комнатной температуре и инкубация при -4...8°С в течение ]8-20 ч [c.294]

Смешивание вирусной суспензии с равным объемом 1 %-го дезоксихолата натрия (I 500) и инкубация [c.294]

Вирусную суспензию помещали в одну из аспираторных бутылей и разбавляли до требуемого объема, затем прибавляли хлорид кальция. Растворами гидроксида и хлорида натрия ионную силу раствора и pH доводили соответственно до 5-10 a и 7,0. Смесь энергично встряхивали до получения [c.80]

Условия фильтрации скорость потока 1,358 л-м7с исходная концентрация вирусной суспензии 138-10 ед/мл, (Са= +] =10-= М, рН = 7,0, /=5-Ю- [c.82]

УСЛОВИЯ ФИЛЬТРАЦИИ ВИРУСНЫХ СУСПЕНЗИЙ [c.81]

Как следует из рис. 6.2, при фильтрации в отсутствие таких вспомогательных реагентов, как кальций, песчаные частицы имеют слабое сродство к частицам вирусов. Так, после 10 мин фильтрации приблизительно 80% вирусов проходит через фильтр, не задерживаясь. Такая слабая очистка объясняется тем, что при pH = 7 вирусы заряжены отрицательно [см. уравнение (6.3)] и имеет место электростатическое отталкивание вирусов отрицательно заряженными песчаными зернами, поэтому удаления вирусов из раствора не происходило. На рис. 6.3 даны результаты трех одинаковых опытов при исходной концентрации вирусной суспензии 138-10 ед./мл, концентрация кальция 10 М и рН = 7. Как следует из приведенных кривых, разброс экспериментальных точек для абсциссы 45 мин составляет 7%. Это свидетельствует о хорошем качестве экспериментальных операций и методики определений в целом. Подобные результаты были получены и в большинстве других аналогичных опытов. [c.81]

Г. Е. Фрадкин. После обработки фаговой популяции гидроксиламино.м последний при помощи диализа удалялся из вирусной суспензии. Следовательно, во время облучения гидроксиламин в среде отсутствовал. Предварительная модификация цитозиновых остатков в ДНК фага лямбда, вызываемая гидроксиламином (предположительно образование 4—5-дигидро-4-гидро-ксиламиноцитозина), действительно повышает радиочувствительность фаговой популяции в условиях преобладания непрямого эффекта излучения. Мы полагаем, что механизм повышения радиочувствительности сводится к нарушению специфического процесса комплементарного спаривания азотистых оснований во время репликации фаговой ДНК внутри клетки. В последних рабо тах Брауна, Филипса с соавторами химическими методами установлено, что цитозин, предварительно обработанный гидроксиламином, спаривается не с гуанином, а с аденином. Вследствие этого во вновь образованной ДНК происходят единичные замены гуанина на аденин. До тех пор, пока эти замены не выходят за пределы связанных серий однозначных кодонов, они не сказываются на информационных свойствах ДНК фага. Однако эти единичные замены понижают эффективность механизма, исправляющего ошибки включения, за счет уменьшения резерва однозначны кодонов или, иными словами, за счет уменьшения степени вырожденности структурного кода. Мы не видим большой сложности в этом объяснении, к которому мы сознательно прибегли для освещения возмол<ных молекулярных механизмов, лежащих в основе скрытых повреждений, связанных с тонкими сдвигами в величинах водородных сил в химически модифицированных азотистых основаниях. Как известно, сенсибилизация может обусловливаться уменьшением степени прочности первичной структуры ДНК вследствие лабилизации эфирно-фосфатных связей. Однако при использовании в качестве модифицирующего агента гидроксиламина этот второй механизм отсутствует, так как химическими исслг- [c.173]

При сравнении графических зависимостей, представленных на рис. 6.2 и 6.3, можно видеть, что при добавлении кальция в вирусную суспензию эффективность удаления вирусов песчаными фильтрами значительно увеличивается. При концентрации вирусов 138-10 ед/мл в присутствии только 10 М Са + приблизительно от 20 до 30% вирусов проходит через фильтр, следовательно, от 70 до 80% вирусов задерживаются. [c.81]

На кривых указана начальная концентрация вирусной суспензии. [c.82]

Исходная концентрация вирусной суспензии 36-10 ед/мл. [c.82]

Рис. 6.5 иллюстрируют влияние исходной концентрации вирусной суспензии на эффективность удаления вирусов при концентрациях 10 , 10 и 10 М. Как видно из рис. 6.5, эффективность действия Са + на процесс удаления вирусов с помощью моделируемых песчаных фильтров зависит от начальной концентрации вирусной суспензии. По мере возрастания начального содержания вирусов эффективность действия Са + снижается. Следовательно, при увеличении содержания вирусов необходимо увеличить количество вводимого в суспензию кальция. Таким образом, существует определенная стехиометрическая зависимость между количеством Са +, необходимым для эффективного осаждения вирусов, и начальной концентрацией вирусных частиц. [c.83]

Рис. 6.5. Зависимость эффективности удаления вирусов с помощью песчаных фильтров от начальной концентрации вирусной суспензии при содержании кальция 10-3 м (а), 10- М (б) и 10- М (в).

Для большинства вирусных суспензий первый этап очистки проводится путем дифференциального центрифугирования, сначала низкоскоростного (4000 ) — для отделения обломков крупных клеток, а затем высокоскоростного (40 ООО ) - для осаждения вирусов. Применение флокулянтов на первой стадии представляется весьма проблематичным, поскольку их введение в вируссодержащие жидкости приводит к совместному осаждению как вирусов, так и осколков клеток и биополимеров. Селективное осаждение вирусов — также трудноразрешимая [c.122]

В другом опыте была использована почва, искусственно зараженная вирусом и находившаяся в течение одного года в природных условиях в металлическом цилиндре с сетчатым дном. Цилиндр был вкопан в почву. На 1,2 кг почвы было внесено 100 мл вирусной суспензии с титром 26 млн. гранул в 1 мл. Методика постановки опыт была следующей. Из цилиндра брали пробу почвы глубиной до 9 см и после перемешивания ее делали три навески по 100 г. На каждые 100 г почвы добавляли 100 мл стерильной воды. Носле взбалтывания почвы с водой взвесь отстаивали, надосадочную жидкость фильтровали и затем использовали для смачивания колосьев пшеницы, которыми питались гусеницы серой зерновой совки четвертого возраста. Гусеницы содержались поодиночке. В контрольном варианте колосья смачивали вытяжкой из стерильной почвы. [c.326]

В таблице 2 представлены результаты опрыскивания лесов препаратом ВИРИН-ЭНШ с самолета при расходе жидкости 50 л на 1 га. В каждом варианте обрабатывали участок шириной в одну летную полосу (30 м). Учет эффективности проводили на спиленных модельных деревьях. Перед опрыскиванием в вирусную суспензию добавляли поверхностно-активное вещество ОП-7 в концентрации 0,04%. [c.338]

В 1966 г. ВИРИН-ЭКС испытывали в двух концентрациях в Московской области. К вирусной суспензии добавляли крахмал из расчета 5 г на 1 л. Через 3 часа после обработки пошел дождь. Учет, проведенный через 10 дней, показал, что на участках, где испытывали препарат в концентрации 1,65-10 полиэдров в 1 мл, численность гусениц снизилась на 73% при концентрации 1,65-10 — на 55%. [c.339]

Бактериальные суспензии состоят из частиц, размеры которых лежат в пределах между атомами — с одной стороны и стеклянными линзами —с другой. Основная часть рассеиваемого суспензией света направлена почти (но не полностью) в том же направлении, что и падающий пучок (рис. 11.3). Интенсивность света, рассеиваемого атомом или очень малой частицей, обратно пропорциональна длине волны падающего света в четвертой степени. Поэтому мелкие частицы сильнее рассеивают голубой свет и лучше пропускают красный. Именно по этой причине небо кажется голубым, а дым и многие вирусные суспензии — голубоватыми. В случае оконного стекла свет, идущий в любом направлении, кроме исход- [c.475]

Производство любого из вирусных препаратов начинают с разведения насекомого-хозяина на искусственных питательных средах, обеспечивающих их физиологически здоровое состояние. На определенной стадии развития (обычно на стадии гусеницы) насекомых заражают, добавляя вирусную суспензию к корму. При этом инокулят предварительно получают от нескольких больных личинок. [c.79]

Препараты для ЭМВ готовят методом негативного контрастирования. Для этого смешивают равные объемы вирусной суспензии и 1%-го раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты ( негативная краска ) на формваруглеродной подложке. Краска окружает вирусную частицу и контрастирует наружную оболочку вириона, а иногда проникает внутрь капсида, в результате чего получают профильное изображение наружной оболочки. Для выявления вирусов в биологическом материале применяют также метод ультратонких срезов. [c.267]

При подготовке эксперимента были предприняты меры, чтобы избежать загрязнения вирусной суспензии, питательной среды и колоний бактерий. Стеклянную посуду, используемую в опыте, замачивали в мойке Mi ro , после чего промывали проточной водой, затем дистиллированной и деионизированной водой. Для стерилизации посуду выдерживали в автоклаве при температуре 121 С 30 мин. [c.80]

Исследование вирусной суспензии. Ни один из обнаруженных вирусов не может быть использован как имитатор всех типов вирусов [13, 14]. Однако бактериофаг Е. oli Т объединяет многие типы вирусов, найденные в бытовых сточных водах, и его довольно легко определить (Т — является двадцатигранным фагом размером приблизительно 500—100 нм). Поэтому с ним и проводили эксперименты. Связь вирусов с кишечной палочкой зависит от типа и концентрации катионов в растворе. [c.80]

Для получения рабочей вирусной суспензии клетки Е. соИ В вводили в 250 мл питательного раствора. Культуральную жидкость выращивали при температуре 37 "С до тех пор, пока клетки находятся в логарифмической фазе роста (около 6 ч). Затем добавляли 1 мл суспензии концентрированного фага Ti и полученную смесь выдерживали при 37 °С до тех пор, пока взвешенные частицы, состоящие из множества клеток бактерий, не осядут. После этого бактериофаговую культуру центрифугировали и фильтровали чрреэ мембранный фильтр (0,45 мкм) для удаления растворенных лизированных клеток бактерий. Затем вирусную суспензию замораживали, оттаивали и помещали в холодильник. Замораживание необходимо для того, чтобы поддержать высокую концентрацию вирусов (10 —10 ед./мл). Для определения содержания вирусов в полученной суспензии на агаре выращивали Е. oli в присутствии бактериофага Ti при 37 °С в течение 24 ч. Бактериофаги, паразитирующие на бактериях, оставляют на последних пораженные участки, имеющие круглую форму и хорошо различимые в обычный микроскоп. Подсчетом таких пораженных участков определяют количество вирусов, содержащихся в данном объеме суспензии. [c.80]

Модель песчаных фильтров. Схема установки для фильтрации показана на рис. 6.1. В качестве фильтров были использованы четыре плексиглазовые трубки с внутренним диаметром 2,54 см и длиной 25 см, которые заполняли песком, взятым из окрестностей Оттавы, на 10 см по высоте над фильтрами. Установлены четыре одинаковые. аспираторные бутыли с вирусной суспензией. В каждом опыте использовали только одну бутыль, так как она вполне обеспечивает необходимый напор. Аспираторная бутыль с деионизированной водой предназначена для определения начальной скорости потока растворов, поступающих в фильтр. Скорость фильтрации составляла 1,358 л-м с и поддерживалась постоянной для каждой длины фильтра регулированием расходов суспензии. [c.80]

Предполагается, что между отрицательно заряженными поверхностями зерен фильтра и отрицательно заряженными вирусами действуют электростатические силы отталкивания, которые препятствуют осаждению вирусов на песчаных фильтрах. При введении кальция в вирусную суспензию образуются положительно заряженные комплексы кальция с вирусами [см. реакцию (6.5)]. В результате отрицательные заряды частиц вирусов уменьшаются до уровня, при котором электростатические силы отталкивания между песчаными зернами и вирусными частицами преодолеваются ван-дер-ваальсовыми силами притяжения и создаются благоприятные условия для адсорбции вирусов песчаными частицами. [c.85]

Для обработки мест выплода жука (компостных куч) tomoi hh-зировали кишечники искусственно инфицированных насекомых и полученную таким способом вирусную суспензию смешивали с субстратом. При другом способе проводили расселение искусственно инфицированных жуков. Такие особи, очевидно, могут способствовать распространению инфекции, так как их экскременты содержат патоген. [c.195]

В последние годы проведено несколько исследований по использованию в США вируса полиэдроза в борьбе с гусеницами совки Tri hoplusia ni (Hbn.). Холл [886] в опытах, проведенных в 1953 и 1954 гг., показал, что при опрыскивании салата в Калифорнии вирусными суспензиями гусеницы совки, питающиеся обработанными листьями, поражаются болезнью и цогибают. Эти данные были подтверждены Мак-Ивеном и Херви [1339] в опытах против гусениц той же совки на кочанной, цветной и брюссельской капусте в штате Нью-Йорк. Дополнительные сведения об использовании вируса полиэдроза против этого вредителя на хлопчатнике и салате в Аризоне были получены от Флуда (личное сообщение, 1959 г.), и из него вытекает, что практическое использование этого вируса почти налажено. [c.471]

Результаты соответствующих полевых опытов показали, что можно достигнуть высокой эффективности в уничтожении хлопковой совки, если опрыскивать растения вирусной суспензией. Этот путь мы считаем наиболее правильным и перспективным, так как многолетние и многократные обработки вирусной суспензией будут из года в год способствовать возникновению и усилению деятельности очагов вируса в популяции вредителя. Такие очаги при нарушении нормального физиологического состояния особей вредителя, несомненно, будут перерастать в локальные эпизоотии. Однако для создания указанной благоприятной обстановки должны быть исключены химические обработки. Чтобы перейти к практическому использованию выделенного штамма вируса ядерного полиэдроза хлопковой совки, ВИЗР разрабатывает лабораторный регламент технологии получения вирусного препарата в результате этих исследований решены уже некоторые важные методические вопросы. [c.274]

Для того чтобы выяснить возможность передачи вируса гранулёза через яйцо следуюгцему поколению серой зерновой совки, мы провели лабораторные и нолевые исследования. В лабораторном опыте заражали вирусом гранулёза гусениц восьмого возраста (перезимовавшие). Заражение проводили путем инъекций и перорально вирусной суспензией, содержащей в 1 мл 118 млн. гранул. Всего было заражено 250 гусениц, из нпх погибло 86,4%. Вылетевшие бабочки были рассажены попарно (самка и самец). Бабочек кормили 10%-ным сахарным сиропом. Под наблюдением находилось 10 пар бабочек. Од- [c.326]

Многие исследователи на основании результатов полевых испытаний считают перспективным применять вирусы ядерного полиэдроза и гранулеза для борьбы с вредителями, не приводя, однако, экономических расчетов. Тем не менее часто исходные данные позволяют сделать такие расчеты. Так, при применении вируса гранулеза д.тя борьбы с яблонной плодожоркой с расходом от 600 до 1600 млрд. капсул на одно дерево количество пораженных плодов снизилось до 8% при 55% в контроле (Fal on, Капе, Bethell, 1968). Учитывая расход жидкости на 1 га, титр вирусных суспензий и средний ЛЭ, можно рассчитать, что для обработки одного гектара плодовых деревьев потребуется около 100 000 ЛЭ. Приведенные данные указывают на то, что использовать вирус для борьбы с плодожоркой вряд ли будет выгодно. [c.336]

Большое влияние на эффективность вирусных препаратов могут оказывать pH среды и введение в суспензию различных добавок. Активность вирусов заметно снижалась (Ignoffo, Gar ia, 1965), когда полиэдры содержались при pH 1,2 и 12,4. Вирусная суспензия хорошо сохраняется при pH 6—8. [c.337]

Добавьте 25 мкл последней смеси к 25 мкл содержащей вирус среды или концентрированной вирусной суспензии и инкуб1фуйте при 37 °С в течение 2—4 ч. [c.298]

Вирусы оказывают цитопатогенное действие и служат этиологическими агентами при многих заболеваниях человека и животных. Кроме того, многие вирусы (например, онкориавирусы, -вирус герпеса тип II, аденовирусы, вирус полиомы и SV40) являются, по-видимому, агентами, вызывающими развитие опухолей у животных. Из-за способности вирусов проходить через бактериальные фильтры бывает трудно исключить вирусы из культур иезаражеиных клеток при наличии вирусных суспензий, когда возможна передача вируса через воздух культуральной комнаты. [c.197]

Удалить среду и внести по 0,2 мл вирусной суспензии каждого разведения в каждые 4 чашки (в контрольные чашки внести по 0,2 мл СБСР). [c.206]

Мышатам через 12—24 ч после рождения вводят внутри-брюшинно 0,05 мл вирусной суспензии. Спустя 3—4 недели (латентный период) появляются опухоли в лимфатических узлах, костном мозге, селезенке и мозговых оболочках (рис. 1). Опухоли можно также индуцировать у молодых половозрелых мышей, введя им внутрнбрюшинно 0,05 мл легкого минерального масла пристава (2, 6, 10, 14-тетраметилпентадекан) с последующей инокуляцией вируса (Potter et al., 1973). [c.386]

Вирусную суспензию разбавляют до 10000 ГАЕ/мл раствором -пропиолактона, доводя концентрацию последнего до 0,05% (39 частей вируса+1 часть основного раствора -пропиолакто-на). Суспензию встряхивают 10 мин при 4°С, затем инкубируют [c.401]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология