Центрифугирование дифференциально

Рис. 4.26. Дифференциальное центрифугирование гомогенатов ткани печени (схема),

Рис. 13-24. Фракционирование клеточного экстракта методом дифференциального центрифугирования. Клеточная мембрана разрушается силами трения в гомогенизаторе с вращаю-ищмся поршнем. После удаления остатков соединительной ткани и обрывков кровеносных сосудов при помоцщ сита нз нержавеющей стали клеточный экстракт центрифугируют несколько раз, постепенно увеличивая скорость вращения ротора.

Для получения клеточных фракций широко применяются различные виды центрифугирования дифференциальное центрифугирование, зональное центрифугирование и равновесное центрифугирование в градиенте плотности. Теоретические и практические вопросы, связанные с центрифугированием, всесторонне разобраны в обзоре Сайкса [13]. [c.148]

Распределение клеточных компонентов при дифференциальном центрифугировании гомогената животных клеток [c.41]

Рибосомы получают из гомогената печени крысы (см. сноску к с. 167) методом дифференциального ультрацентрифугирования. Обломки клеток, ядра и митохондрии удаляют центрифугированием при 18 000 g рибосомы осаждают ультрацентрифугированием при 105000 g. [c.170]

В случаях синхронизации клеток млекопитающих применяют сепарацию и индукцию В первом случае проводят дифференциальное центрифугирование в градиентах бычьего сывороточного альбумина, сахарозы или фиколла (синтетический высокомолекулярный сополимер сахарозы и эпихлоргидрина [c.153]

Специальный способ разделения веществ, основанный на разной скорости седиментации отдельных частиц, известен под названием дифференциального или фракционного центрифугирования [3]. [c.186]

Различные клетки многоклеточных организмов отличаются друг от друга, однако каждая растительная клетка имеет общие черты строения и в каждой находятся общие внутриклеточные структуры, выполняющие аналогичные функции. Каждая растительная клетка состоит из цитоплазмы и ядра. Цитоплазма окружена клеточной оболочкой, а ядро — ядерной оболочкой. Цитоплазма — это очень сложная коллоидная система. Дисперсной средой ее служит вода, в которой растворены минеральные соли, сахара, аминокислоты, органические кислоты и многие другие вещества. Во взвешенном состоянии в цитоплазме находятся различные включения и большое число органелл, или структур, разного состава и размера. В последнее время с помощью дифференциального центрифугирования, электронной микроскопии, и других методов исследования удалось установить огромную роль этих структур в обмене веществ и энергии в живых организмах. [c.27]

Фрагменты СР, полученные методом дифференциального центрифугирования (см. выше), суспендируют в растворе А до конечной концентрации белка 0,5—1 мг/мл. Суспензию выдерживают в течение 60 мин на льду при постоянном перемешивании на магнитной мешалке, после чего центрифугируют 60 мин при 45 ООО д. Полученный осадок суспендируют в растворе Б до конечной концентрации белка 20— 30 мг/мл. Аликвоты замораживают небольшими порциями по 0,3— [c.359]

Водные образцы, такие, как одноклеточные водоросли, простейшие и мельчайшие беспозвоночные, несмотря на то что хранятся в чистой культуре, часто смешаны с широким кругом организмов и других растительных и животных остатков. Дифференциальное центрифугирование и повторная промывка в подходящем изотоническом буферном растворе обычно приводят к выделению организмов из остатков илн наоборот, что позволяет получить относительно чистую суспензию. Для сухих образцов, таких, как кальцинированные и хитиновые ткани, семена, древесина, споры, пыльца и надземные части растений, обычно требуется лишь очистка от пыли предпочтительно чистым воздухом, но может быть также использован фреоновый распылитель. Такие процедуры не должны нарушать микрофлору и грибную флору, которые являются общими чертами многих растительных поверхностей. Недавно в работе [265] был дан обзор некоторых методик, которые могут быть использованы при препарировании геологических образцов, включая ископаемые растения и образцы животного происхождения. [c.227]

Для изучения структуры, состава и функций органелл их изолируют из клетки дифференциальным центрифугированием после разрушения клеток в гомогенизаторах (табл. 2.4). [c.40]

Выделение субклеточных частиц Дифференциальное центрифугирование, центрифугирование в градиенте плотности, зональное центрифугирование 9, 10 [c.66]

Материал для исследования — фекалии больного. Для выделения вируса готовят 10 — 40%-й экстракт фекалий, гомогенизированный в фосфатном буфере (pH 7,4). Крупные частицы удаляют низкоскоростным центрифугированием. Вирус концентрируют, комбинируя дифференциальное центрифугирование с экстракцией органическими растворителями (хлороформом), фильтрацией через агарозу (сефарозу L-2B) и плотностным центрифугированием в хлориде цезия. [c.302]

Пероксидаза жирных кислот обнаружена в бесклеточных экстрактах, полученных из семядолей арахиса и сафлора. Были активны также экстракты ацетонового порошка прорастающего гороха. Никакая активность не выявлялась в люпине, сое, подсолнечнике, клещевине и в тканях животных. Когда дифференциальному центрифугированию подвергли бесклеточные экстракты семядолей арахиса, пероксидаза жирных кислот была найдена в митохондриальной и микросомной фракциях, а также в надосадочной жидкости. Фермент был выделен в частично очищенном виде при обработке экстракта ацетонового порошка семядолей арахиса сернокислым аммонием (СА-фермент). [c.310]

Выделение и очистка отдельных клеточных структур проводятся чаще всего дифференциальным центрифугированием. Этот метод основан на том, что при центрифугировании гомо-генатов клеток клеточные фрагменты, обладающие большим удельным весом, осаждаются быстрее, чем частицы, или фрагменты, с меньшим удельным весом. Более крупные частицы осаждаются быстрее более мелких частиц с тем же удельным весом. Проводя центрифугирование при различных скоростях, можно разделить отдельные клеточные структуры, отличающиеся по удельному весу или размерам. [c.28]

При изучении НК в клеточных структурах удобно пользоваться препаратами этих структур, полученными из гомогената клеток дифференциальным центрифугированием или центрифугированием в градиенте сахарозы. Мазки таких препаратов фиксируются и подвергаются обработке по соответствующей гистохимической методике. [c.128]

Дифференциальное центрифугирование. Разделение клеточных органелл и т.п. за счет различий в скорости их седиментации в центрифуге. [c.1010]

Из разрушенных клеток (гомогенатов) методом дифференциального центрифугирования были выделены отдельные органеллы и фракции, что позволило изучать их биохимическими методами. Благодаря комбинации оптических и биохимических методов удалось быстро выяснить структуру и функции органелл и иных составных частей клетки. В результате этих исследований было установлено, что эукариоты и прокариоты по многим особенностям отличаются друг от друга. [c.23]

Микросомы. Окруженные мембраной пузырьки, образованные в результате фрагментации эндоплазматического ретикулума эукариотических клеток и выявляемые при дифференциальном центрифугировании. [c.1013]

Применение метода дифференциального центрифугирования, посредством которого содержимое клеток фракционируется на отдельные составные части, позволило установить, что нуклеиновые кислоты имеются в ядрах, пластидах, митохондриях, микросомах и в растворимой фракции клеток. Протоплазма и се структурные элементы буквально насыщены нуклеиновыми кислотами, что нельзя не связать с исключительно важной ролью этих соединений в жизнедеятельности клетки и организма в целом. [c.223]

Ферменты локализованы во всех компартментах клеток. Ядерные ферменты катализируют синтез информационных макромолекул, а также процессы их созревания, функционирования и распада. В митохондриях действуют ферменты энергетического обмена, в аппарате Гольджи — ферменты, катализирующие созревание белков, в лизосомах — гидролитические ферменты. Значительное число ферментов ассоциировано с внешней и внутренними мембранами. Так, ферменты, защищающие клетку от действия чужеродных химических веществ, локализованы в эндоплазматическом рети1сулуме. Распределение ферментов в клетках определяют методом дифференциального центрифугирования гомогената тканей. Локализация некоторых ферментов идентифицирована гистохимическими методами in situ. Для этого при помощи микротома получают срезы ткани и обрабатывают их раствором субстрата. Идентификация продуктов ферментативной реакции облегчена, если последние окрашены. [c.65]

По мнению Доти [23], молекула ДНК имеет только два особенно характерных физических свойства — молекулярный вес (стр. 79) и состав, выраженный относительным соотношением пар А — Т и Г — Ц. Пара Г — Ц прочнее, чем А — Т, т. е. больше способствует стабильности спирали ДНК, как это будет показано несколько ниже (фиг. 26). Кроме того, как установлено методом дифференциального центрифугирования, пара Г — Ц в большей мере, чем А — Т, обусловливает высокую плотность ДНК. [c.65]

Отделение митохондриальной фракции методом дифференциального центрифугирования. Дифференциальное центрифугирование субклеточных структур основано на различии в их размерах и плотности (Рис. 5). Дифференциальное центрифугирование используется для разделения компонентов гомогената на ряд фракций (обычно пять) ядра, хлоропласты, митохондрии, микросомы и надосадочная фракция (смесь растворимой фазы цитоплазмы с растворимым содержимым вакуоли и любых других разрушившихся органелл). Каждая из фракций осаждается при определенной скорости центрифугирования и времени. Полученные фракции не являются чистыми. Во фракции ядер в качестве основных примесей содержатся также остатки разрушенных клеток, хлоропласты и фрагменты хлоропластов. Фракция хлоропластов обычно загрязнена ядрами и ядерными фрагментами. Митохондриальная фракция содержит в качестве примеси пропластиды и, если гомогенизация бьша мягкой, микротельца (пероксисомы и глиоксисомы в [c.15]

Выделение. Одии из первых этапов выделения Б,-получение соответствующих органелл (рибосом, митохондрий, ядер, цитоплазматич. мембраны) с помощью дифференциального центрифугирования. Далее Ь переводят в растворимое состояние путем экстракции буферными р-рами солей и детергентов, иногда-неполярными р-рителями. Затем применяют фракционное осаждение неорг. солями [обычно (N 14)2804], этанолом, ацетоном или путем изменения pH, ионной силы, т-ры. Для предотвращения денатурации работу проводят при пониж. т-ре (ок. 4°С) с целью исключения протеолиза используют ингибиторы протеаз, нек-рые Б. стабилизируют полиоламн, иапр. глицерином. Дальнейшую очистку проводят по схемам, специально разработанным для отдельных Б. илн группы гомологичных Б. Наиб, распространенные методы разделения-гель-про-никающая хроматография, ионообменная и адсорбц. хроматография эффективные методы-жидкостная хроматография высокого разрешения и аффинная хроматография. [c.250]

В препаративной энзимологии чаще пользуются методом дифференциального центрифугирования гомогенатов тканей (рис. 4.26). Для этого сначала разрушают клеточную структуру с помощью подходящего дезинтегратора и полученную квазиоднородную (гомогенизированную) массу подвергают дифференциальному центрифугированию при температуре О—4°С. Обычно распределение ферментов изучают в последовательных индивидуальных фракциях, изолированных при дробном центрифугировании гомогенатов, в частности во фракции ядер, которую получают при низкой скорости центрифугирования, во фракции митохондрий, которая осаждается при средней скорости центрифугирования, во фракции микросом (или рибосом), для изолирования которой требуется высокая скорость центрифугирования, и, наконец, в оставшейся прозрачной надосадочной жидкости (супернатант), представляющей собой растворимую фракцию цитоплазмы. Следует отметить, что фракция митохондрий не является гомогенной, поскольку из нее удается изолировать частицы, известные как лизосомы, размер которьгх занимает промежуточное место между размерами митохондрий и микросом. В свою очередь микросомальная фракция также является гетерогенной, поскольку состоит в основном из элементов эндоплазматической сети неоднородного строения. [c.158]

Большие по размеру компоненты (интактные клетки, неразрушенные частицы ткани, ядра) осаждаются при дифференциальном центрифугировании быстрее — их собирают в осадок при сравнительно невысоких скоростях, супернатант (от лат 8ирета1ап8 [c.49]

Хромосомная инженерия — ветвь генетической инженерии Объектами ее являются хромосомы клеток прокариот и эукариот Донорами хромосом могут быть различные суспензионные и субстрат-зависимые клеточные линии Из клеток прокариот хромосому (ДНК) выделяют из супернатанта после центрифугирования дезинтеграта или лизата клеток (протопластов) Клетки эукариот блокируют на стадии мейоза, хромосомы выделяют, применяя "гипотонический шок" и гомогенизацию с последующей очисткой их дифференциальным центрифугированием Хромосомы осаждают на поверхности реципиентных клеток хлоридом кальция и через несколько часов клетки обрабатывают реагентом — "перфоратором" (например, глицерином) Реципиентные клетки могут содержать донорный материал в широком диапазоне (встроенным в геном, изолированно) [c.184]

Состав клеточных компонентов можно изучать in situ при помощи уже описанных изящных спектрофотометрических методов. Однако с химической точки зрения наиболее полные данные были получены при изучении отдельных клеточных компонентов, выделенных путем дифференциального центрифугирования содержимого клеток, измельченных в подходящей среде. [c.130]

Единственный способ найти эту связь — приготовить узкие фракции полимера, установить для них константы седиментации и молекулярные веса, для чего, кроме седиментации, необходимо измерить для каждой фракции диффузию или характеристическую вязкость либо применить осмотический или нефелометриче-ский метод определения молекулярного веса. Только после того как будет проделана такая большая предварительная работа для данной комбинации полимер—растворитель, можно будет перестроить распределение ф (я) в искомое распределение (М). После проделанной работы с помош ью ультрацентрифуги можно получить дифференциальное молекулярновесовое распределение любого образца полимера путем одного опыта — центрифугирования нефракционированного полимера. Искомая функция распределения по молекулярным весам [c.135]

Фракционирование клеток в солевом растворе осложняется тенденцией гранул образовывать скопления и осаждаться в виде комков, а не в виде отдельных частиц. Это нежелательное явление можно предотвратить, измельчая клетки в 0,88 М растворе сахарозы, в котором митохондрии сохраняют палочковидное строение и способность к суправитальному окрашиванию янусом зеленым В. Однако при указанной концентрации сахарозы среда становится настолько вязкой и плотной, что для осаяедения субклеточных фракций приходится использовать чрезвычайно высокие скорости центрифугирования. Поэтому в современных исследованиях в качестве среды для измельчения клеток используют 0,25 М раствор сахарозы, в котором не происходит агрегации гранул и легко выделяется фракция митохондрий. Последние при этом обладают теми я е биохимическими свойствами, что и митохондрии, получаемые в 0,88 М растворе сахарозы, хотя они уяге не окрашиваются янусом зеленым В и имеют скорее шаровидную, а не удлиненную форму. При разделении путем дифференциального центрифугирования субклеточных фракций из гомогената в 0,25 М растворе сахарозы, полученного в гомогенизаторе Поттера — Эльвейема, удаление ядер и клеточных обломков, включая [c.130]

Для очистки выделенных штаммов вирусов от материалов клеток хозяина используют чаще других методов адсорбцию на фор-малинизироваиных куриных эритроцитах с последующим элюированием физиологическим раствором хлористого натрия [1] и метод дифференциального центрифугирования при низких и высоких скоростях вращения [2]. Однако оба метода трудоемки и не обеспечивают ПОЛНО очнст1- и вируса от сонутству ощнх веществ. [c.80]

И неразрушенные клетки, достигается центрифугированием при 700 g. После удаления ядерной фракции экстракт центрифугируют в течение 10 мин нри 8500 g для осаждения митохондрий и 60 мин при 100 ООО g для осанодения микросом. Считается, что полученная в результате надосадочная жидкость происходит из клеточного сока и не содержит осаждаемого материала. Имеются, конечно, различные модификации этой схемы дифференциального центрифугирования познакомиться с ними можно в многочисленных обзорах [89, 97—104]. [c.131]

Новый период в развитии наших знаний об обмене белков и связанных с ними веществ в живых организмах начался в последние 15 лет, после того как в биохимических исследованиях стали щироко применять новейшие физические, химические и физико-химические методы. Метод меченых атомов, электронная микроскопия, дифференциальное центрифугирование, хромаго-фия, электрофорез и многие другие методы позволили биохимикам перейти от изучения процессов обмена в отдельных органах и тканях организма к исследованию этих процессов в клетке и даже взаимодействию между молекулами, получить многие новые данные об обмене веществ и преж де всего обмене белков и связанных с ними нуклеиновых кислотах. [c.286]

Приведенное выше описание выделения цитоплазматических компонентов относится к животным клеткам. Однако следует иметь в виду, что бактериальные клетки также содержат рибонук-леопротеидные гранулы, которые могут быть изолированы при помощи дифференциального центрифугирования [220]. [c.131]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология