Сефароза фосфорилхолин

Рис. 7. Элюирование РаЬ-фрагментов [ H]IgA на колонке с фосфорилхолин-сефарозой с высокой (а) и низкой (б) плотностью лиганда. Хроматографические условия элюирования зон РаЬ-фрагментов [ ]IgA аналогичны приведенным на рис. 5 для мономера IgA. Константы диссоциации Kl и Kz рассчитаны по линейным графикам с использованием уравнения (2) и приведены в табл. 1 [9].

В одном из них [14] для интерпретации фосфорилхолинзависи-мого элюирования иммуноглобулина А с сефарозы, содержащей ковалентно связанный фосфорилхолин (иммобилизованный реагент X), был использован приближенный анализ [17] результатов зональной хроматографии. Другие исследования были посвящены фосфатзависимому элюированию альдолазы с фосфо-целлюлозы [18] и с миофибрилл мышц кролика [28] и ЫАОН-зависимому элюированию лактатдегидрогеназы с 10-карбокси-дециламино-сефарозы [32]. Все четыре системы относятся к примеру 3, включающему конкуренцию между 5 и X за положения связывания растворенного вещества. [c.207]

Рис. 5. Аффинная хроматография с конкурентным зональным элюированием для системы с бивалентным связыванием. Зоны (100 мкл) мономера [ ]IgA (бивалентное связывание) наносми на фосфорилхолин-сефарозу с высокой плотностью лиганда (7X25 мм, [Ь]=5-10-5 моль/л), уравновешенную МаСЬ натрийфосфатным буфером (содержащим 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина) фосфорилхолин имел следующие концентрации (моль/л) 7 — 0 2—1 10- 5 —2,5-10-6 4 — 5,010- 5 — 7,5-10- 5—1,0-10-5. Элюирование осуществляли при комнатной температуре буфером, содержащим указанное количество растворенного конкурентного фосфорилхолина. В правом верхнем углу по данным элюирования построена зависимость 1/(К—Уо) от концентрации фосфорилхолина. Константы диссоциации /Сь и /Сп рассчитаны с помощью этого графика с использованием уравнения (5) и приведены в табл. I [9].

Рис. 6. Конкурентное зональное элюирование бивалентных мономеров IgA с фосфорилхолин-сефарозы с низким содержанием лиганда. Зоны мономера [ ]IgA нан или на фосфорилхолин-сефарозу с низкой плотностью лиганда (7x25 мм, [L]=9-10 моль/л) условия элюирования аналогичны приведенным на рис. 5 для колонки с фосфорилхолин-сефарозой с высокой плотностью использованы следующие концентрации растворенного фосфорилхолина (моль/л) /-0 2—ЫО- 5-5-10" -i-ЫО-в 5 —2,5-10- .

Справочник химика 21