Зональное элюирование в аналитической аффинной хроматографии

Методика зонального элюирования в аналитической аффинной хроматографии была разработана фактически параллельно с методикой постоянного элюирования/фронтального анализа (гл. 6). Благодаря прежде всего экспериментальной простоте, зональный метод нашел широкое применение для биохимического анализа биомолекулярных взаимодействий, при которых одно из реагирующих веществ может быть иммобилизовано с сохранением способности биоспецифического связывания. Поскольку метод может быть использован для анализа очень небольших количеств подвижного компонента, он имеет важное значение [c.218]

Ниже рассмотрены основные экспериментальные особенности и подходы аналитической аффинной хроматографии с зональным элюированием. Обсуждаются свойства аффинной матрицы и растворенного реагирующего вещества в отношении их применимости для аналитических (в отличие от препаративных) экспериментов. В заключение представлены примеры, показывающие возможности рассматриваемого метода для изучения нескольких систем, относящихся к взаимодействию белок — лиганд и белок — белок. [c.218]

ЗОНАЛЬНОЕ ЭЛЮИРОВАНИЕ В АНАЛИТИЧЕСКОЙ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ [c.218]

Важное условие зональной аналитической аффинной хроматографии состоит в том, что концентрация подвижного компонента [Р] по мере прохождения зоны через слой адсорбента постоянно изменяется. Поэтому члены, содержащие [Р], не включаются в выражения, относящиеся к объемам элюирования и константам диссоциации (см., например, приведенные выше уравнения). Пренебрежение [Р] допустимо только в том случае, если этот параметр мал по сравнению с константой диссоциации /Сь- Проведение экспериментов по зональному элюированию при низком [р] обычно легко осуществимо и особенно желательно при анализе труднодоступных биомолекул. Использование низких [Р] в зональном анализе аналогично применению низких концентраций фермента в твердофазном ферментативном кинетическом анализе [7]. Было экспериментально показано (например, в работе [5]), что при низком (по отношению к /Сх) количестве фермента, введенного в аффинную матрицу, рассчитанные константы диссоциации практически не зависят от количества использованного подвижного компонента. В то же время в работе [8] предложены уравнения расчетов по методу постоянного элюирования/фронтального анализа, в которые входит точное значение концентрации подвижного компонента, нанесен ного на аффинную колонку (см. также гл. 6). С практической точки зрения метод зонального элюирования экспериментально более удобен и требует гораздо меньшего количества подвижного компонента. Таким образом, зональное элюирование, по-видимому, наиболее подходящий метод для изучения большинства взаимодействий, представляющих биологический интерес. Следовательно, существует необходимость в чувствительных аналитических методах для проведения элюирования и детектирования малых количеств подвижного компонента. [c.223]

ПРИМЕРЫ РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИТИЧЕСКОЙ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С ЗОНАЛЬНЫМ ЭЛЮИРОВАНИЕМ [c.233]

Аналитическая аффинная хроматография с зональным элюированием была изучена на многих макромолекулярных системах. Было показано, что этот метод достаточно простой в экспе- [c.240]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология