галактозидаза, конъюгация

Для определения глубины протекания конъюгации ХМТ с -галактозидазой, оптимизации условий конъюгации и хода анализа были проведены следующее исследования. [c.260]

Б реакции конъюгации ХМТ с -галактозидазой (без последующей аффинной очистки конъюгата) была обнаружена зависимость величины остаточной активности фермента в супернатанте от молярного соотношения этих реагентов. При ожидаемых для конъюгата молярных соотношениях ХМТ и -галакто зидазы 8 1 и 12 1 ферментативная активность в супернатанте составила соответственно 30% и 50% исходной, в то время как понижение молярного соотношения до 4 1 и менее снижало, остаточную активность до 10% исходной. Наблюдаемое ослабление связывания конъюгата [ХМТ—В-галактозидаза] с ГА-ага- [c.260]

Эта процедура довольно громоздка и трудна в исполнении. Наш метод связывания гаптена с -галактозидазой благодаря вовлечению в реакцию конъюгации с гаптеном сульфгидрильных групп фермента прост и легко воспроизводим. [c.273]

С другой стороны, существуют довольно прямые генетические опыты, показывающие, что синтез каждого отдельного белка требует все время присутствия соответствующей области хромосомы. В опыте Парди и Стента брались клетки Е. oli F La ., т. e. неспособные производить фермент Р-галактозидазу (расщепляющий лактозу). В результате конъюгации цистрон La " был введен в эти клетки, носле чего они немедленно синтезировали галактозидазу. Однако, если введенная хромосома из отцовских клеток Hfr содержала радиоактивный фосфор, то после распада Р (путем выдерживания замороженной культуры в течение достаточно длительного времени) соответствующая генетическая [c.440]

Опыт ставится следующим образом. В начальный момент проводится конъюгация на максимальной среде, фермент р-га-лактозидаза вырабатывается за счет наличия конститутивного штамма Hfr. Через полчаса добавляем фаг Tg и стрептомицин и начинаем уничтожать отцовские клетки. Через час носле начала опыта синтез р-галактозидазы полностью останавливается в [c.489]

В случае ИФА кортизола для конъюгации гаптена с сульфгидрильными группами -галактозидазы были синтезированы производные кортизола — КГС-МБ и К-МБ. С целью сравнения нашего метода конъюгации с разработанными ранее мы проводили также связывание КГС с аминогруппами -ra-лактозидазы методом смешанных ангидридов. Сравнение полученных конъюгатов проводили методом осаждения вторыми антителами при избытке антител против кортизола. Установлено, что при использовании метода смешанных ангидридов метится только 40% молекул фермента, при этом ферментативная активность снижается на 20%. При использовании разработанного нами метода конъюгации с производными гаптена без заметного снижения ферментативной активности метится более 95% фермента (табл. 17-1). Число молей КГС-МБ или К-МБ, связанных с ферментом, непосредственно не определяли. Однако, как и в случае конъюгата [Т4 — фермент], можно счн тать, что с каждой. молекулой -галактозидазы связывается до 12 молекул гаптена. Изучали также иммунологическую активность и специфичность взаимодействия конъюгатов [гаптен — фермент] с антисывороткой против кортизола. Конъюгаты типа [КГС— ,-гaлaктoзидaзa] и [КГС-МБ— -гаЛактозидаза] обладают высокой иммунологической активностью, но лишь в незначительной степени вытесняются из комплекса с антителами [c.271]

Для ИФА дигоксина осуществляли связывание малеимидного производного дигоксигенин-З-О-сукцината с -галактозидазой. При этом с производным гаптена связывалось около 97% фермента. После завершения реакции конъюгации снижения ферментативной активности не наблюдалось. Результаты, полученные в случае ИФА дигоксина, сходны с результатами тестирования других гаптенов. Антисыворотку разводили в 5000 раз и 0,1 мл разведенного раствора использовали для стандартного анализа. При проведении ИФА с вытеснением [c.272]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология