Связывания красителей метод

Метод основан на связывании с белками одного из кислых красителей кумасси синего, выпускаемого в двух модификациях R-25Q и G-250. При связывании с белками спектр поглощения красителя меняется интенсивности окраски от концентрации белка в пробе и диапазоне 1—10 мкг/мл имеет линейную зависимость. [c.83]

Так, еще довольно часто в лабораториях применяется несколько методов, основанных на подсчете реактивных аминных групп с помощью титрования формалином или связывания красителя [31] и особенно связывания фтор-2-4-динитробензола [13, 57], поскольку они не требуют особого оборудования, хотя питательная ценность аминных групп не всегда очевидна. [c.576]

Поверхность волокна, доступная для красителей, возможно, идентична межмицеллярной поверхности, площадь которой удалось определить с помощью различных методов сорбции иода [5—8], измерения адсорбции газов [9], инфракрасной спектроскопией адсорбентов ПО] и рентгеновским анализом. Эта поверхность (или аморфная зона) волокна составляет 5—14% от общей поверхности и, с точки зрения топологии волокна, должна соответствовать активной поверхности полимерных материалов, применяемых для отделки, и поэтому химическую модификацию целлюлозного волокна можно изучать теми же методами [11]. Место химического связывания красителя еще не уточнено с помощью электронного микроскопа [12]. Набухание волокна влияет на топологию реакции крашения, в процессе набухания реакционная способность целлюлозы возрастает [13—15], а после термической обработки она снижается [16—18], так как при нагревании меж-мицеллярные промежутки уменьшаются. Например [19], в волокне, набухшем от действия воды, в химические реакции способно вступать 14% гидроксильных групп, а в высушенном в жестких условиях (сушка шок-методом )—всего 0,9% (измерение проводилось с помощью этилата таллия). [c.246]

Краситель профлавин связывается с активным центром химотрипсина, при этом спектральные свойства его изменяются. Наблюдаемое смещение спектра можно положить в основу метода измерения констант скоростей и равновесий нри образовании и распаде фермент-субстратных промежуточных продуктов, поскольку взаимодействие субстрата с активным центром предотвращает связывание красителя [8]. [c.48]

Поскольку ферментные белки по реакциям связывания красителей практически не отличаются друг от друга, в основе гистохимии ферментов лежит выявление продукта ферментативной реакции. Специфическое выявление ферментного белка может быть проведено лишь с помощью сложных иммуногистохимических методов (см. стр. 297) При этом следует обращать внимание на то, что гистохимические методы не могут дать сведений о том, в каком состоянии находится фермент—в активном или неактивном. [c.172]

Наиболее распространён метод окраски по Гимзе, или простая окраска (в русскоязычной литературе распространён также термин рутинная окраска ). Краситель Гимзы окрашивает все хромосомы равномерно по всей длине (рис. 8.3). При этом контурируются центромера, спутники (иногда со спутничными нитями) и вторичные перетяжки. Механизм связывания красителя Гимзы хромосомами неясен. Он не является специфическим для какого-либо азотистого основания ДНК. [c.251]

Красители этой группы получают методами ацилирования, рассмотренными в гл. 12. Бензоильную группу обычно вводят в среде нитробензола или дихлорбензола. Исходный аминоантрахинон нагревают с хлористым бензоилом в присутствии соды или пиридина. Оба эти вещества добавляют для связывания хлористого водорода, образующегося при реакции. Иногда их не добавляют, а хлористый водород удаляют из реакционной массы в виде газа. [c.290]

Ионообменные методы. К этой группе относятся методы, основанные на непосредственном титровании (прямом или обратном) СООН-групп растворами щелочей, на обменной реакции с солями слабых кислот (ацетатами кальция, цинка, орто-нитрофенолятом серебра), на связывании карбоксильными группами основных красителей. [c.228]

Выход — 80—95% от взятого красителя. Для вступления в реакцию активной группы, способной фиксироваться на волокне в кислой среде, необходимо создание условий, требующихся для прохождения конденсации, а субстантивность не нужна. Так как в реакции с целлюлозой участвует мочевина, ее нельзя применять при растворении красителя и для набухания волокна. Поэтому для активных красителей, способных к фиксации в кислой среде, очень важна способность к диффузии. Прочность целлюлозных волокон, окрашенных по этому методу, несколько понижена от действия. кислотного катализатора, а также (если краситель содержит полифункциональные активные группы) и от действия структурирующих агентов. Снижение прочности зависит и от глубины окраски и может доходить до 10—20%. Активные системы, которые способны реагировать с целлюлозой только в щелочной среде, можно ввести в реакцию и в кислой среде с волокнами, содержащими NH-группы, т. е. с шерстью и полиамидами, что объясняется высокой нуклеофильностью азота. Можно также проводить фиксацию красителей на целлюлозе с помощью галогенсодержащих гетероциклов в комбинации с обработкой смолами, содержащими метилольные соединения с NH-группами. В этом случае нет непосредственного связывания с волокном, краситель взаимодействует с NH-группой смолы, а ее метилольная группа реагирует с волокном. [c.277]

Объединение двух и более красителей в одну молекулу с помощью методов, при которых не создается единой цепи сопряжения, а получаются изолированные хромофорные системы, имеет большое значение для изменения свойств и оттенка красителя. В крашении и печати индивидуальный оттенок (т. е. оттенок, получаемый индивидуальным красителем) ценится значительно выше, чем получаемый при применении смеси двух и более красителей. О большом числе высокомолекулярных красителей, приготовляемых путем связывания более простых красителей при помощи фосгена, хлористого цианура и др., будет сказано в последующих главах эти красители обладают прекрасными свойствами благодаря изолирующему действию таких групп, как —О—, —СО—, —NH—, —S—-, —SO2—, —NH—СО—NH—, —СО—NH—, ж-фенилен, триазиновое кольцо и т. д. [c.408]

В качестве реагентов для этерификации карбоксильных групп белка в водном растворе при комнатной температуре были исследованы также окиси. Френкель-Конрат [42] нашел, что при контакте в течение нескольких дней окиси этилена, окиси пропилена и эпихлоргидрина с рядом белков получаются менее растворимые белковые производные с изоэлектрической точкой, смещенной в щелочную сторону на 3 единицы рН. Эти факты наряду с результатами электрофоретических измерений и данными, полученными при определении количества амфотерных групп методом связывания красителей, свидетельствуют о том, что большая часть карбоксильных групп подвергается этерификации, но что основность аминогрупп при этом не изменяется. Однако эта реакция оказалась неспецифичной. Фенольные и сульфгидрильные группы также взаимодействуют с окисями с образованием соответственно простых эфиров и тиоэфиров. Аминогруппы лучше всего алкилируются при рН 8, образуя вторичные амины с неизмененной основностью, которая таким образом характеризует физические свойства избирательно этерифици-рованных белков. Реакция проводилась в нейтральных, кислых и щелочных растворах и в растворах мочевины, причем доля различных вступающих в реакцию функциональных групп до некоторой степени зависела от условий проведения реакции. Можно предположить, что протекают следующие четыре реакции [c.299]

Определение кислых групп гликопротеина с помощью связывания красителя [62] показало, что в нем содержится 83 + 2 кислые группы и 12 2 амидные группы. Первая цифра хорошо согласуется с результатом (86 2 кислые группы), полученным Попено и Дрю [51]. Из них 16—17 представляют собой остатки К-ацетилнейраминовой кислоты, что было показано с помощью кислотно-щелочного титрования и методом связывания красителя на препаратах, из которых с помощью нейраминидазы была удалена нейраминовая кислота [51, 63]. Остальные группы распределяются следующим образом 26 групп -аспарагиновой кислоты, 31 группа у-глу-таминовой кислоты, 11 фенольных групп, 6 сульфгидрильных групп и 1 концевая группа серина 12 остатков глутаминовой и аспарагиновой кислот находятся в виде амидов [62]. [c.76]

Из используемых красителей (флуорохромов) наиболее интенсивной флуоресценцией и стабильностью отличается изотиоцианат флуоресцеина. Дансил быстрее и легче связывается с белками. Использование диахромов для данного метода еще требует доработки. Высокая стабильность конъюгатов обеспечивается связыванием красителей с белками за счет главных валентностей. [c.298]

Флуоресцентные красители, связывающиеся с ДНК. Четвертый тип систем обнаружения продуктов ПЦР в реальном времени основан на непосредственном взаимодействии флуоресцентных красителей (например, SYBR Green) с дц ДНК [308]. Краситель, не связавшийся с ДНК, обнаруживает слабую флуоресценцию в растворе, которая возрастает в результате связывания красителя дц ДНК по мере элонгации праймеров в цикле ПЦР. На стадии денатурации интенсивность флуоресценции снова уменьшается. В соответствии с этим интенсивность флуоресценции реакционной смеси измеряют в конце этапа элонгации каждого цикла. Хотя метод исключает необходимость в дополнительных флуоресцентных зондах, его специфичность низка и целиком определяется специфичностью взаимодействия праймеров с ДНК-матрицей. Тем не менее, эффективность такой системы можно повысить, фиксируя интенсивность флуоресценции суммарного продукта ПЦР как функцию от температуры плавления (TJ) ампликона. Для этого температуру реакционной смеси медленно повышают сверх значений Тм ампликона, фиксируя при этом флуоресценцию, что в ряде случаев позволяет идентифицировать сигнал, исходящий от требуемого продукта ПЦР в виде достаточ- [c.230]

Теперь мы опишем несколько доступных методов определения белка. Некоторые из них, требующие специальной аппаратуры (определение азота по Кьельдалю, рефрактометрия), исключены из рассмотрения. К наиболее широко применяемым методам относятся 1) биуретовая реакция с использованием щелочного pj TBopa соли меди 2) метод Лоури с применением реактива Лоури—Фолина—Чиокалто 3) измерение оптической плотности в УФ-области спектра при 280 нм (полоса поглощения ароматических групп) или при 205—220 нм (полоса поглощения пептидных групп) 4) связывание красителей. [c.310]

В последнее время работами Хесса с сотрудниками [5—7] на примере а-химотрипсина был развит новый метод изучения кинетики начальных стадий ферментативных реакций, получивший название метода вытеснения профлавина . Метод основан на том факте, что краситель профлавин (3,6-диаминоакридин) при связывании с а-химотрипсином в водном растворе изменяет свой спектр поглощения в ультрафиолетовой области. Величина разностного спектра поглощения, имеющего максимальное значение при длине волны 465 нм, пропорциональна -концентрации комплекса фермент-профлавин. Введение в систему фермент-профлавин субстрата, конкурирующего с красителем за связывание на активном центре а-химотрипсина, приводит к двум последовательным процессам вытеснения профлавина. Первый, очень быстрый процесс, заключается в обратимом вытеснении красителя из комплекса его с ферментом за счет образования нековалентного фермент-субстратного комплекса. Второй процесс, времена прохождения которого лежат обычно в пределах разрешения установок типа остановленной струи , вызван химическим взаимодействием субстрата с ферментом (например, образованием ацилферментного промежуточного соединения), что приводит к дополнительному уменьшению концентрации комплекса фермент-профлавин. Изучение кинетики второго процесса при различных концентрациях субстрата в дополнение к изучению кинетики ферментативной реакции в стационарном режиме позволяет сделать заключения о стадийности изучаемой реакции, а также найти значения констант скоростей промежуточных стадий ферментативной реакции. [c.188]

Связывание актиномицина и АК идет ступенчато, через ряд промежуточных форм. Комплексообразование меняет конформацию ДНК. Рентгенографическое исследование показало, что ДНК в комплексе с профлавином имеет больший щаг спирали, чем у свободной ДНК и частично раскручивается [139]. Опыты со сверхскрученной (зирегсоИес ) кольцевой ДНК показали, что -В присутствии АК и актиномицина она раскручивается [140,, 141]. В такой ДНК основная правая спираль закручена в правую спираль более высокого порядка. Раскручивание сверхскрученной ДНК при образовании комплекса приводит вследствие топологических особенностей кольцевой структуры самой ДНК к изменениям геометрии всей макромолекулы. Установлено существование критической концентрации лиганда, отвечающей полному раскручиванию сверхспирали дальнейшее добавление красителя вызывает закручивание ДНК в обратном направлении с образованием левой сверхспирали. Эти факты обнаруживаются методом седиментации. [c.528]

М1КГ цинка из 100 мл раствора, то вначале добавляют небольшой избыток тиоцианата для связывания цияка в виде комплексного аниона [2т1(5СМ)4]2 , а затем уже прибавляют какой-нибудь основной краситель, например кристаллический фиолетовый или метиленовый синий. Осадо,к кристаллический фиолетовый (или метиленовый синий) —тиоцианат количественно соосаждает комплекс цинка [2]. И хотя селективность этого метода соосаждения цинка превосходит избирательность неорганических коллекторов, она также имеет свои пределы. На этом осадке могут удерживаться и другие. ионы, если они способны образовать тиоцианатные комплексы (Си, С и т. д.) или если они осаждаются объемистыми катионами. [c.186]

Традиционная гистологическая классификация основана на форме и структуре клегки, определяемых под микроскопом, и на ее химической природе, очень грубо оцениваемой по связыванию различных красителей. Более тонкие методы позволяют выделить новые подклассы в рамках традиционной классификации. Например, в современной иммунологии установлено, что к прежней категории лимфоцитов относится более десяти совершенно разных [c.183]

В основу методов определения состояния РНК в клетке положено представление о том, что связывание основных красителей, в частности пиронина Ж, протоплазмой обусловлено свободными фосфатными группами РНК. Блокировацные фосфатные группы РНК недоступны молекулам пиронина и могут быть обнаружены лишь после обработки гистологических срезов веществами, освобождающими эти группы от связей с другими компонентами протоплазмы [2]—[5]. [c.165]

Фирмой osden Oil and hemi al o. разработан так называемый метод поверхностного связывания пигмента для окраски полиэтиленового порошка с размером частиц 60 меш, состоящий в адсорбции однородного слоя красителя на поверхности частиц (228]. Процесс окраски осуществляется при более низких температурах и позволяет применять меньшие количества красящего вещества для достижения той же интенсивности цвета, чем в случае других методов. [c.275]

Другой метод исследования заключается в использовании оптически неактивных катионных красителей, при связывании которых со спиралью поли-Ь-глутаминовой кислоты появляется сильный эффект Коттона. При этом кривая дисперсии пересекает линию нулевого вращения вблизи полосы поглощения красителя (фиг. I). Для поли-О-глутаминовой кислоты также можно получить подобный, но противоположный по знаку, эффект Коттона, который исчезает при переходе от спирали к хаотической конформации, несмотря на то что краситель остается связанным с макромолекулой. Белки, в состав которых входят гемогруппы, содержащие железо (миоглобин, гемоглобин, ката-лаза, пероксидаза), обладают своим собственным красителем , и в их спектрах наблюдается эффект Коттона в видимой области, т. е. в области поглощения гема. При денатурации этот эффект исчезает, но поглощение в видимой области при этом сохраняется. При добавлении оптически неактивного восстановленного никотинадениндинуклеотида к алкогольдегидрогеназе из печени (ферменту, содержащему цинк) наблюдается эффект Коттона в области поглощения нуклеотида. Однако в этом случае эффект Коттона обусловлен, по-видимому, асимметрией связывающей поверхности фермента, а не асимметрией спирали. Аналогичным примером могут служить комплексы оптически активных аминокислот (не поглощающих видимого света) с медью. В полосе поглощения медных комплексов, уже находящейся в видимой области, наблюдается эффект Коттона, индуцируемый аминокислотами. [c.294]

Приведенные выше примеры наглядно иллюстрируют связь между светопрочностью и агрегатным состоянием красителей. Типичным примером является более высокая прочность выкрасок на основе кубовых и азоидных красителей, которые образуются на волокне в виде нерастворимых сильно агрегированных молекул [510—514]. С другой стороны, подобная взаимосвязь между светопрочностью материалов, окрашенных водорастворимыми красителями, и физическим состоянием красителей не столь очевидна, так как не исключена возможность мономолекулярной сорбции прямых красителей на целлюлозных волокнах [445, 513, 515, 516], Кроме данных кинетического исследования выцветания [7, 430, 448, 450], свидетельствующих о частичном связывании водорастворимых красителей в волокнах в виде агрегатов или кристаллов суб-микроскопического раз.мера, прямое доказательство такой агрегации было получено Вайсбайном [445]. Изучение физического состояния прямых красителей на вискозе с помощью метода электронной микроскопии свидетельствует о том, что наибольшей светопрочностью на целлюлозе обладают прямые красители с очень сильной агрегацией. [c.444]

Типичный метод получения таких красителей, как Хлорантиновый прочно-зеленый BLL — следующий. Раствор одного моля дисазокрасителя (Н-кислота крезидин -> Н-кислота) в рассчитанном количестве водного раствора соды при хорошем перемешивании медленно добавляется к суспензии одного моля хлористого цианура в воде (О—5°). Одновременно прибавляется 10% раствор соды с такой скоростью, чтобы pH раствора поддерживался равным 6. Через 4 часа после начала реакции к суспензии первичного продукта конденсации добавляется нейтральный раствор одного моля натриевой соли п-аминобензолазосалициловой кислоты и реакционная смесь перемешивается в течение 24 часов при 40° и одновременном прибавлении раствора соды для связывания освобождающегося хлористого водорода. В заключение добавляется третья компонента — анилин в количестве 2 молей (1 моль избытка для связывания выделяющейся кислоты), и смесь нагревается [c.662]

Органические анионы и катионы соединяются с белком при помощи такого же типа электровалентной связи. Определенные методические преимущества представляет изучение соединения белков с окрашенными ионами. Если соединение с неокрашенными ионами может быть исследовано лишь при помощи очень трудоемких аналитических методов, то соединение белков с красителями можно изучать спектроскопически, так как процесс связывания ионов красителя сопровождается изменением окраски и спектра поглощения. Этим путем было количественно изучено соединение белков с метиловым оранжевым и другими подобными красителями [8, 9], а также с нитрофенолами [10]. Диали-зируя сывороточный альбумин против метилового оранжевого, удалось установить, что наибольшее число молекул красителя, связываемых одной молекулой белка, равно 22. Метиловый оранжевый является кислым азокрасигелем [c.221]

Реакция восстановления нитратов с участием железа проходит с образованием как окисной, так и закисной сернокислой соли. Присутствие в растворе Ре в концентрации выше 40 мг на 1 л мешает возникновению индофенолового красителя. В то же время Ре + в гораздо большей концентрации почти не влияет на ход реакции. Присутствие Zn не мешает определению ЫН+ фенолятгипохлоритным методом, но скорость растворения цинка в кислоте значительно ниже, чем железа, а следовательно, выделение водорода и скорость восстановления нитратов будут также ниже. Прибавление к цинку небольшого количества железа (4 1) значительно повышает скорость его растворения. Серную кислоту добавляют из расчета полного растворения цинка и железа и связывания образующегося аммиака. Для ускорения реакции вводят некоторый избыток кислоты порядка 10 мг-экв. [c.139]

Смотреть страницы где упоминается термин Связывания красителей метод: [c.466] [c.200] [c.274] [c.291] [c.39] [c.296] [c.163] [c.329] [c.156] [c.377] [c.369] [c.112] [c.389] [c.22] [c.554] [c.391] [c.289] [c.235] [c.1924] [c.1924]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология