Иммунофлуоресцентный метод непрямой

На графике показана зависимость появления различных признаков аутоиммунного заболевания от возраста у самок мышей NZB/NZ N. По оси ординат отложена частота - доля мышей данного возраста, у которых выявляются указанные признаки. Иммунные комплексы определяли с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания почечных срезов, антиядерные антитела в сыворотке - методом непрямой иммунофлуоресценции. Показателем поражения почек служила протеинурия. Аутоантитела к эритроцитам при данном заболевании появляются позднее и поэтому, вероятно, менее связаны с возникновением почечной патологии. У мышей-самцов заболевание возникает примерно на 3 мес позднее. [c.460]

Непрямой иммунофлуоресцентный метод со связыванием комплемента. Этот вариант метода разработан для определения комплемент-связываю-щих антител (см. рис. 29.7). После обработки среза антителами на него наносят в качестве источника комплемента свежую сыворотку. Комплемент связывается в участках, где фиксированы антитела. В результате эффекта усиления при активации комплемента по классическому пути (см. гл. 5) одна молекула антител может вызвать связывание многих СЗЬ-молекул на срезе их выявляют, обрабатывая срез флуоресцентно меченными антителами анти-СЗЬ. [c.533]

Иммунофлуоресцентное окрашивание непрямой метод. Включает два этапа. Препарат фиксируют нагреванием, наносят каплю нелюминесцирующей гомологичной иммунной сыворотки определенного разведения и оставляют на 20—30 мин во влажной камере. Затем осторожно промывают в течение 5 мин. На втором этапе на препарат наносят каплю меченого антикроличьего 7-глобулина, разведенного до так называемого окрашивающего титра. Время инкубации на втором этапе и окрашивающий титр определяют эспериментально. После этого препарат осторожно промывают и микроскопируют при увеличении 90X. Непрямой метод обладает принципиальным преимуществом, так как, имея лишь одну люминесцирующую сыворотку, можно отыскать большое число разных антигенов, используя стандартные кроличьи сыворотки. При непрямом методе, однако, крайне важен контроль, включающий инкубирование препарата на втором этапе непосредственно с меченой сывороткой обработку препарата гетеро-логичной меченой сывороткой обработку препарата на первом этапе нормальной или гетерологичной сывороткой, не содержащей антител к исследуемому антигену. [c.113]

Рис. 4. Непрямой иммунофлуоресцентный метод гаптенизированных антител. Два препарата аллоиммунных антител конъюгированы с двумя гаптенами, не имеющими между собой антигенного перекреста (изображены черными кружками н прямоугольникамв). Их используют вместе с двумя препаратами соответствующих антнгаптеновых антител, меченных флуоресцеином (Ф) или родамином (Р). Это по.зволяет окрасить на поверхности клетки одновре-мелно два аллоантигена (изображены белыми прямоугольниками или треугольниками).

Непрямой иммунофлуоресцентный метод. Раствор немеченных антител наносят на срез, а затем выявляют их при помощи меченных флуорохромом антииммуноглобулиновых антител. [c.533]

Сериани с сотрудниками предоставили данные, показывающие наличие специфических антигенов молочной железы в нормальных и опухолевых клетках молочной железы. Эти исследователи иммунизировали кроликов обезжиренным препаратом верхней фракции отстоенного молока человека. Видоспецифические антитела удалялись из этой сыворотки путем адсорбции на эритроциты человека. Результаты непрямого иммунофлуоресцентного анализа показали, что антитела, содержащиеся в такой антисыворотке, специфически связываются с линиями клеток нормальной молочной железы и карциномы молочной железы человека. Был предложен чувствительный метод радиоиммуноанализа, позволивший получить количественное подтверждение этих результатов. Семь линий карциномы молочной железы и первичные культуры эпителия молочной железы связывали по крайней мере в 10—30 раз больше антител, чем фибробласты молочной железы и эпителиальные клетки из других источников. Трипсинизация клеток МСР-7 и МДА-МВ-157 приводила к снижению реактивности клеток на 80—84%, что указывало на поверхностную локализацию антигенов, специфических для молочной железы [38]. [c.152]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология