Флуоресцирующих антител мето

Рис. 6-35. Измерение скорости латеральной диффузии гликопротеина плазматической мембраны. А. Спепифический гликопротеин метят флуоресцирующим моновалентным антителом, связывающим только этот белок. После обесцвечивания антител лазерным лучом малого сечения измеряют восстановление интенсивности флуоресценции за счет диффузии обесцвеченных молекул из, а необесцвеченных в область облучения. Б. График, показывающий скорость восстаповлепия флуоресценции Чем больще коэффициент диффузии мембранного гликопротеина, тем быстрее

Принцип использования флуоресцирующих антител был приспособлен и для электронной микроскопии антитела или гаптены соединяются с электроноплотными веществами (например, с железосодержащим белком ферритином) или такими, которые могут быть сделаны электроноплотными уже после реакции антиген — антитело (например, с антителом связывается пероксидаза из хрена, которой после связывания дают возможность реагировать с диаминобензидином). На практике используется множество комбинаций, включающих антисыворотки с различными специфичностями, фрагменты антител, гаптены, а также такие маркеры для визуализации, как небольшие вирусы и т. п. Эти методы, применимые к целым бактериям, позволяют локализовать поверхностные антигены точнее, чем это делают с помощью оптического микроскопа. Преимущества электронной микроскопии становятся еще более очевидными, когда меченые антитела применяют еще до фиксации, заливки и приготовления срезов, так что метка видна в тонких срезах. В некоторых случаях аналогичным образом метят не антитела, а другие вещества с известной специфичностью чаще всего применяются лектины растений, такие, как конканавалин А, которые специфично связываются с сахарными остатками [88]. [c.125]

Если такие антитела ввести животному другого вида, можно получить вторичные антитела, которые не будут обладать способностью взаимодействовать с гормоном, но будут связываться с рецептором этого гормона (см. рис. 56). Применение вторичных антител в качестве аффинного сорбента молсет сыгратЬ большую роль в очистке рецепторов. В настоящее время эти антитела широко применяются в изучении локализации рецепторов. Обычно их метят флуоресцирующими агентами, наносят на срезы тканей или в суспензии клеток, а. затем по локализации флуоресцирующего материала [c.140]

Лиганд (например, сАМР или прогестерон) ковалентно связывают с хемилюми-несцирующим соединением (АВЕ1), а антитело делают флуоресцирующим, присоединяя к нему флуоресцеин. Перенос энергии определяется уравнением Ферстера, которое предполагает сближение донора и акцептора на близкое расстояние (около 50 А) [26]. Таким образом, связанный изолюминол излучает зеленый свет, а свободный сохраняет характерное для него голубое свечение. В данной системе можно использовать различные фильтры (полосы излучения достаточно широки), но лучшие результаты получаются при соотношении 460/525 нм. Принцип данного метода заключается в следующем. Антиген (А ) метят хемилюминесцирующим соединением (С), а антитело (АЬ) - флуоресцентным акцептором (Р). При вытеснении А —С определяемым веществом (в данном случае антигеном А и)) неизвестной концентрации расстояние между С и Р становится слишком большим для переноса энергии, так что связанный и свободный антиген легко различимы. [c.498]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология