Тогавирусы центрифугирование

Из относительно небольшого объема культуральной жидкости вирус можно сконцентрировать ультрацентрифугированием. Обычно тогавирусы осаждают центрифугированием при 50 000 g в течение 2 ч. Можно использовать как угловые роторы, так и бакет-роторы в зависимости от объема материала и имеющегося оборудования. Пробирки для угловых роторов следует тщательно закрывать, лучше всего термическим способом, предложенным фирмой Be kman. [c.98]

Вместо непосредственного ультрацентрифугирования вирус можно осадить центрйфугированием при меньшей скорости после добавления ПЭГ. Преципитация обычно ускоряется при добавлении Na l вместе с ПЭГ. Этот метод в общем более удобен при работе с большими объемами содержащей вирус жидкости, так как вместительные роторы для относительно низкоскоростного центрифугирования намного более доступны для большинства лабораторий, чем такие же роторы для ультрацентрифугирования. Кроме того, этот метод более мягкий и обычно приводит к меньшим потерям инфекционности, чем непосредственное ультрацентрифугирование. Описанная ниже методика пригодна для концентрирования некоторых тогавирусов (и других оболочечных вирусов), причем используемые концентрации Na l и ПЭГ, по-видимому, не имеют принципиального значения, однако в конкретных случаях для оптимизации выхода вируса могут потребоваться отдельные модификации. [c.99]

Зональное центрифугирование лучше всего проводить в бакет-роторах или вертикальных роторах, чтобы избежать нежелательного взаимодействия материала со стенками пробирки. Линейные градиенты сахарозы (5—20%, вес на вес) готовят одним из стандартных методов (см. гл. 1, разд. 2.5.1) и сверху осторожно наслаивают раствор вируса. Поскольку при использовании данного метода отсутствует эффект концентрирования в результате образования зоны с соответствующей плавучей плотностью, объем образца не должен превышать 1/10 объема градиента. Центрифугирование следует проводить при 4°С. Время и скорость центрифугирования во многом зависят от геометрии используемого ротора, поэтому можно дать лишь самые приблизительные указания относительно режима. Первоначально используемый режим центрифугирования обычно приходится модифицировать после первых опытов с учетом полученных результатов. В бакет-роторе, например SW27, центрифугирование в течение 2 ч при 27 ООО об/мин позволяет получить достаточную степень очистки большинства тогавирусов. [c.101]

Для изопикнического центрифугирования большинства тогавирусов подходят 20—50%-ные (вес на вес) непрерывные линейные градиенты концентрации сахарозы. В комбинированных градиентах глицерина — тартрата калия [14] верхнюю (менее плотную) часть образует 30%-ный (вес на вес) раствор глицерина в 50 мМ трис-НС1, 1 мМ ЭДТА (pH 7,5), а нижнюю (более плотную)—50%-ный (вес на вес) раствор тартрата калия. pH раствора тартрата калия не должен быть ниже 8,5, так как при более кислых значениях образуется осадок. Из этих растворов обычными способами готовят линейные градиенты. Поскольку в таких градиентах вирус концентрируется в зоне с со- [c.101]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология