Линейный градиент концентрацию

При этом по глубине зерна устанавливается определенный линейный градиент концентраций. [c.68]

Рассмотренный только что для обычной сефарозы, этот вариант элюции, естественно, находит применение и при использовании гидрофобизированной агарозы. В качестве примера процитируем недавно опубликованную работу по мягкой очистке HMG-белка из ядер печени на колонке со-аминобутилагарозы. Этот белок растворим в растворе сульфата аммония вплоть до концентрации, достигающей 70% от насыщения. Сначала такой концентрацией СА в нейтральном 0,01 М трис-буфере высаливали из экстракта ядер большое количество балластного белка. Затем надосадочную жидкость, содержащую около 40 мг белка, вносили на колонку размером 2 X X 30 см, уравновешенную тем же раствором СА. Элюцию вели снижающимся линейным градиентом концентрации СА в том же буфере (500 мл) со скоростью 20 мл/ч, т. е. примерно 7 мл/см -ч. Низкая скорость элюции характерна для всех опытов такого рода ввиду повышенной вязкости концентрированных солевых растворов и соответствующего снижения скорости диффузии макромолекул. Около 30% белка не садилось на колонку и удалялось при первоначальной промывке. В ходе элюции выходило четыре пика, в первом из которых методом электрофореза идентифицировали HMG-белок [ onner. omings, 1981]. [c.181]

Элюцию градиентом концентрации этанола в 0,033 М растворе ацетата натрия (pH 5,1) для аналогичных целей применяла и другая группа авторов [Sottrup-Jensen et al., 1980]. Они работали с колонками, заполненными Spherisorh 5S-0DS , используя комбинацию двух линейных градиентов концентрации этанола при скорости 2 мл/ /мин и температуре 62°. Повышение температуры авторы обосновывают относительно высокой вязкостью этанола. [c.197]

Недавно элюцию ацетонитрплом использовали для фракционирования пептидов на j,-Bondapak- i8 (тоже в течение часа) тремя последовательными линейными градиентами концентрации [c.201]

При разделении относительно крупных бромциановых пептидов ОС-, р- и 7-цепей глобина человека 0,1 %-ный раствор ТФУ, помимо своей роли в осуществлении ион-парной хроматографии, оказался очень полезен как прекрасный растворитель для пептидов, в частности гидрофобных. Кроме того, раствор ТФУ прозрачен вплоть до А, = 216 нм и легко удаляется лиофилизацией. Фракционирование вели на колонке Li lirosorb RP-8 (0,46 X 50 см). Использование сорбента с меньшей, чем в рассмотренных выше примерах, гидрофобностью обусловлено большими размерами пептидов. Колонку уравновешивали 0,1%-ньш водным раствором ТФУ, впрыскивали в нее 100 мкл смеси пептидов и вели элюцию линейным градиентом концентрации изопропанола (от нуля со скоростью нарастания 1,6% в минуту) в течение 1 ч при температуре 28 и скорости подачи элюента 0,7 мл/мин. Профиль элюции показан на рис. 96 (сплошная линия). Пептиды длиной 32, 43 и 64 аминокислотных остатка хорошо отделились друг от друга [Mahoney, Hermod-son, 1980]. [c.204]

Ион-парной хроматографией в присутствии 0,2%-ного раствора ГФМК последовательно на двух различных колонках ig-силика-геля с элюцией линейными градиентами концентрации ацетонитрила (О—50% и 32,5—40%) удалось очистить и разделить две очень близкие формы фактора роста из эпидермиса слюнной железы мыши [Burgess et al., 1982]. [c.206]

Колонкп Оксиапатита обычно предварительно промывают 5 — 10 объемами слабого ( 0,05 М) нейтрального фосфатного буфера. Если стабильность белка требует определенной ионной силы, ее обеспечивают добавлением в буфер для промывки и элюент соли. Элюцию кислых белков ведут ступенчатым или линейным градиентом концентрации фосфатного буфера — вплоть до 0,8 М. Особо прочно сорбированные белки нередко снимают пирофосфатом. Емкость колонки оксиапатита обычно составляет примерно 1—5 мг белка па 1 мл объема колонки, выход белков — 8O —100%. Утрата ферментативной активности наблюдается редко — метод относительно мягок . I По-видимому, механизм сорбции (в частности, [c.228]

Рис. 102. Фракциопировапие трех нуклеаз селезенки иа колонке оксиапатита (2 X 40 см) элюция линейным градиентом концентрации фосфатного буфера pH 6,8 (от стрелки) [Bernardi et al., 1966]

Еще в 1966 г. Бернарди и соавторы [Bernardi et al., 1966] продемонстрировали возможность использования хроматографии на оксиапатите для очистки ферментов иа примере разделения различных нуклеаз селезенки (рис. 102). Элюцию вели линейным градиентом концентрации фосфатного буфера (0,05—0,5 М), pH 6,8. [c.233]

Для очистки мембранной D-лактатдегидрогеназы Е. соИ хроматографией на оксиапатите [Pratt et al., 1979] был использован пологий линейный градиент концентрации (0—0,2 М) К-фосфатного буфера, pH 7,2 (500 мл для колонки размером 2,6 X 20 см). Растворимость белка обеспечивали включением в состав буфера детергентов (1% Тритона Х-100 и 0,1% ДДС-Na). Очистке на оксиапатите предшествовали освобождение фермента из ме.мбрин с помощью дезоксихолата натрия, хроматография на DE-52 и гель-фильтрация на сефадексе G-200. На всех хроматографических этапах очистки в составе элюентов тоже присутствовали детергенты. [c.234]

Еще более четко основной характер белка проявляется в случае ДНК-лигазы. В процессе ее очистки колонку оксиапатита использовали на заключительном этапе. Сорбент уравновешивали 0,1 М КС1, а элюцию вели линейным градиентом концентрации (0—12,5%) сульфата аммония [Graf, 1979[. [c.234]

Приведенные примеры иллюстрируют возможность использования оксиапатита для очистки более или меиее высокополимерной ДНК. На колонках с этим сорбентом удается фракционировать и короткие фрагменты ДНК по их длине. Для фрагментов денатурированной ДНК длиной от 4 до 180 нуклеотидов такое фракционирование было недавно описано [Wittelsberger, Hansen, 1979]. Авторы использовали посадку смеси фрагментов на оксиапатит в воде и элюцию линейным градиентом концентрации фосфатного буфера (0—0,1 М — для очень коротких фрагментов, 0—0,35 М — для более длинных). [c.240]

Использование колонок оксиапатита для исследования процессов ренатурации ДНК было подробно описано еще в 1974 г. [Britten et al., 1974]. В недавно опубликованной работе по кинетике ренатурации ДНК человека и мыши авторы предпочли К-фосфатный буфер и несколько иной подход к разделению нативной и денатурированной ДНК. Вначале они сорбировали на колонку оксиапатита всю ДНК в 0,03—0,05 М буфере при 50°, а затем вели элюцию линейным градиентом концентрации К-фосфатного буфера (0,03—0,4 М). Авторы утверждают, что разделение денатурированной и нативной ДНК в этом случае осуществляется более надежно [Soriano et al., 1981). [c.242]

Разделение пептидов на колонке Mi roPak АХ-10 осуществляли с помощью линейного градиента концентрации соли 25—100% 0,01 М триэтиламмонийацетатного буфера (pH 6) в смеси с ацетонитрилом. Очень кислые пептиды элюировали дополнительно 0,04 М НСООН при 60°. Использование летучих элюентов облегчало дальнейший анализ состава пептидов [ Dizdaroglu et aL, 1982]. [c.300]

П р и м е р 5. Очистка ДНК-полимеразы I из Е. oli [Rhodes et al., 1979]. На первых этапах здесь использовали грубую очистку осаждением полиэтиленимином и сульфатом аммония. Затем следовал этап хроматографической очистки на колонке фосфоцеллюлозы, уравновешенной 0,04 М К-фосфатным буфером (pH 6,9) с обычными добавками, включая 5% глицерина. Введение глицерина продиктовано лабильностью фермента — его активность снижается вдвое за сутки. Препарат вносили в том же буфере, им же промывали колонку, а затем вели элюцию линейным градиентом концентрации этого буфера (0,04—0,3 М). Таким образом, вытесняющий белок контрион (К+) поставлялся самим буфером. [c.304]

М мочевины, 1 мМ ДТТ и 0,5% метиламина. На колонке СМ-целлюлозы (1 X 30 см) линейным градиентом концентрации Na l (О—0,4 М) смесь белков удавалось разделить примерно на 20 фракций (рис. 122). Конечно, по своему качеству это разделение уступает двумерному электрофорезу рибосомальных белков, но зато его можно вести в любом препаративном масштабе и нет проблемы элюции белков из геля. [c.311]

Очистка и фракционирование длинных олигонуклеотидов (до 17 остатков) методом ионообменной ЖХВД требует принятия мер, предотвращающих образование локальных вторичных структур за счет комплементарных участков. Для этой цели было предложено вести элюцию с колонки Partisil 10-SAX линейным градиентом концентрации фосфатного буфера (О—0,3 М), pH 6, в 30%-ном (а в некоторых случаях 60%-ном) растворе формамида при комнатной температуре [Newton et al., 1983]. [c.322]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология