Векторы замещения

Удаление балластного фрагмента — достаточно трудоемкая процедура, требующая фракционирования фрагментов ДНК либо электрофорезом в агарозном геле, либо центрифугированием в градиенте сахарозы. Тем не менее векторы замещения большой емкости обладают тем преимуществом, что очищенные плечи , даже после объединения, т.ают слишком короткую ДНК дтя упаковки в фаговые частицы, т. е. такие ненужные молекулы, не содержащие вставки, не упаковываются в головку фага и не образуют негативные колонии, В практической работе, особенно при получении клонотек геномов, желательно создать такие условия, при которых негативные колонии на чувствительном газоне [c.148]

Существующие в настоящее время векторные фаги Я для каждой конкретной рестриктазы делят на векторы внедрения и векторы замещения. Векторы внедрения имеют на ДНК одно место действия для данной рестриктазы. Если при встройке экзогенного фрагмента ДНК в этот сайт происходит нарушение какого-либо гена исходного фага, селекция гибридных клонов осуществляется как выявление соответствующих фаговых мутантов. Рассмотрим типичных представителей этой группы векторов. [c.100]

Векторы замещения имеют два или больше мест действия рестриктазы на молекуле фаговой ДНК. Заключенные между этими участками фрагменты векторной ДНК замещаются [c.101]

Рис. 2.17. Структура векторов замещения на основе ДНК фага Я. См. обозначения к рис. 2.16

Хотя векторы замещения на основе ДНК фага Я успешно используются при создании биб- [c.104]

Векторы с замещением поздних генов 8 40ДНК. Первые попытки конструирования вирусных векторов были осуществлены с вирусом SV40, в ДНК которого нет протяженных спейсеров. В вирусном геноме замещали на чужДНК поздние или ранние гены. Полученные конструкции являлись векторами замещения с емкостью не более 2,5 т.п.н., причем для работы с ними требовался вирус-помощник. [c.398]

До разработки более совершенных векторных фагов самыми популярными векторами замещения на основе фага Я, предназначенными для клонирования соКГфрагментов, являлись штаммы Яgt-Я , Яgt-ЯB (см. рис. 2.17, а, б), в которые можно встраивать соК1-фрагменты ДНК размером до 15,1 тпн. Популярность этих векторов обусловлена тем, что их векторная часть Яgt-0 (правый и левый концы ДНК фага без внутреннего соКЬфрагмента) не образует жизнеспособного фагового потомства, так как молекула ДНК Яgt-0 слишком короткая. Гибридные же ДНК дают жизнеспособное фаговое потомство. [c.101]

Удобны векторы замещения на основе транс-дуцирующих фагов Я (см. рис. 2.17, г-е). При встраивании в эти векторы экзогенной ДНК обычно из фаговой ДНК удаляются фрагменты, в состав которых входят трансдуцируемые этим фагом бактериальные гены. Гибриды выявляются на соответствующих мутантных бактериальных клетках как фаги, утратившие бактериальный ген и поэтому уже не комплементирую-щие мутацию в клетке-хозяине. [c.101]

Фазмиды имеют важные преимущества перед векторами других типов, используемыми для создания библиотек генов. В отличие от векторов замещения фага Я нет необходимости отделять векторную молекулу ДНК от внутреннего балластного фрагмента, что существенно упрощает процедзфу подготовки вектора к встройке чужеродной ДНК. Более того, это [c.109]

С помощью литических векторов замещения поздних генов вируса 8У40 в клетках животных изучена экспрессия ряда других эукариотических хромосомных и вирусных генов, а также ДНК-копий некоторых матричных РНК. Доказано, что в различных клетках млекопитающих механизмы инициации транскрипции генов, сплайсинга и полиаденилирования мРНК, трансляции и секреции белков во многом схожи. Кроме того, обнаружено, что синтезируемые в клетках животных чужеродные белки могут подвергаться гликозилированию. К недостаткам данных литических векторов необходимо отнести прежде всего то, что активная экспрессия клонированных генов происходит лишь на позднем этапе цикла развития гибрид- [c.361]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология