Векторы, вирусные и плазмидные

Рис. 21.7. Аденовирусный вектор. В клетку-хозяина, несущую интегрированный в геномную ДНК функциональный ген Е1 аденовируса, вводят встроенную в сегмент аденовирусного генома (0-17 единицы карты) плазмиду с терапевтическим геном (ТГ) и участок геномной ДНК аденовируса (9-100 единицы карты). Длина генома аденовируса равна 100 единицам. В результате рекомбинации (штриховая линия) между перекрывающимися участками плазмиды и ДНК аденовируса образуется молекула ДНК, эквивалентная полноразмерному вирусному геному. Рекомбинантная ДНК, содержащая терапевтический ген, упаковывается и высвобождается из клетки после лизиса. Образующиеся вирусные частицы дефектны по репликации. Плазмидная ДНК, входящая в состав конечной генетической конструкции, не влияет на упаковку рекомбинантной ДНК (не показано).

Охарактеризуйте преимущества и недостатки вирусных и плазмидных векторов. [c.431]

Важным этапом работы по генетической трансформации растений является выделение и клонирование генов, создание на их основе векторов для переноса чужеродных генов из клеток-доноров в клетки-раципиенты. Использование плазмидных, транспозонных, вирусных, пневмобалли-стических и других векторных систем позволяет исследователям осуществлять трансформацию растительных генотипов и получать трансгенные (модифицированные) растения с заданными или близкими к ним свойствами и качественными характеристиками. [c.422]

Рис. 9.4. Линейная карта вектора pMV-7, содержащего внутренний промотор [26]. pMV-7 — производное Mo-MSV, содержит уникальные рестрикционные сайты oRI и h indlU, которые используются для клонирования генов, функцию селективного маркера выполняет ген neo под контролем .4-промотора (Р(к) вируса герпеса простого. Волнистой линией обозначены ген устойчивости к ампициллину (Лр ) и другие плазмидные последовательности, которых нет в вирусных геномах — производных векторной ДНК.

Не все уверены в целесообразности патентования, некоторые считают, что предоставление монопольных прав ограничивает конкуренцию, приводит к повышению цен, сдерживает новые разработки, способствует процветанию больших корпораций в ущерб интересам отдельных изобретателей и небольших компаний. Несмотря на все это, патентная система стабильна и хорошо развита. Более того, стало ясно, что патентование не тормозит фундаментальные исследования и научную деятельность фирм и компаний. Так, если бы оно служило серьезным препятствием для инноваций, то патент США за номером 4 237 224, выданный Стэнли Коэну и Герберту Бойеру в 1980 г. на использование вирусных и плазмидных векторов для создания рекомбинантных ДНК, должен был в значительной степени затормозить развитие молекулярной биотехнологии (рис. 23.1). Совершенно очевидно, что ничего подобного не произошло. [c.539]

И ча с М,, Биологический код, пер, с англ,, М., 1971. ГЕННАЯ ИНЖЕНЕРИЯ (генетич. инженерия), совокупность методов, позволяющих искусственно получать молекулы ДНК, содержащие генетич. информацию из двух или более источников любого биол. и (или) хим. происхожде-пия. Осп. этапы Г. и. I) фрагментация молекул ДНК из ра, л. источников (бактерий, вирусов, культуры клеток, ткапей, целых организмов), обычно с помощью рестрикта-зы, или искусств. х1[мико-ферментативный синтез фрагмента ДНК 2) расщепление с номогцью этого же фермента молекулы ДНК (вектора), способной автономно реплицироваться в клетке (обычно это плазмидная или вирусная ДНК) 3) соединение фрагментов ДНК с вектором в еди- [c.125]

Технология рекомбинантных ДНК открывает новые замечательные возможности для дальнейшего изучения экспрессии генов и функционирования их белковых продуктов у самых разных организмов. Что касается вируса гриппа, то молекулярное клонирование позволило не только быстро накопить обширную информацию о первичной структуре всех вирусных генов (хотя, например, для НА-гена этот подход оказался наиболее продуктивным), но и конструировать in vitro определенные мутанты. В настоящее время гены, кодирующие белки НА, NA, М и NS, уже вводятся в составе бактериальных плазмидных векторов в эукариотические клетки, где и экспрессируют соответствующие полипептиды [20]. В этих опытах обычно используют плазмидные конструкции, несущие промоторы SV40, поэтому клеточные РНК-полимеразы II могут эффективно инициировать синтез РНК, содержащих генетическую информацию вируса гриппа. Правда, экспрессия носит обычно временный характер и ограничена цитопатическим эффектом. С другой стороны, интеграция НА-гена вместе с селективным маркером (таким, как клеточный ген тимидинкиназы) приводит к стабильной экспрессии [20]. [c.469]

Получение библиотеки ДНК с помощью вирусных или плазмидных векторов [56] [c.327]

Клонирование того или иного гена начинается с создания библиотеки ДНК в вирусном или плазмидном векторе. Принципы, лежащие в основе клонирования генов, для обоих этих типов векторов одинаковы, хотя в деталях методы могут и различаться. Ради простоты мы в этой главе пренебрежем различиями и проиллюстрируем методы, о которых идет речь, применительно к плазмидам [c.327]

Чтобы получить вирусный препарат на основе дефектного по-репликации рекомбинантного ретровирусного вектора, плазмидную ДНК, содержащую провирусную форму рекомбинанта, необходимо ввести в клетки, способные упаковать ретровирусную РНК в вирусные частицы. Для этой цели подходят, например, линии фибробластов, продуктивно инфицированные соответствующим хелперным вирусом — получается вирусный препарат, представляющий смесь рекомбинантного и хелперного геномов (разд. 9.4,2). Альтернативный вариант — использование ретровирусных упаковывающих клеточных линий для получения вирусных препаратов, свободных от хелперных компонентов. [c.287]

Одно из преимуществ описываемой процедуры получения трансгенных мышей по сравнению с другими методами состоит в том, что любую клонированную ДНК (в лямбоидном, плазмидном или космидном векторе) можно ввести в зиготу, где она интегрируется в геном и оказывается включенной в формирование зародышевого пути. Дополнительные манипуляции, такие, как переклонирование в специальные векторы и получение вирусных препаратов, здесь не требуются. Следует, однако, подчеркнуть, что эффективность микроинъекции в большой степени зависит от качества и свойств вводимой ДНК [15J. Ниже мы рассмотрим этот вопрос подробнее. [c.341]

Репликатор вируса Эпштейна—Барр (EBV). Этот герпесви-рус инфицирует только В-лимфоциты приматов, не вызывая их лизиса. Некоторые из этих клеток приобретают способность к неограниченному делению, превращаясь в лимфобласты, в ядре которых вирусная кольцевая ДНК (172 т.п.н.) реплицируется и п эддерживается в виде мультикопийной плазмиды. На основе репликатора EBV создан ряд челночных плазмидных векторов. [c.409]

Скорость роста заражежых клеток на 25-50 % ниже, чем неинфицированных. Поэтому при титровании нитевидные фаги образуют на бактериальном газоне мутные бляшки. При размножении нитевидных фагов в бактериальной клетке их геном одновременно присутствует в виде большого числа копий двухцепочечной кольцевой плазмиды и одноцепочечной ДНК в составе вирионов. Из одного литра инфицированной культуры получают несколько миллиграммов одноцепочечной и репликативной двухцепочечной форм фаговой ДНК. На одноцепочечной вирионной ДНК многие манипуляции по созданию гибридных молекул, разработанные для вирусных и плазмидных двухцепочечных ДНК, реализовать нельзя. Однако они с успехом применимы к репликативной форме генома нитевидных фагов, которая инфекцион-на в тесте трансфекции клеток Е. oli. Все это обусловило использование нитевидных фагов для создания клонирующих векторов. [c.111]

Когда используются фаговые векторы, жизнеспособным продуктом, содержащим сконструированную рекомбинантную ДНК, является популяция фаговых частиц. В отличие от ситуации с плазмидными векторами, когда производятся клонирование и отбор содержащих их клеток, рекомбинантный фаговый геном можно клонировать непосредственно. Нри таком клонировании образуются блящки на газоне чувствительных клеток-хозяев (рис. 11.13). Фрагменты чужеродной ДНК, встроенные в популяцию фаговых векторных ДНК in vitro, и соответствующие рекомбинантные фаговые геномы можно затем ввести в клетки пермиссивного хозяина в виде изолированной ДНК (трансфекция) или реконструированных вирусных частиц (инфекция). В любом случае в клетте, инфицированной одной молекулой [c.237]

SV -плазмидные векторы. 8У40-векторы второго типа способны реплицироваться в клетках обезьян, но не могут упаковываться с образованием вирусных частиц (рис. 5.38). Для них существенно [c.262]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология