Мембраны фракционирование фрагментов

Следует указать, что количественная характеристика внутриклеточных органелл зачастую затруднена. Это обусловлено тем, что изопикнические точки различных органелл могут перекрываться, и фракционирование при одной и той же скорости седиментации приводит к оседанию фрагментов нескольких органелл. Трудности идентификации могут быть также связаны с тем, что различные ткани имеют разные маркеры для одних и тех же органелл. Например, маркерные ферменты одного типа мембран могут проявлять активность и в других типах мембран, например, 5 -нуклео-тидазой в основном обогащены плазматические мембраны, однако эта активность присутствует также в аппарате Гольджи и эндоплазматической сети. [c.236]

Хотя многие детергенты оказывают на белки сильное денатурирующее действие, некоторые детергенты разрушают митохондриальныё-мембраны с сохранением ферментативной активности. Наиболее пред почтительным среди них является дигитонин (рис. 12-18), вызываЮ1Ц1й№ разрушение наружной мембраны. Остающиеся фрагменты внутренней мембраны сохраняют способность к окислительному фосфорилированию. Последующее фракционирование субмитохондриальных частиц, проводится с помощью химической обработки. Одна из таких процедур дает набор комплексов , катализирующих реакции четырех разных, частей цепи переноса электронов [69]. Реакции, катализируемые комплексами I, II, III и IV, указаны в уравнении (10-10). [c.399]

Принцип фракционирования схематически показан на рис. 7.3. Вначале мембраны физически нарезают на крошечные везикулы. Частицы высокой плотности, с которыми ковалентно связан специфический для выделяемого рецептора аффинный лиганд, добавляются к мембранным фрагментам, несущим данный рецептор. Образующийся между добавленным аффинным лигандом и мембранными частицами комплекс быстро отделяется на ультрацентрифуге, поскольку имеет большую плотность. Для того чтобы избежать трудностей, обусловленных небольшими количествами соответствующих рецепторов, мембраны и аффинные лиганды хметят разными радиоактивными изотопахми. Образование комплексов между мембраннымп фрагментами и аффинными частицами может быть блокировано или, если необходимо, исключено путем добавления реагентов с более высоким сродством к аффинному лиганду, чем у данного рецептора, или путем введения избытка аналога рецептора, обладающего близким сродством. Частицы, изменяющие плотность, могут быть видимы в электрон- [c.165]

Препарат хромосом человека, не содержащий примеси клеток, может быть получен при соответствующей обработке, вскрывающей плазматическую и ядерную мембраны клетки. В семидесятых годах были разработаны методы фракционирования и проточной микрофлуоримет-рии, позволяющие осуществлять сортировку хромосом на фракции, содержащие индивидуальные хромосомы человека высокой чистоты (рис. 18.13). Когда свободные хромосомы добавляют к культивируемым клеткам мыши, то эти клетки могут захватывать целые хромосомы в процессе эндоцитоза. Внутри реципиентной клетки захваченные хромосомы обычно деградируют, распадаясь на фрагменты. Если такие фрагменты содержат центромерные области, то они могут поддерживаться как единое целое. Фрагменты, лишенные центромеры, могут транслоцироваться на мышиные хромосомы. В том и другом случае определенные человеческие гены будут экспрессироваться в гибридных клетках (рис. 18.14). Встраивание фрагментов в хромосому мыши происходит с очень низкими частотами, от 10 " до 10 на клетку. Встраиваемые фрагменты могут быть как очень мелкими, не видимыми в световой микроскоп, так и достаточно крупными, включая плечи хромосом и даже целые хромосомы. Такой перенос генетического материала от донора, сопровождающийся встраиванием в хромосомы реципиента, называется трансформацией (как у бактерий) или трансфекцией. [c.304]

Результаты фракционирования зависят от способа разрушения, состава среды и типа клеток, так как эти факторы определяют характер разрыва мембран и, следовательно, размеры образующихся фрагментов. Так, при непродолжительной гомогенизации из плазматических мембран получаются довольно крупные фрагменты, осаждающиеся вместе с ядерной фракцией. В этом случае мик-росомальная фракция содержит небольшое количество везикул, образованных из клеточной мембраны. Если при гомогенизации получаются мелкие пузырьки, то отделить фрагменты наружной [c.65]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология