Фазмиды

На самом деле, реальные векторы должны обладать еще целым рядом свойств в зависимости от целей их применения. Так, очень важно, чтобы вектор позволял осуществлять вставку чужеродной ДНК различной молекулярной массы и чтобы свойства вектора давали возможность различать клоны бактерий, несущих исходные векторные и рекомбинантные молекулы. Удобно работать с небольшими по размеру векторами, которые к тому же дают большое число копий на клетку, что облегчает выделение и очистку векторной и рекомбинантной ДНК. Векторная молекула должна иметь как можно больше единичных последовательностей, узнаваемых различными рестриктазами, что может обеспечиваться введением полилинкеров. Лучше всего разработана система вектор — хозяин для бактерий Е. соИ. В этом случае используется четыре типа векторов 1) плазмиды 2) бактериофаг Я. 3) производные бактериофага Я, (космиды и фазмиды) [c.143]

I, Р2, Р22, Mul), профаги других фагов присутствуют в клетке в виде самостоятельных репликонов — плазмид (иапример, профаг Р1 Е. соИ). Такие фаги иногда называют фазмидами, подчеркивая их сходство с типичными фагами и с типичными плазмидами. Состояние профага может переходить в состояние лити-ческого развития после индукции. Индукция является следствием инактивации ренрессора. При этом появляется возможность экспрессии генов, ответственных за осуществление литического [c.171]

В классе нематод два подкласса (афазмидиевые и фазмидие-вые) с тремя десятками отрядов. Число описанных видов достигает 20 ООО. [c.80]

У плазмид на основе репликона olEI есть и недостатки. Одним из них является снижение числа копий на клетку при увеличении молекулярной массы гибридной плазмиды. Для плазмид этого типа выход рекомбинантов падает с ростом молекулярной массы вставки. Это обстоятельство делает малоэффективным клонирование в плазмидах фрагментов ДНК, превышающих 10 Т.П.О. Для клонирования фрагментов большей длины используют фаговые векторы, космиды и фазмиды. [c.146]

Фазмиды. Фазмидами называют гибриды между фагами и плазмидами, способные развиваться и как фаг, и как плазмида. Такая двойственная форма существования, вернее сосушествова- [c.149]

По клонирующей емкости фазмиды сравнимы с векторами на основе фага К и значительно уступают космидам (см. рис. 23). Однако возможность смены фаз, т. е. экспериментально регулируемая возможность развития по фаговому или плазмидиому пути, дает ряд преимуществ фазмидным векторам. Преимущества эти осознаны и использованы лишь недавно, хотя гибриды между [c.150]

Главное преимущество фазмид — относительная простота комплементационного анализа. Действительно, как уже отмечалось, первичное клонирование больших фрагментов ДНК удобно проводить на фаговых векторах, а комплементационный анализ, реорганизацию фрагментов — с использованием плазмидных векторов. Фазмиды дают уникальную возможность отказаться от переклонирования генов из фаговых в плазмидные ве.кторы, а вместо этого применять для комплементационного анализа первич- [c.151]

В этот вектор также вставлен межгенный район однонитевого фага М13. При лизисе клеток, содержащих такую гибридную плазмиду (фазмиду), и суперинфицированных специальным фагом-помощником М13, образуются гибридные однонитевые ДНК в высоком титре (и в том числе клонированный ген), которые могут быть использованы для определения последовательности оснований. Преимущество такой конструкции перед фагом [c.153]

В большинстве экспериментов по молекулярному клонированию используется сложная смесь фрагментов ДНК- Существуют специальные приемы, позволяющие отобрать клоны, содержащие рекомбинантные молекулы ДНК. Например, при использовании фазмид дают урожай исключительно фаговые корпускулы, в головки которых пакуются рекомбинантные молекулы. При применении плазмид отбирают клоны с рекомбинантными ДНК по инактивации одного из маркеров плазмиды и т. д. Гораздо сложнее найти среди рекомбинантов клон, несущий нужный исследователю ген. [c.154]

Для клонирования генов в клетках Е. oh применяют векторы, сконструированные на базе ДНК плазмид и фагов, а также векторы, сочетающие в себе их свойства (фазмиды, фагмиды и космиды). В силу различных биологических и физических характеристик различные векторы используют для разных целей (табл. 7.2) [c.238]

Стадия упаковки ДНК космид в фаговые частицы используется лишь для облегчения процесса введения рекомбинантных ДНК большого размера внутрь бактериальных клеток. Такой процесс имитирует проникновение фаговой хромосомы в бактерии во время фаговой инфекции. В случае космид сходство между их проникновением в бактериальные клетки и фаговой инфекцией на этом заканчивается. Однако сходство является более глубоким в случае векторов, называемых фазмидами. Фазмиды представляют собой векторные молекулы ДНК, которые содержат в себе генетические элементы плазмид и хромосом бактериофагов. Они могут обладать емкостью в отношении клонируемой ДНК, характерной для А,-векторов, и существовать в определенных условиях в бактериальных клетках в виде плазмиды или же упаковываться в фаговые частицы in vivo при изменении этих условий. [c.85]

Отметим, что умеренные фаги, прсфаг которых находится в плазмидном состоянии, называют фазмидами. Именно к таким объектам относится фаг N15 [c.121]

Плазмиды и фаги играют фундаментальную роль в эволюции бактерий, содействуя горизонтальному переносу генетических модулей, кодирующих самые разнообразные функции. Природа использует их в качестве своеобразных векторов для своих генно-инженерных целей. Паразитические и (или) симбиотические взаимодействия этих автономно реплицирующихся генетических элементов между собой, а также со своими хозяевами способствовали быстрой и многосторонней эволюции молекулярных адаптивных механизмов. Изучение эволюции таких сравнительно простых биологических объектов может способствовать пониманию закономерностей, которым следует молекулярная эволюция более сложных биологических систем. Наиболее интересными объектами в этом плане являются фазмиды. [c.125]

Напомним, что фазмиды сочетают в себе свойства плазмид и фагов. Эти свойства разделены во времени. В лизогенном состоянии фазмида ведет себя как плазмида, а при литическом развитии — как вирус. Существование фазмид ставит фундаментальную проблему эволюционного плана об их происхождении. Как [c.125]

Плазмиды и вирусы не могут размножаться вне клеток, поэтому, вероятнее всего, их репликаторы произошли от клеточных. Представление о плазмидах как об обособивщихся клеточных репликаторах не вызывает логических противоречий. Можно также допустить, что в процессе эволюции такой репликатор приобрел информацию о белковой оболочке, которая затем трансформировалась в капсид. Так в результате могли образоваться предки фазмид. [c.126]

Конечно образование фазмид происходило и в относительно недавнее время благодаря рекомбинации между плазмидными и фаговыми геномами. В частности, учитывая высокую степень гомологии между структурными генами фагов ф80 и N15, можно предположить, что к созданию фазмиды N15 привела рекомбинация некоторой реликтовой линейной плазмиды, имеющей щпи-лечные концы, с прародителем фага ф80. [c.126]

НЫХ вирусов они прошли мимо плазмидной фазы жизни . Ведь их репликаторам необходимо было иметь достаточно времени, чтобы приобрести (сформировать ) информацию о морфогенетических и литических функциях и стать вирусами как таковыми. В течение этого времени их репликаторы были, очевидно, автономными, т. е. были плазмидами. Следовательно, первые вирусы бьши фазмидами. Затем большинство вирусов, по-видимому, утратило плазмидные свойства, в результате чего они потеряли универсальность, но стали более эффективными литическими агентами. Таким образом, вероятнее всего, бактериальные вирусы являются редуцированными формами фазмид. [c.127]

Как следует рассматривать фазмиды с эволюционной точки зрения Являются ли они промежуточными звеньями между плазмидами и бактериальными вирусами (плазмиды фазмиды -> вирулентные фаги) или продуктом их эволюционного взаимодействия [c.127]

Фазмидные векторы так же как и фаговые, используют для клонирования кДНК и геномной ДНК. Эффективность упаковки рекомбинантных фазмид в фаговую головку с последующим инфицированием клеток Е. oh превосходит эффективность трансформации бактерий плазмидами в 100 раз. Это существенно облегчает конструирование банков генов, содержащих до миллиона независимых клопов, повышая тем самым вероятность изолирования редких клонов. И сам процесс скрининга в данном случае также существенно облегчен, так как рассев фагов на чашки может проводиться с высокой плотностью, а фон ложных ответов обычно мал (см. гл. 9). Однако большой размер фаговых и фазмидных векторов затрудняет рестрикционный анализ клонированных генов и их секвенирование, так что после нахождения [c.221]

Максимальный размер фрагментов ДНК, которые можно клонировать в фазмидах, обычно несколько меньше допустимой величины встройки для векторов на основе ДНК фага Я (этот размер легко высчитать, зная величину вектора см. 2.2.2). Фазмиду выделяют из клеток в виде плазмиды, гидролизуют определенной рестриктазой и лигируют с продуктами неполного гидролиза изучаемой ДНК, после чего проводят упаковку ДНК в капсиды фага Я. [c.109]

Векторы, основанные на использовании ДНК фага X или его os-сайта, имеют емкость до 22 (фаговые векторы и фазмиды) и даже 45 т.п.н. (космиды). Они практичны в работе, и поэтому их используют для создания геномных библиотек (см. гл. 9). Клонирование и анализ небольших фрагментов ДНК в них менее эффективны. [c.238]

Пользуясь материалом гл. 4, обсудите свойства фазмид Р1 и N15 как объектов природной геномной инженерии. [c.439]

При выполнении определенного типа экспериментов по созданию и изучению геномных клонотек удобно использовать фазмиды — мо- [c.109]

Фазмиды имеют важные преимущества перед векторами других типов, используемыми для создания библиотек генов. В отличие от векторов замещения фага Я нет необходимости отделять векторную молекулу ДНК от внутреннего балластного фрагмента, что существенно упрощает процедзфу подготовки вектора к встройке чужеродной ДНК. Более того, это [c.109]

Таким образом, применение фазмидных векторов упрощает процедуру пол) ения и отбора гибридных молекул ДНК, так как только гибридные фазмиды могут образовывать на бактфиальном газоне фаговые бляшки. В отличие от космидной или фаговой векторных систем фазмидный вектор существует в клетке в виде плазмиды, а клонотека получается и хранится в виде суспензии гибридных фагов. [c.110]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология