Гидролиз нуклеазами

Для определения нуклеотидной последовательности в олигонуклеотидах их гидролизовали нуклеазами, как это будет описано далее, и затем идентифицировали нродукты гидролиза. Для анализа нуклеотидов, полученных нри гидролизе РНК рибонуклеазой Ti, наиболее пригодна панкреатическая РНК-аза, и, наоборот, если РН1 гидролизовали панкреатической РНК-азой, для анализа полученных нуклеотидов использовали рибонуклеазу Ть В обоих случаях конечные продукты гидролиза одинаковы они содержат мононуклеотиды Г, Ц и У и олигонуклеотиды с разным числом остатков А, имеющие на З -конце Г, Ц, или У. Большинство этих продуктов можно разделить с помощью электрофореза нри pH 3,5 (фиг. 3). [c.64]

Другой метод изучения гомологии, который можно назвать методом реассоциации в растворе, основан на связывании одноцепочечных нуклеиновых кислот в растворе, т. е. в данном случае, в отличие от мембранного метода, когда один из компонентов связан, оба компонента находятся в растворе. За реассоциацией цепей ДНК можно следить с помощью ультрафиолетовой спектрофотометрии или, в случае инкубации небольшого количества денатурированной ДНК с высокой удельной радиоактивностью в присутствии большого избытка немеченой денатурированной ДНК, с помощью измерения радиоактивности. В последнем случае способность меченых фрагментов образовывать двухцепочечные комплексы с немеченой ДНК количественно определяют по адсорбции на гидроксилапатите или по устойчивости к гидролизу нуклеазой 51. [c.130]

HMG-белки имеют невысокую молекулярную массу. Они обогащены как основными, так и дикарбоновыми аминокислотами. Содержание HMG-белков составляет примерно /ю от содержания гистонов. В ядрах из разных типов клеток оно может варьировать. В данном контексте нас больше всего интересуют белки HMG-14 и HMG-17, для которых были получены данные о возможной роли в активации транскрипции. X. Вайнтрауб (США) показал, что экстракция ядер 0,35 М Na l, которая извлекает HMG-белки, меняет некоторые свойства активного хроматина, которые восстанавливаются при добавлении к хроматину HMG-14 и HMG-17. Г. Диксон (Канада) обнаружил эти белки в составе нуклеосом, освобождавшихся из хроматина на ранних этапах гидролиза нуклеазой, которые, по его данным, были обогащены ДНК тракстипционно активных генов. [c.157]

Ступенчатые концы фрагментов ДНК можно сделать ровными. Выступаюш ий З -конец можно гидролизовать нуклеазой 81 или нуклеазой из проростков золотистой фасоли. Но лучший результат достигается использованием 3 - 5 экзонуклеазной активности ДНК-полимеразы фага Т4 в присутствии всех четырех [c.245]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология