Количественные методы определения инфекционное нуклеиновых кислот

Количественные методы определения инфекционности нуклеиновых кислот [c.174]

На ранних этапах изучения инфекционной РНК ВТМ важно было установить отсутствие в ней вирусного белка с большей точностью, чем это позволяет чувствительность описанных методов. При использовании стандартных методов выделения нуклеиновых кислот содержание белка в выделенном препарате редко бывает ниже 1 %, а в случае ВТМ это соответствует комплексу одной молекулы РНК ВТМ с одной субъединицей оболочечного белка. Однако если выделять РНК в присутствии бентонита, то загрязнение препарата белком значительно снижается. А в случае ВТМ содержание примеси можно снизить еш,е больше (до 1 белковой субъединицы на 20—50 молекул РНК), если использовать метод реконструкции вируса (см. ниже). Определение следовых количеств примесей всегда сопряжено с трудностями методического характера, а достоверность результатов, полученных с помощью различных тестов на минимальных концентрациях веществ, сомнительна. Для определения примеси белка в препаратах вирусных нуклеиновых кислот были поставлены опыты с радиоактивной меткой ( 8) белка. Все, что удалось извлечь из этих опытов, сводится к тому, что содержание остаточного белка, судя по количеству метки, соответствует 0,04% (при пересчете на содержание серы в белковой оболочке ВТМ). Действительно, то соотношение аминокислот, которые в следовых количествах были обнаружены в препаратах нуклеиновых кислот, не соответствует количественным соотношениям этих же аминокислот в белковой оболочке. Тот факт, что препараты, содержащие 0,04 и 1% белка, не различаются по своей инфекционности (на 1 мг РНК), убедительно доказывает, что инфекционность — свойство, присущее вирусной РНК [142, 455]. Положение это убедительно было доказано только для РНК ВТМ. Однако нет никаких оснований сомневаться в том, что вывод этот носит общий характер и что инфекционность всех вирусов заключена в их нуклеиновых кислотах. [c.179]

Инфекционность облученных нуклеиновых кислот была изучена в экспериментах с ДНК и РНК, изолированных из бактериофагов. Термином инфекционность обозначают способность вирусной ДНК или РНК индуцировать образование бактериальной клеткой новых полноценных фагов. Методически эксперимент выглядит так бактерии обрабатывают лизоцимом, и они теряют часть клеточной стенки — образуются сферонласты, которые можно инфицировать нуклеиновой кислотой, выделенной из бактериофага. Если в инфицированной бактерии возникают новые полноценные фаги, то бактериальная стенка разрывается и из лизировавшей бактерии высвобождается 100—200 бактериофагов количество вирусных частиц, высвободившихся из лизированных сферопластов, в определенных пределах пропорционально количеству молекул ДНК или РНК, сохранивших инфекционные свойства. Так как высвободившиеся фаги лизируют новые сферопласты вблизи места своего -возникновения, то на сплошном газоне бактериальных клеток, выращенных на агаре, образуется пятно лизиса — бляшка (количество бляшек можно подсчитать визуально), — их число служит количественным критерием инфекционности вирусной нуклеиновой кислоты. Этим методом определяют инактивацию вирусной ДНК в результате облучения. Результаты одного из таких экспериментов приведены на рис. 1П-3. [c.63]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология