Г Электрофорез нуклеиновых кислот в агаровом и агарозном гелях

И 1.1.1. Электрофорез нуклеиновых кислот в агаровом и агарозном гелях [c.369]

Агаровые и агарозные гели обладают свойствами молекулярного сита, что позволяет применять их в качестве поддерживающей среды при электрофоретическом- разделении высокомолекулярных нуклеиновых кислот. Для этой цели используют агаровые гели с концентрацией 1,25—2,5% [72, 824, 927, 1303, 1305, 1306]. При электрофорезе в этих гелях часто применяют фосфат-цитратный буфер с pH 8,0 или натрий-фосфатный буфер с pH 6,0. [c.369]

Наряду с агаровыми гелями в качестве поддерживающей среды при. электрофорезе нуклеиновых кислот используют и агарозные гели. Мак-Индоу и Манро [852] нащли, что в 2%-ном агарозном геле нуклеиновые кислоты разделяются главным образом в соответствии с их молекулярной массой. Проведение электрофоретического разделения нуклеиновых кислот в различных буферах, включая трис-ацетат, трис-фосфат и трис-НС1 [533—535], показало, что на их разделение помимо молекулярной массы влияют и другие факторы. Одноцепочечные молекулы ДНК с мол. массой от 1,2 млн. до 40 млн. можно разделять в 0,6%-ном агарозном геле при условии, что разница в молекулярной массе между молекулами составляет не менее 5%. Подвижность двухцепочечных молекул ДНК почти не зависит от их молекулярной массы. С помощью электрофореза в агарозном геле можно также разделять комплементарные цепи ДНК бактериофагов [535]. [c.370]

Агарозные гели используются для фракционирования белкоа и нуклеиновых кислот (гель-фильтрация, электрофорез) и их характеристики (иммунодиффузия, иммуиоэлектрофорез). Б агаровых гелях иммобилизуют бактерии и лимфоидные клетки а молекуляр-но-биологических и иммунологических исследованиях. [c.501]

Для электрофоретического разделения нуклеиновых кислот с успехом применяются крахмальные, агаровые, агарозные и полиакриламидные гели, а также полиакриламидные гели, содержащие агарозу. По электрофорезу РНК [105] и ДНК [387] в крахмальном геле имеется сравнительно мало работ. Электрофорез в других поддерживающих средах дает более высокое разрешение. Ричардс и Леканиду [1086] пришли к заключению, что методом электрофореза в полиакриламидном геле можно разделить смесь полинуклеотидов, имеющих мол. массу менее 10 000 и различающихся по длине всего на один нуклеотидный остаток. Рубину [1117] удалось разделить 4S-, 5S- и 5.8S-PHK. Филлипс и Тимко [1004] описали разделение 5S-PHK на два компонента. Определяя степень разрешения, которую можно достигнуть при электрофоретическом разделении РНК, они сделали вывод, что для молекул РНК, имеющих константы седиментации между 22 и 45S, степень разрешения составляет две единицы S в случае двух параллельных проб ошибка определения будет равна 5%. При шести повторных определениях степень разрешения составляет одну единицу S даже для более мелких молекул. Эти примеры свидетельствуют о том, что методы электрофореза в гелях дают превосходное разрешение при фракционировании нуклеиновых кислот. [c.369]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология