Электронная микроскопия гетеродуплексов

II. Электронная микроскопия гетеродуплексов [c.136]

Вопреки распространенному мнению электронная микроскопия ДНК представляет собой простую, быструю и надежную методику. При этом изучаются индивидуальные молекулы ДНК и можно увидеть все молекулы, так что этот метод очень хорошо дополняет метод электрофореза в геле. При электрофорезе в геле выявляются лишь популяции молекул с одинаковыми размерами. Помимо обычной визуализации ДНК можно, исследуя гетеродуплексы, проводить картирование негомологичных областей. [c.51]

Справедливость этого вывода была подтверждена сначала данными рекомбинационного анализа стабильные мутации (делеции), введенные в скрещивание, сокращали генетические расстояния между фланкирующими мутациями, т. е. расположенными справа и слева от делеций. В дальнейшем выпадение участка ДНК продемонстрировали на гетеродуплексах, полученных путем гибридизации ДНК из фага дикого типа и из делеционного мутанта. При этом в участке, соответствующем делеции rll, образовывалась однонитевая петля за счет лишней ДНК из дикого типа, хорошо различимая в электронный микроскоп. [c.376]

Процесс репликации ДНК в фагах и в митохондриях мышиных клеток, был исследован методом электронной микроскопии с использованием в качестве маркеров денатурационных петель. Эти петли представляют собой небольшие участки ДНК, денатурирующиеся в процессе подготовки препаратов для электронно-микроскопических исследований. Возможно, что эти петли ДНК образуются в участках с низким содержанием G -nap или в участках, обладающих по каким-либо другим причинам пониженной стабильностью по сравнению с остальными участками ДНК Петли чем-то напоминают гетеродуплексьь (разд. Г, 8, в), однако возникают они по другой причине. В кольцевой, митохондриальной ДНК мыши можно видеть две такие петли, отстоящие-одна от другой приблизительно на 180° и отличающиеся друг от друга. Использование этих петель в качестве маркеров позволило проследить-направление репликации. В настоящее время этот метод широко используется. [c.274]

На рис. 3.10 приведена электронная микрофотография гибрида ДНК — РНК. Молекула была визуализирована путем обработки препарата белком гена 32 бактериофага Т4. Этот белок имеет больщую константу связывания только с одноцепочечной ДНК, поэтому одноцепочечные участки кажутся утолщенными из-за того, что они покрыты белком. Это позволяет различить одиночные и двойные цепи под микроскопом. После отжига раствора РНК и ДНК под электронным микроскопом выявляются образовавшиеся гетеродуплексы, что позволяет картировать гены, кодирующие эти РНК. Следует отметить, что очень короткие РНК, такие, как тРНК, образуют слишком короткие гетеродуплексы, чтобы их можно было увидеть под электронным микроскопом. В этих случаях для визуализации места связывания с ДНК к молекулам тРНК присоединяют электронномикроскопический маркер (например, электроноплотный белок ферритин или шарик из полистиролового латекса). [c.165]

Положение искомой последовательности в клонированном сегменте можно определить также с помощью электронной микроскопии. Для этого зонд и рекомбинантную ДНК смещивают, денатурируют и отжигают, а затем готовят препарат для микроскопирования. Комплементарные участки зонда и исследуемой молекулы образуют дуплексы, которые на электронных микрофотофафиях выглядят как относительно толстые нити, а некомплементарные участки остаются одноцепочечными и имеют вид более тонких нитей. Гетеродуплею (РНК-ДНК), образующийся между овальбумино-вым рекомбинантом, описанным в разд. 7.2, и овальбуминовой мРНК, показан на рис. 7.3. Такие гетеродуплексы формируются при условиях, благоприятных для гибридизации типа РНК-ДНК, а не ДНК ДНК. В сегменте ДНК размером 2,35 т.п.н.. [c.319]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология