Делеционные мутанты

В случае гена дикого типа левая граница каждого интрона при сплайсинге соединяется только вместе с правой границей этого же интрона. Взаимодействия между левой границей интрона 1 и правой границей интрона 2 не происходит. В случае же делеционного мутанта правая гра- ница интрона 1 не участвует в сплайсинге и левая граница этого интрона присоединяется к правой границе интрона 2. Это означает, что двум таким границам при суще свойство узнавать друг друга при сплайсинге, несмотря на то что обычно при наличии левой границы интрона 2 взаимодействия между ними не происходит. [c.325]

Отбор делеционных мутантов фага % 75 [c.75]

Отбор делеционных мутантов фага X [c.75]

Справедливость этого вывода была подтверждена сначала данными рекомбинационного анализа стабильные мутации (делеции), введенные в скрещивание, сокращали генетические расстояния между фланкирующими мутациями, т. е. расположенными справа и слева от делеций. В дальнейшем выпадение участка ДНК продемонстрировали на гетеродуплексах, полученных путем гибридизации ДНК из фага дикого типа и из делеционного мутанта. При этом в участке, соответствующем делеции rll, образовывалась однонитевая петля за счет лишней ДНК из дикого типа, хорошо различимая в электронный микроскоп. [c.376]

Использование делеций при картировании позволяет заменить количественный учет частоты рекомбинации качественным тестом. При скрещивании точкового и делеционного мутантов рекомбинанты могут появиться, только если делеция не перекрывает участок, в котором локализована точковая мутация. [c.376]

Представление об опасности, связанной с онкогенным потенциалом аденовирусов, предотвратило распространение избирательной кишечной иммунизации, направленной против других серотипов аденовирусов, особенно тех, которые важны в педиатрической практике заболеваний дыхательных путей. Несмотря на то что интенсивные исследования связи аденовирусов с развитием рака у человека дали отрицательный ответ на этот вопрос, беспокойство о возможной онкогенности аденовирусов сохраняется [57]. Не исключено, что в будущем эффективная вакцина для детей будет получена с помощью генной инженерии в комбинации с кишечной вакцинацией. Ответственные за трансформацию клеток гены аденовируса типа 5 расположены в пределах 6 % длины вирусного генома в его левой концевой части на том участке, который кодирует ранние функции аденовируса [56]. Мутанты со спонтанными делециями в этой области можно отобрать путем обработки аденовирусной ДНК рестриктазой, вырезающей с левого конца вирусного генома участок, составляющий 4 %, а затем вирусной ДНК, обработанной ферментом, осуществить трансфекцию клеток, трансформированных аденовирусом [71]. Трансформированные аденовирусом клетки используют с целью обеспечения функций, дефектных у искомого делеционного мутанта. Некоторые делеционные мутанты, полученные таким образом, проявляют еле- [c.175]

Недавно была сконструирована полная клонированная ДНК — копия позитивного РНК-генома вируса полиомиелита путем соединения трех частичных клонов генома этого вируса [152]. Существенно, что данная ДНК инфекционна для культуры обезьяньих и человеческих клеток. Это важное наблюдение позволяет предположить, что клетка распознает соответствующие контрольные сигналы клонированной ДНК вируса полиомиелита и использует эти сигналы для транскрипции полной плюс-цепи РНК, которая инициирует нормальный цикл инфекции. Создание делеционных мутантов вируса полиомиелита и других пикорнавирусов, а также других РНК-содержащих вирусов с позитивным геномом, таких как тогавирусы, должно быть относительно простым, потому что измененная клонированная ДНК может быть непосредственно перенесена в инфекционный вирус путем трансфекции культуры клеток. Таким образом, жизнеспособные делеционные мутанты могут быть идентифицированы и затем оценены в отношении аттенуации и иммуногенности. [c.177]

Делеционные мутанты оказались весьма полезными Бензеру для построения детальной карты области г . При этом отпала необходимость в невероятно трудоемкой работе по скрещиванию каждого мутанта коллекции со всеми остальными мутантами (что составило бы в общей сложности не один миллион скрещиваний). Бензер разделил область гП генома фага Т4 на отдельные сегменты (как показано на фиг. 151), каждый из которых соответствовал участку на карте, затронутому одной определенной делецией. После этого очень легко было определить сегмент, в котором расположена та или иная мутация. Для этого требовалось только установить, с какими делециями данная мутация дает и с какими не дает при скрещивании рекомбинантов дикого типа. При помощи таких делеций с подходящими начальными и конечными точками Бензер приступил к распределению всех гП-мутантов по 47 сегментам области гП (фиг. 152). Для этого неизвестный гП-мутант сначала скрещивали с семью мутантами, несущими семь стандартных делеций, определяющих семь основных сегментов. После того как выяснилось, в каком из этих семи сегментов располагается мутация, мутант скрещивали со вторым набором делеций. Таким путем всего в два этапа удается локализовать любую точковую мутацию в одном из 47 сегментов карты. Необходимо подчеркнуть, что без применения этого весьма эффективного метода, позволяющего очень быстро локализовать на карте любую мутацию, наши сведения о тонкой структуре генома фага оставались бы весьма скудными. Дело в том, что по мере возрастания в арифметической прогрессии числа выявленных мутаций число скрещиваний, необходимых для их локализации, возрастает в геометрической прогрессии. [c.309]

Эксперименты с делеционными мутантами гена тимидин-киназы (ТК) вируса герпеса показали, что область между положениями — 100 и — 60 контролирует частоту инициации. В отсутствие этого участка частота инитшя-ции в обычной стартовой точке Псшает до 2% от первона-чального уровня. Если делетируется блок ТАТА, инициация продолжает происходить, но при этом снижается точность узнавания первоначальной стартовой точки. Аналогично в случае глобиновых генов млекопитающих делеция области размером 20-30 п. н. с центром примерно около положения — 70 вызывает значительное снижение транскрипции. Для некоторых генов дрожжей также показано, что последовательность, расположенная влево от стартовой точки, играет важную роль. В случае гистоновых генов морского ежа рассматриваемая последовательность расположена еще дальше от стартовой точки — между положениями — 139 и —111. Данные последовательности не активны, если область, предшествующая стартовой точке, делетирована, но, как правило, они значительно увеличивают частоту инициации. [c.152]

Для идентификации в 5 -фланкирующей последовательности нуклеотидов, вовлеченных в регуляцию транскрипции гена tk, можно было бы вводить мутации в каждое положение. Такой подход оказался бы чрезвычайно трудоемким. Более эффективный метод, названный лин-керным сканированием, был использован в работе Мак-Найта и его коллег. Этот метод (рис. 16.2) включает создание в клонированном гене tk двух наборов делеций-с левого и с правого конца клонированной последовательности. Протяженность делеции в каждом делеционном варианте фиксировали с помощью определения нуклеотидной последовательности. Были получены 43 различные делеции с 5 -конца и 42-с З -конца, вошедшие в состав мутагенизированных таким образом генов tk (рис. 16.2). С использованием подходящих делеционных мутантов из каждого набора можно было сконструировать гены, содержаище мутации замещения и отличающиеся от нормальной последовательности tk в десяти или менее положениях нуклеотидных пар. Некоторые из этих мутантных последовательностей показаны на рис. 16.3. [c.212]

Изображенная на рис. 16.2 схема проведения мутагенеза in vitro позволяет получать простые делеционные мутанты по контролирующей области гена tk (стадии 1 -3). В чем преимущества метода лин-керного сканирования (стадия 4) по сравнению с простым делеционным мутагенезом in vitro в обнаружении регуляторных последовательностей клонированных генов [c.246]

Как индуцировать мутации в фаге К гидроксиламином in vitro указано в методике 8. Это весьма обычный метод мутаге-низирования как фага, так и выделенной в очищенном виде ДНК. Его преимущество заключается в высокой специфичности (индуцируются транзиции G—>-А) и большой эффективности. При работе с умеренным фагом контролировать эффективность мутагенеза очень просто — достаточно следить за появлением среди выжившего фага мутаций, приводящих к образованию прозрачных бляшек. По этой методике можно выделить амбер-мутантов фага К. С помощью спот-теста на комплементацию (методика 10) их можно охарактеризовать по их комплементации с амбер-мутациями в большинстве известных генов фага Л. Комплементационный анализ позволит определить положение полученных мутаций на карте. Мутации по ТЕМ-р-лактамазе можно использовать для картирования делеционных мутантов в этой модели клонированного фрагмента (эксперимент 6). [c.36]

Выделение делеционных мутантов Хатр [c.38]

Фаг обрабатывают хелатирующим агентом (ЭДТА), вызывающим разрущение таких головок фага X, которые содержат ДНК сверх определенного количества. Разрушающее действие ЭДТА зависит от условий, в частности от температуры. Поэтому можно подобрать такие условия, при которых после обработки ЭДТА выживают практически лишь делеционные мутанты. У большинства Л-векторов основная часть содержащейся у этого фага несущественной ДНК уже делетирована, и поэтому большинство отбираемых из клона делеций будут делециями, затрагивающими клонированную чужеродную ДНК- [c.38]

Проведя гибридизацию рестрикционных фрагментов, полученных прямо из клеток 5. typhimurium дикого типа и различных делеционных мутантов, можно выявить, какие из них гомологичны специфической ДНК-зонду. С помощью такой гибридизации можно определить как приблизительный порядок этих делеций на карте, так и положение их концов. [c.50]

Аналогично регулируется трипт о фановый оперон Е. соН, включающий пять структурных генов (рис. 16.8). При изучении этого оперона был найден еще один способ регуляции — аттенюация (или ослабление). Ч. Яновский, детально исследовавший трипто-фановый оперон Е. соИ, обнаружил мутанты-суперпродуценты ферментов, кодируемых этим опероном. Мутанты несли делеции в самом начале оперона — в так называемом лидерном участке, между оператором и инициирующим кодрном первого гена trpE. При этом терялась последовательность, содержащая сигнал прекращения транскрипции. Синтез иРНК обычно начинается с ли-дерной части, но только около 10% молекул иРНК полностью копируют гг/ -оперон. Преждевременное прекращение транскрипции обеспечивает аттенюатор — тот участок, который был потерян у делеционных мутантов-суперпродуцентов. [c.419]

Доказательство вовлечения специфических вирусных генов или генного продукта(ов) в трансформацию получено с помощью множества методических подходов, включая температурочувствительные (ts) мутанты, экспрессирующие трансформированный фенотип при пермиссивной температуре, но кажущиеся нетрансформированными при непермиссивной температуре делеционные мутанты, утрачивающие определенные участки генома субгеномные фрагменты BHpy iioH ДПК, содержащие известные генные последовательности трансляцию in vitro определенных участков генома микроинъекцию продуктов вирусного гена. [c.182]

При неопровержимости того, что вирусные мутанты — отличные модели, желательно иметь данные об их интенсивно развивающейся истории и о характеристике. Особенно это необходимо для мутантов, выделенных при химическом мутагенезе, в частности для ts-мутантов. С помощью различных проб, взятых из определенного участка генома, может быть обнаружена локализация основного дефекта. В мутированной ДНК могут присутствовать другие дефекты, не определяемые с помощью проб. Такие дополнительные мутанты бывают минорными, или несущественными, однако влияющими на инфекционность и(или) трансформирующую способность вируса. Интересно, что у мутантов, генерированных химическими мутагенами, некоторые участки мутируются легко, в то время как другие — трудно, если когда-либо мутируются вообще. Способ действия мутагенов в общем выяснен, механизм концентрирования мутагенов в определенных участках — нет. Вирус SV40 соответствующий пример того. Хотя делеционные мутанты по t-антигену были изолированы, не были получены ts-мутанты по t-антигену с помощью химических мутагенов. И наоборот, ts-мутанты гена А (область Т-антигена) являются обычными. [c.189]

Тем не менее литература насыщена результатами исследований, авторы которых в затруднении объяснить, почему их результаты несравнимы с другими результатами, даже когда различия условий культивирования очевидны. Пример важности культуральной среды — результаты экспериментов по колониеобразованию трансформированных делеционными мутантами паповавируса клеток в мягком агаре, гд число трансформированных колоний варьировало л зависимости от различных сред (Bendig, Folk 1979), [c.192]

A. Делеционный мутант по гену рецептора ЛПНП. полученный в результате рекомбинации между Alu-последовательностями. З -участок нормального гена с экзонами изображен так же, как на рис. 9.21. Представлены Alu-последовательности в одном интроне и в З -концевом зкзоне (экзон 18). Б. Рестриктная карта этого же участка нормального гена. В. Рестриктная карта кло- [c.206]

Чтобы идентифицировать мишени для SIR-белков, были сконструированы делеционные мутанты по клонированным сегментам HML и дрожжевые клетки, несущие различные SIR-мутации, трансформировали каждым из этих клонов (рис. 10.60). Все делеции, захватывающие сегмент длиной 130 п.н. (Е) слева от HML. приводили к блокированию SIR-репрессии. Сходные результаты были получены и для локуса HMR. Е-сегменты можно рассматривать как сайленсеры (разд. 8.3.д) последние обладают свойствами, характерными для энхансеров транскрипции, но они подавляют транскрипцию, а не стимулируют ее. Если Е-элемент инвертируется или перемещается в другой сайт в пределах 2,5 т.п.н. от генов, определяющих тип спаривания, то SIR-репрессия не снимается. Таким образом, Е-элементы, как и энхансеры транскрипции, функционируют в любой из двух ориентаций и могут находиться на значительном расстоянии от соответствующего гена. С помощью аналогичного делеционного анализа были выявлены и другие сегменты (I)-справа от HMLk HMR, также участвующие в SIR-репрессии. [c.282]

Получены стабильные жизнеспособные делеционные мутанты нескольких ДНК-содержащих вирусов животных, субпопуляции которых проявляют уменьшенную способность к репликации. Они представляют интерес, так как уменьшение способности к репликации — это и есть аттенуация. Жизнеспособные делеции могут быть произведены как в неструктурных, так и в структурных генах. Например, в геноме 5У40 могут подвергнуться делециям без потери жизнеспособности по крайной мере три участка [8, 26, 183]. Один участок, поздний лидер, является неструктурной областью, а два других представляют собой гены для капсидного белка УР2 и раннего белка — малого Т-антигена [8, 183]. Из этих участков без потери жизнеспособности может быть делетирована довольно большая часть генома [44, 81]. В одном случае Кониг и Лай [81] сконструировали мутант 5У40 с двойной делецией, у которого отсутствовало 7,5 % вирусного генома, но жизнеспособность в культуре ткани сохранялась. Был также получен жизнеспособный мутант вируса полиомы с относительно обширной делецией (с сохранением фазы трансляции) в структурном гене для среднего и большого Т-антигенов [60]. Таким образом, как в некодирующих, так и в кодирующих областях паповавирусов существуют участки, которые могут быть делетированы без потери жизнеспособности. Более того, делеция внутри участка любого типа может уменьшить репликативную способность вируса. Некоторые адено- [c.174]

Информация, полученная в исследованиях на животных, указывает на то, что делеции в соответствующих участках генома могут давать жизнеспособные мутанты с ограниченной способностью к репликации in vivo [102]. Некоторые мутанты вируса полиомы с делециями в ранних участках способны заражать мышей-сосунков, но уровень репликации при этом равен 1/10—1/10000 уровня репликации вируса дикого типа. Несмотря на такой уровень рестрикции in vivo, некоторые из этих делеционных мутантов растут в культуре клеток до такого же высокого титра, как и дикий вирус. В отличие от вирусов дикого типа делеционные мутанты не вызывают персистентную инфекцию у мышей-сосунков [102]. Хотя паповавирусы не являются подходящими кандидатами для разработки вакцин, данные, полученные в опытах с мутантами вируса полиомы, свидетельствуют о том, что делеция в соответствующем участке генома ДНК-содержащих вирусов может ограничивать репликацию вируса in vivo, не влияя на его рост в культуре ткани. Более того, делеционные мутанты могут благоприятно изменять патогенез инфекции, превращая персистентную инфекцию в спонтанно затухающую. [c.175]

Смотреть страницы где упоминается термин Делеционные мутанты: [c.239] [c.312] [c.325] [c.451] [c.201] [c.171] [c.181] [c.181] [c.249] [c.86] [c.16] [c.40] [c.40] [c.22] [c.24] [c.327] [c.175] [c.183] [c.171] [c.181] [c.181] [c.249] [c.206] [c.184]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология