Удаление прикрепляющихся клеток

На первом этапе получения первичной культуры происходит стерильное удаление фрагмента ткани животного и его механическая или ферментативная дезагрегация. Ткань может быть просто измельчена до кусочков объемом около 1 мм , которые прикрепляются к поверхности чашки благодаря собственной адгезивности, или наличию насечек на чашке или с помощью сгустка плазмы [1]. В этих случаях будет происходить рост клеток из фрагментов и клетки, мигрирующие из эксплантатов, могут использоваться для пассирования. Фрагменты ткани (эксплантаты) могут переноситься на новые чашки мигрирующие клетки могут удаляться трипсинизацией, а остающийся эксплантат будет образовывать новые выросты. Трипсинизированные клетки пересеваются в новые сосуды и становятся вторичной культурой. По формальным признакам такая культура носит название линии клеток. [c.22]

Для гого чтобы состояние постсинаптической клетки успещно регулировалось сигналами, поступающими от пресипаптической клетки, постсинаптическое возбуждение должно быстро спадать, как только пресинаптическая клетка придет в состояние покоя. В нервно-мыщечном соединении это достигается путем быстрого удаления ацетилхолина из синаптической щели с помощью двух механизмов. Во-первых, ацетилхолин рассеивается в результате диффузии, которая благодаря малым расстояниям происходит очень быстро. Во-вторых, ацетилхолин расщепляется ацетилхолинэстеразой на ацетат и холин. Этот фермент, выделяемый мыщечными клетками, прикрепляется с помощью коллагеноподобного хвоста к базальной мембране, отделяющей нервное окончание от мембраны мыщечной клетки. Одна молекула ацетилхолинэстеразы способна гидролизовать до 10 молекул ацетилхолина за 1 мс, поэтому весь медиатор удаляется из синаптической щели через несколько сотен микросекунд после его высвобождения из нервного окончания. Таким образом, период, когда ацетилхолин может связываться с рецепторами и переводить их в открытую конформацию, изменяя тем самым проводимость постсинаптической мембраны, очень короток (рис. 19-27). Благодаря этому временная картина пресинаптических сигналов четко отображается в картине постсинаптических ответов. [c.315]

Другой способ получения слоя фидерных клеток — это инкубировать монослой клеток с митомицином С (10- М), что приводит к образованию поперечных сшивок в клеточной ДНК (Iyer, Szybalski, 1964). Монослой затем трижды промывают СБСР для удаления митомицина С, после чего его можно использовать либо непосредственно, либо после пересева клеток в культуральные сосуды меньшего размера. Для клонирования используются чашки Петри диаметром 6 см, содержащие 2-105 клеток, убитых либо уоблучением, либо обработкой митомицином С. Эти клетки образуют слой фидерных клеток. Среду в чашках с фидерными клетками заменяют суспензией клеток, предназначенных для клонирования. На такие чашки -МОЖНО высевать 10 клеток, но наилучшие результаты получаются при высеве 1000 клеток. Клонируемые клетки прикрепляются к субстрату в свободных участках между фидерными клетками и начинают размножаться, что приводит к образованию колоний, которые можно выделить с помощью цилиндров для клонирования (разд. 8.1.2). [c.93]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология