Культуральные сосуды

Первичные клеточные культуры. Эти культуры получают непосредственно из ткани животного или человека путем разрушения протеолитическими ферментами (трипсин, коллагеназа, прона-за) межклеточного вещества. Разобщенные (диспергированные) клетки, помещенные в питательную среду, способны прикрепляться к поверхности культурального сосуда и размножаться, образуя так называемый монослой — слой толщиной в одну клетку. [c.259]

Плотность насыщения — максимальное число клеток в культуральном сосуде при специальных условиях выращивания. Плотность насыщения выражается числом клеток на 1 см в монослой-ной культуре или числом клеток на 1 см в суспензионной культуре. [c.497]

Онкогенез, вызываемый у животных ДНК-вирусами. Исследования канцерогенеза у животных нередко проводятся на культурах тканей. Если перенести клетки животных, например из органов кур или хомячков, или фибробласты человека в подходящую питательную среду, то на внутренней стенке культурального сосуда они начнут размножаться. Обычно клетки продолжают расти лишь до тех пор, пока не начнут соприкасаться между собой. Из-за контактного торможения образуется только однослойный клеточный газон. Если же эти нормальные клетки инфицировать опухолеродным вирусом, то контактное торможение снимается, клетки продолжают размножаться и начинают надвигаться друг на друга. Многослойный рост наблюдается только у клеток, претерпевших опухолевую трансформацию. Из клеточной массы легко выделить отдельные клетки и таким путем получить чистые линии (клоны) трансформированных клеток. [c.153]

Прозрачный культуральный сосуд [c.267]

Рис. 1-41. Микрофотография изолированной нервной клетки куриного эмбриона, помещенной в культуральный сосуд с питательным раствором. У клетки появляются длинные выросты, каждый из которых продвигается с помощью структуры, называемой конусом роста. (С любезного

Клетки можно выращивать в культуральном сосуде [20] [c.203]

Двухфазная система в принципе состоит из толстого слоя затвердевшей питательной среды, покрытого тонким слоем питательного бульона (рис. 9.1). Чтобы приготовить такую систему, частично заполняют сосуд горячей средой, содержащей 2—3% агара. После затвердения агарового слоя на него наливают с соблюдением правил асептики небольшое количество питательной среды, засевают ее и инкубируют. Для выращивания аэробов культуральный сосуд помещают на качалку, что обеспечивает хорошее снабжение кислородом и перемешивание среды во время инкубации. Культура развивается в жидкой части среды, но постепенно клетки диффундируют в твердую питательную среду и значительно концентрируются. Таким способом можно получить популяции с плотностью более 10" клеток/мл, причем данный метод пригоден для выращивания бактерий любого типа. [c.364]

Более подробно условия оптимизации аэрирования в лабораторных культуральных сосудах описываются в разд. 10.1.2. Условия обеспечения строгого анаэробиоза для культур в пробирках приведены в разд. 6.6. [c.383]

Изменения морфологии трансформированные клетки имеют более округлую форму, чем контрольные клетки Увеличение плотности клеток (потеря контактного торможения роста) трансформированные клетки часто формируют многослойные структуры, тогда как контрольные клетки растут в виде монослоя Утрата необходимости закрепления на подложке трансформированные клетки могут расти, не прикрепляясь к поверхности культурального сосуда, и часто растут в агаре [c.358]

Допустим ли газовый обмен с атмосферой или культуральные сосуды должны быть закупорены [c.30]

Рис. 3.1, Системы снабжения СО2. Слева — фотография простой установки, в которой газ от воздушного насоса смешивается с СОд до конечной концентрации последнего (5%) для газирования культуральных сосудов или питания установок для культивирования. Справа — установка для отмеривания фиксированных объемов СО2 и подачи их через трехходовой кран (в нижней части

Если предполагается выделение клонов, то культуральные сосуды должны содержать много небольших кусочков (0,05 см ) покровных стекол, обеспечивающих прикрепление и размножение клеток. Используя стерильный пинцет, удалить кусочки стекол с индивидуальными клетками (при микроскопическом контроле) и перенести их в индивидуальные лунки пластинок для культивирования тканей (разд. 3.2.1). [c.90]

Культуральная среда создает прекрасные условия для роста микробных загрязнений, а обычная методика работы с клетками, включающая в себя частые открывания культуральных сосудов, обеспечивает массу возможностей возникновения такого загрязнения. Организм человека обладает многими защитными механизмами против инфекции, а культивируемые клетки защищены только аккуратностью работы исследователя. В кратковременных культурах обычно используются антибиотики, но при длительном культивировании их применение нежелательно. Поэтому при работе с клетками следует принимать строгие меры предосторожности, чтобы избежать загрязнения микроорганизмами, и проводить адекватные тесты для оценки эффективности этих мер предосторожности. [c.109]

Слегка встряхнуть культуральный сосуд (2 цикла в секунду) либо вручную, либо на качалке в водяной бане. [c.148]

Опухолевым клеткам дают прикрепиться к покрытому желатином дну культурального сосуда (разд. 2.3.2), что со- [c.217]

Трипсинизацию повторяют несколько раз. Взвесь клеток центрифугируют при 600 об/мин в течение 5—10 мин, ресуспендиру-ют в питательной среде и окрашивают фуксином, метиленовой синью или другими красителями, а затем определяют их концентрацию в камере Горяева. Клеточную взвесь разводят питательной средой до концентрации (4 — 8) 10 клеток в 1 мл, разливают в культуральные сосуды, плотно закрывают резиновыми пробками и культивируют в термостате при 35 — 37 °С в течение 48 — 96 ч (пробирки кладут под углом 5°), после чего отбирают культуры с хорошо сформировавшимся монослоем. [c.260]

Пассирование клеточных культур. Во флаконы с клетками после отсасывания питательной среды наливают подогретый до 37 °С раствор 0,25%-го трипсина или 0,02%-го версена и помещают их на 3 — 5 мин в термостат. Затем версен или трипсин удаляют, в культуральный сосуд добавляют небольшое количество питательной среды и, интенсивно взбалтывая, добиваются суспензирования клеток в питательной среде. После этого подсчитывают количе- [c.260]

Время бляшкообразования под бентонитовым покрытием для различных вирусов неодинаково. Результаты образования бляшек для энтеровирусов, например, учитывают через 36 — 48 ч. Культуральные сосуды переворачивают монослоем вверх, смывая средой дегенерировавшие клетки. Бляшки, образуемые различными типами энтеровирусов, отличаются по величине, интенсивности развития и характеру краев. Поскольку одна вирусная инфекционная частица (вирион) образует одну бляшку, метод бляшкообразования позволяет точно определить количество инфекцио чных единиц в материале, а также измерить нейтрализующую активность вирусных антител. [c.268]

Кроме дифференциации клеток важной особенностью их является склонность к аггломерации (от лат agglomeratus — скопление) Это может происходить в различных условиях и с клетками различного уровня организации — прокариотами и эукариотами Те из них, которые имеют клеточную стенку, чаще аггломерируют за счет химических компонентов, локализованных в ней Причем процесс "скучивания" является физико-химическим (адсорбция, ионное и ковалентное взаимодействия), зависящим не только от особенностей клеток, но и от компонентов среды, используемой для их культивирования Поэтому аггломерация может быть следствием 1 адгезии (от лат айЬаезю — склеивание, слипание) клеток друг к другу или к поверхности культурального сосуда за счет веществ — адгезинов, расположенных на их поверхности, и других причин, 2 агглютинации по схеме "антиген-антитело", когда в качестве антигена оказываются культивируемые клетки, а в качестве антитела — гомологичные или гетерологичные агглютинирующие иммунные сыворотки, 3 слияния клеток с образованием гибридов [c.149]

Рис 114 Раковые клет ки человека (HeLa) в пластиковом культуральном сосуде (увеличение х40) [c.343]

Плотность популяции — число клеток на единицу поверхности или объема среды. Общее число удвоений популяции (уровень удвоения популяции) клеточной линии или штамма за один пассаж in vitro определяют со времени посева в расчете на одно удвоение Nd = In (N/No X 3.33), где N — число клеток в культуральном сосуде на конечный период роста. No — число клеток, засеянных в культуральный сосуд, Nd — число популяционных удвоений. Лучше всего использовать число прикрепившихся клеток. [c.497]

Даже крайне чувствительные к кислороду бактерии можно пересевать на воздухе, если путем непрерывной продувки азота через культуральные сосуды исключить возможность соприкосновения питательной среды с воздухом (техника Хангейта). Можно также использовать пере-вивочн1>1е бйКсы, наполненные азотом, аргоном или водородом без примеси Oj. В качестве цветного индикатора анаэробных условий в среду добавляют краситель резазурин (в присутствии О2 он синий, в анаэробных условиях бесцветен) или ставят в анаэробные инкубационные склянки сосудик с щелочным раствором глюкозы и метиленового синего (в анаэробных условиях он бесцветен). [c.184]

Для этих целей в качестве культуральных сосудов авторами были использованы 9-литровые бутыли из стекла пирекс . Батареи этих бутылей размещались по обеим сторонам от трехрядной установки люминесцентных ламп. Барбатация культур осуществлялась пропусканием сжатого воздуха через стеклянные фильтры, опущенные в сосуды, со скоростью 2 л/мин. [c.153]

Респирометр Сапромат имеет шесть культуральных сосудов (ферментеров). Электролизеры имеют платиново-медные электроды, электролитом является раствор сернокислой меди. При каждом включении электролизера вьщеляется 1 мг Ог- Иловая смесь в ферментерах перемешивается магнитными мешалками. Удаление СО2 и других продуктов метаболизма пассивное — с помощью поглотителей, размещенных в ферментерах. Недостатки респирометра — незначительная окислительная мощность, несовершенство удаления продуктов метаболизма, интенсивное отложение меди на катоде электролизера и др. [c.254]

Рис широко использовался Рорером [1674—1676] и Гогом [831]. Рис тщательно промывали и кипятили в течение 10—15 минут. Затем отвар полностью сливали, а еще теплый рис помещали в культуральные сосуды и стерилизовали 1 час при 100° в течение 3—4 последовательных дней. В прежних опытах сваренный рис не автоклавировали, и загрязнение было весьма вероятным. Паскале [1542] использовал рис с добавкой пептона [c.446]

Г. Фарш из телятины [818, 1337]. Свежую телятину, свободную от жира, трижды пропускают через мясорубку, взвешивают, смешивают с двойным количеством дистиллированной воды и выдерживают в холодильнике в течение 18—48 часов. Затем настой сливают на чистую фланель и отжимают возможно суше вручную или под прессом. К фаршу прибавляют антисептик, массу тщательно перемешивают и помещают в культуральные сосуды. После этого культуры готовы для заселения нематодами. Выход с культур из телятины, приготовленных Мак-Коем и Гиртом, колебался от 9 до 12 тыс. нематод на 1 см поверхности культуры (вышеописанные картофельные культуры давали около 2000 нематод на 1 см ). Средний выход с лотка (см. В ) был около 20 млн. личинок второго возраста. Заметного уменьшения плодовитости при повторном пересеве не отмечено, по крайней мере в течение 10—12 пассажей. Однако целесообразно заменять более старые культуры нематодами, выведенными на агаре, так как это поддерживает более высокий средний выход и более равномерное развитие крупных культур. [c.457]

Субкультивированне — перенос трансплантов (инокулюма) в другой культуральный сосуд на свежую питательную среду. [c.467]

Впоследствии другие исследователи обнаружили, что трансформация непатогенных штаммов пневмококка в патогенные может осуществляться и в лабораторной культуре клеток. Изредка возникающие трансформированные клетки легко отделить от нетрансформированных, поскольку они не агглютинируются сывороткой, содержащей антитела против клеток типа IIR. Агглютинировавшие клетки IIR осаждаются хлопьями на дно культурального сосуда, тогда как трансформированные клетки не слипаются, а свободно размножаются, образуя мутную суспензию клеток IIIS (рис. 4.4). Развитие такого метода выделения трансформированных клеток in vitro ( в пробирке ) дало важное преимущество, поскольку позволило исследовать природу трансформирующего фактора убитых нагреванием клеток IIIS непосредственно, не вводя их мышам и не дожидаясь гибели последних. [c.94]

При массовом культивировании анаэробов придерживаются следующих основных правил. Культуральные сосуды заполняют почти доверху, чтобы уменьшить влияние находящейся сверху газовой фазы. Вносят как можно больше инокулята на дно сосуда с восстановленной средой, стараясь держать пипетку вертикально. Воздух в сосуде заменяют очищенным от кислорода азотом или аргоном с 5—107о СОг. Сначала среду инкубируют без перемешивания, но после того как начинается активный рост, ее перемешивают либо с помощью магнитной мешалки, либо пропусканием азота или другого природного газа через трубку, опущенную на дно сосуда. Используют гидрозатвор, который затрудняет выход газов в [c.386]

Препараты клеток костного мозга получают из материала пункции грудины или подвздошной кости. Клетки культивируют только 2 ч с колцемидом. Процедура приготовления препаратов несколько отличается от процедуры, описанной выше. Культуру фибробластов получ р/ из материала биопсии кожи. Ее измельчают и выращивают в культуральной среде таким образом, чтобы кусочки были прикреплены к поверхности культурального сосуда. Через 10 дней клетки начинают расти по этой поверхности, через 21 день готовят суспензию и делают препараты. [c.43]

Рассмотрим, например, фибробласт, ползущий по поверхности культурального сосуда (рис. 10-86). На его переднем крае непрерывно образуются ламеллоподии и микрошипы некоторые из них прикрепляются к субстрату, а другие перемещаются назад по верхней стороне клетки, перенося в том же направлении различные частицы, прилипшие к клеточной поверхности. В то же время задние участки клетки остаются прикрепленными к субстрату и по [c.133]

Газовый обмен возможен это имеет место при использовании чашек Петри, пластинок для культур клеток и некоторых типов сосудов для суспензионных культур. Когда используемая среда, забуферивается бикарбонатом (30 мМ), необходимо, чтобы эти культуры находились в смеси 5% СОг с воздухом. Это обеспечивает поддержание правильного pH, который легко контролируется по цвету присутствующего в среде фенолового красного. Среда должна быть томатного цвета, что соответствует pH 7,2, но не желтого или красного и ни в коем случае не пурпурного. При забуферивании среды до pH 7,2 с помощью буфера Нерез (20 мМ разд. 7.2.1) отпадает необходимость в контроле рСОг окружающей атмосферы. В некоторых случаях, особенно при клонировании клеток, буфер Нерез (20—25 мМ) используется в комбинации с бикарбонатом (8 мМ), и в этих случаях культуральные сосуды должны содержаться в атмосфере с [c.30]

В недавно опубликованной работе (Ham, M Keehan, 1978) приведены результаты попыток выращивания диплоидных клеток в бессывороточной среде. В этих исследованиях подчеркивается важность точного поддержания концентрации питательных веществ и природы поверхности культурального сосуда для обеспечения клонального роста клеток. Авторам удалось снизить концентрации диализованной сыворотки в культуре до 500 мкг белка на 1 мл среды. [c.84]

Добавить по 0,3 мл полной среды в каждую лунку и продолжать инкубацию до тех пор, пока клон не покроет поверхность лунки. Клонированные клетки после этого можно снять трипсинизацией (разд. 5.2) и перенести в подходящие культуральные сосуды. [c.90]

Другой способ получения слоя фидерных клеток — это инкубировать монослой клеток с митомицином С (10- М), что приводит к образованию поперечных сшивок в клеточной ДНК (Iyer, Szybalski, 1964). Монослой затем трижды промывают СБСР для удаления митомицина С, после чего его можно использовать либо непосредственно, либо после пересева клеток в культуральные сосуды меньшего размера. Для клонирования используются чашки Петри диаметром 6 см, содержащие 2-105 клеток, убитых либо уоблучением, либо обработкой митомицином С. Эти клетки образуют слой фидерных клеток. Среду в чашках с фидерными клетками заменяют суспензией клеток, предназначенных для клонирования. На такие чашки -МОЖНО высевать 10 клеток, но наилучшие результаты получаются при высеве 1000 клеток. Клонируемые клетки прикрепляются к субстрату в свободных участках между фидерными клетками и начинают размножаться, что приводит к образованию колоний, которые можно выделить с помощью цилиндров для клонирования (разд. 8.1.2). [c.93]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология