Присутствие мочевины и неионных детергентов

Присутствие мочевины и неионных детергентов [c.60]

Мембранные белки можно исследовать методом ИЭФ в присутствии мочевины [380, 863] или неионных детергентов. Хуанг и др. [588] солюбилизировали мембранные белки эмуль-фагеном (алкоксиэтиленоксиэтанол) и провели ИЭФ в 5%-ном полиакриламидном геле, содержавшем 0,25% детергента и 2% амфолинов (pH 3,5—10). Майнер и Хестон [875] для анализа нерастворимых белков мозга использовали 7 /о-ный полиакриламидный гель, содержавший 30% мочевины, 0,25% тритона Х-100 и 2,5% амфолинов (pH 3—10). [c.317]

Иногда улучшения растворимости белка вблизи изоэлектри-ческой точки можно добиться увеличением концентрации самих амфолитов до 3—4%. Наконец, в распоряжении экспериментатора всегда остается возможность испробовать испытанный способ увеличения растворимости белков путем введения в жидкую среду солюбилизирующих добавок. Разумеется, они должны иметь неионный характер или быть заведомо нейтральными цвиттерионами. В качестве таких добавок можно использовать мочевину или неионные детергенты, например Тритон Х-100, NP-40 и Brij-35, а в качестве нейтрального цвиттериона можно взять глицин. О солюбилизирующих добавках было достаточно подробно сказано в гл. 2. Здесь только отметим, что в присутствии сахарозы при 4° мочевина может частично кристаллизоваться из раствора. Это обстоятельство надо иметь в виду при выборе концентрации мочевины (не более 6 М) и температуры охлаждающей воды. [c.72]

При хроматографии и электрофорезе белков использование органических растворителей исключается из-за их денатурирую щего действия, в результате которого белки переходят в нерастворимое сйстояние. Подобное действие могут оказывать и некоторые органические соединения. Поэтому при разделении белков необходим тщательный выбор селективных водных буферных систем. Однако необходимость солюбилизации белков, в особенности тех из них, которые ассоциированы с биологическими мембранами, привела к введению детергентов — как ионных, так и неионных, а также таких реагентов, как мочевина и гидрохлорид гуанидина, которые разрывают водородные связи и препятствуют гидрофобным взаимодействиям. Даже будучи денатурированными, многие белки остаются растворимыми в присутствии этих соединений, особенно после расщепления ди-сульфидных связей дитиотретиолом или меркаптоэтанолом. [c.105]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология