Градиент пористости ПААГ

ГРАДИЕНТ ПОРИСТОСТИ ПААГ [c.73]

В конце предыдущего раздела было рассмотрено несколько примеров использования градиентов пористости ПААГ. Теперь рассмотрим возможности этого метода подробнее. [c.73]

По существу, картина разделения белковых зон при электрофорезе в градиенте пористости ПААГ зависит только от соотношения размеров белков в препарате и характера градиента пористости. Выбор буфера и электрического рея има электрофореза играет второстепенную роль. Поэтому, в частности, можно [c.74]

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГРАДИЕНТОВ ПОРИСТОСТИ ПААГ [c.142]

Широкого применения в последние годы электрофорез нуклеиновых кислот в градиенте пористости ПААГ не нашел, хотя в более ранних работах были получены многообещающие результаты. [c.142]

Техника приготовлений гелей с изменяющимися вдоль направления миграции белков размерами пор, или, как их называют, градиентов пористости ПААГ , бьша подробно описана в главе 2. Постепенное уменьшение среднего размера пор вдоль градиента достигается путем увеличения концентрации акриламида. Электрофорез в градиенте пористости ПААГ имеет целый ряд существенных преимуществ. [c.74]

Рис. 16. Электрофорез нативного белка в градиенте пористости ПААГ. 1-анализируемый белок, 2- маркеры

Несложная модификация устройства фирмы Desaga позволяет наносить на пластинки линейно изменяющуюся в одном направлении по своим пропорциям смесь двух сорбентов или импрегнировать сорбент линейно возрастающей концентрацией какой-либо добавки ( Gradient TLG-spreader ). ТСХ нескольких идентичных препаратов в направлении, перпендикулярном к градиенту, позволяет выбрать оптимальную пропорцию смеси, а хроматография вдоль градиента открывает возможность разделения компонентов, сильно различающихся по своей подвижности (подобно тому как это происходит при электрофорезе в градиенте пористости ПААГ). Эти возможности, насколько нам известно, еще не использовались для фракционирования компонентов белков и НК, однако целесообразно иметь их в виду. [c.467]

При электрофорезе в градиенте пористости ПААГ отпадает необходимость в первоначальном сужении полос. Можно вести электрофорез в простой непрерывной системе и не очень заботиться об объеме исходного препарата. Сделанное замечание находится в противоречии с цитированными выше недавними работами, где градиентный гель использовали в сочетании ео ступенчатым электрофорезом по Лэммли. Возможно, что при таком сочетании хорошее разделение зон достигается быстрее, но не исключено, что в некоторых конкретных случаях оно обусловлено определенным консерватизмом и перестраховкой . [c.74]

Особенно совершенной оказалась двумерная система фракционирования белков и пептидов, предложенная О Фаррелом [O Farrel, 1975]. В этой системе во втором направлении также использована методика Лэммли в сочетании с градиентом пористости ПААГ. Подробный разбор системы О Фаррела и ее модификаций здесь провести нельзя, поскольку в первом направлении в ней используется не электрофорез, а электрофокусирование. [c.73]

Градиентами пористости ПААГ можно, как мы видели, пользоваться и для разделения комплексов белок—ДДС-Na. Ламбен обнаружил, что для белков, обработанных ДДС-Na, линейный градиент концентрации ПААГ в интервале 3—30%> позволяет проводить электрофорез до полной обстановки белков с молекулярными массами от 13 до 950 тыс. дальтон. При этом справедливо следующее линейное соотношение IgM =yi Ig Т+В, гдеМ— молекулярная масса белка, а Т—концентрация ПААГ в месте расположения белковой полосы. Для линейного градиента эта концентрация легко вычисляется по расстоянию полосы от начала пластины. А и В—коэффициенты, указывающие на линейный характер зависимости. Определять их нет нужды, если имеется возможность воспользоваться, как обьино, набором маркерных белков. Обработку исходного препарата можно проводить в тех же условиях, что для обьиного электрофореза в ПААГ с ДДС-Na [Lambin, 1978]. [c.75]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология