Градиент концентрации ПААГ

Рис. 6. Система для образования линейного градиента концентраций ПААГ в трубках

Значения молекулярных весов разных форм НАД-киназы, определенные методом гель фильтрации, совпадают с величинами, определенными методом электрофореза в градиенте концентрации ПААГ, за исключением низкомолекулярной формы НАД-ки- 230, назы с молекулярным весом 45000, которую при гель-фильтрации обнаружить не удавалось. [c.139]

Однако при анализе сошедшей с колонки фракции НАД-киназы, имеющей молекулярный вес 90000, методом электрофореза в градиенте концентрации ПААГ было показано наличие в ней, помимо белка с исходным молекулярным весом 90000, еще двух с молекулярными весами 45000 и 180000. Эти данные указывают на возможность перехода одних молекулярных форм в другие. [c.139]

В 1975 г. О Фаррелл опубликовал сенсационные результаты двумерного фракционирования радиоактивно меченных суммарных белков Е. oli. В первом направлении он использовал ИЭФ, а во втором — ступенчатый электрофорез в присутствии ДДС-Na с использованием градиента концентрации ПААГ. По окончании фракционирования на пластине методом авторадиографии было выявлено около 1100 пятен различных белков (рис. 14). Метод О Фаррелла получил очень широкое распространение. Разумеется, за 5 лет он претерпел ряд дальнейших модификаций, которые будут рассмотрены ниже, но сначала отметим характерные особенности оригинального метода, избегая деталей, подробно описанных автором в его первой работе [O Farrell, 1975]. [c.45]

Такую же последовательность разделений использовали для двумерного фракционирования сложной смеси белков фибро-бластов почки хомячка [Тизгупзк е а1., 1979]. Белкн экстрагировали в присутствии 2% ДДС-Ма н фракционировали в первом направлении на пластине толщиной 1,5 мм классическим методом Лэммли с использованием градиента концентрации ПААГ (7—13%). Исходный материал для ИЭФ на втором этапе разделения на этот раз поставляла полоска геля, вырезанная продольно вдоль ПОЛЯ, т. е. один из треков пластины первого направления. Фокусирование, как и в предыдущем случае, проводили в приборе Мультнфор на горизонтальной пластине 4,5%-ного ПААГ в присутствии 8,5 М мочевины и 2,5% МР-40, но в более узком диапазоне pH (5—7). По-вндимому, для более быстрого фракционирования кислых белков авторы накладывали полоску геля первого направления на пластину со стороны катода. Кроме того, равномерность перехода белков из полоски в пластину могла пострадать от того, что концентрация ПААГ менялась от 7 до 13% вдоль полоски. Из-за этих двух обстоя- [c.59]

Рис. 8. Сосуд для формирования градиента концентрации ПААГ в пластинах (фирмы РЬагтас1а>)

Другой очень эффективный способ сужения полос — использование градиента пористого геля. В этом случае при миграции вдоль геля першний край каждой полосы все время оказывается в области ч ь более концентрированного геля, чем задний. Молекулы- белка, расположенные ближе к переднему краю полосы, тормозятся трением о гель сильнее, чем идущие сзади, что и приводит к непрерывному сужению полос в ходе их продвижения по гелю. Силу этого эффекта убедительно продемонстрировали специалисты фирмы РЬагтас1а на выпускаемых этой фирмой стандартных пластинах с градиентом концентрации ПААГ (4—30%). Начав электрофоретическое фракционирова- ние белков сыворотки, они затем прерывали его и оставляли пластину на 60 ч при комнатной температуре. За это время диф фузий полностью размывала сформировавшиеся было белковые полосы. Однако через 6 ч после возобновления электрофореза удавалось получить четкую картину полос, содержащую все обычно наблюдаемые компоненты сыворотки (рис. 16). [c.45]

Недавно Ламбен и Файн [Lambin, Fine, 1979] предложили способ определения молекулярной массы нативных белков (без ДДС-Na) по кинетике их миграции в линейном градиенте концентрации ПААГ (3— 20%). Оказалось, что для любого белка характер его непрерывно замедляющегося движения в таком [c.75]

Рие. 26. Разделение гистонов сочетанием хроматографии на оксиапатите (направление I) и электрофореза в градиенте концентрации ПААГ (направление II) в присутствии ДДС-Na [Bloom, Anderson, 1979] [c.81]

Молекулы белка, расположенные ближе к переднему краю полосы, тормозятся трением о гель сильнее, чем идущие сзади, что и приводит к непрерывному сужению полос в ходе их продвижения по гелю. Силу этого эффекта убедительно продемонстрировали специалисты фирмы РЬагтас1а на выпускаемых этой фирмой стандартных пластинах с градиентом концентрации ПААГ (4— 30 %). Начав электрофоретическое фракционирование белков сыворотки, они затем прерывали его и оставляли пластину на 60 ч при комнатной температуре. За это время диффузия полностью размывала сформировавшиеся было белковые полосы. Однако через 6 ч после возобновления электрофореза удавалось получить четкую картину полос, содержащую все обычно наблюдаемые компоненты сыворотки (рис. 16). [c.45]

Градиентами пористости ПААГ можно, как мы видели, пользоваться и для разделения комплексов белок—ДДС-Na. Ламбен обнаружил, что для белков, обработанных ДДС-Na, линейный градиент концентрации ПААГ в интервале 3—30%> позволяет проводить электрофорез до полной обстановки белков с молекулярными массами от 13 до 950 тыс. дальтон. При этом справедливо следующее линейное соотношение IgM =yi Ig Т+В, гдеМ— молекулярная масса белка, а Т—концентрация ПААГ в месте расположения белковой полосы. Для линейного градиента эта концентрация легко вычисляется по расстоянию полосы от начала пластины. А и В—коэффициенты, указывающие на линейный характер зависимости. Определять их нет нужды, если имеется возможность воспользоваться, как обьино, набором маркерных белков. Обработку исходного препарата можно проводить в тех же условиях, что для обьиного электрофореза в ПААГ с ДДС-Na [Lambin, 1978]. [c.75]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология