Ретровирусные молекулярные векторы

Ретровирусные молекулярные векторы можно использовать для решения широкого круга задач. Прежде всего, это векторы, обеспечивающие высокоэффективную трансдукцию чужеродных генов в различные типы культивируемых клеток животных и их экспрессию. Получаемые линии клеток, как правило, стабильно сохраняют в составе своего генома гибридную ДНК дефектного ретровируса как дополнительный генетический элемент. [c.408]

Как отмечается в разд. 9.6.3, в ряде случаев желательно иметь воз.можность быстро выделить провирусные последовательности из клеток млекопитающих путем молекулярного клонирования,— например, чтобы проанализировать структуру трансдуцированных последовательностей, если ретровирусный вектор использовался для удаления интронов из геномной ДНК-вставки [19]. Для решения этой задачи могут оказаться весьма полезными челночные векторные системы, облегчающие перенос рекомбинантов между животными и бактериальными клет ками. Такие векторы содержат эукариотическую область нача- [c.284]

Принимая во внимание непредсказуемое поведение некоторых новых ретровирусных конструкций (разд. 9.7), как правило, имеет смысл проверять структуру и экспрессию рекомбинантных ретровирусов с помощью анализа их ДНК и РНК, а также путем прямой детекции экспрессируемых белковых продуктов (если, конечно, это возможно). Для векторов, не экспрессирующих примечательный фенотип, такого рода молекулярный анализ особенно важен. [c.299]

Рис. 14.47. Схема функционирования самоинактивирующегося ретровирусного молекулярного вектора на основе провирусной ДНК вируса лейкемии мышей Молони

Ретровирусы обладают рядом уникальных свойств, что обусловило активное использование их в последние годы в качестве молекулярных векторов. Относительно небольшой геном ретровирусов позволяет довольно просто с ним манипулировать и вводить в его состав чужеродные гены. При этом нет жестких ограничений на размер генома, упаковываемого в вирион, и поэтому удается встраивать экзогенные фрагменты ДНК длиной до 10 тпн. Ретровирусная инфекция обычно приводит к стабильной интеграции единственной копии вирусного генома в ДНК клетки-хозяина. Данные вирусы можно легко нарастить в кулыуре клеток до высокого титра. Ретровирусы способны инфицировать как эмбрионы, так и кроветворные клетки, причем эффективность инфицирования очень велика и достигает в эксперименте практически 100 %. Ретровирусы содержат мощные усилители транскрипции, которые обеспечивают высокий 5фОвень экспрессии клонированных генов в клетках различных типов. [c.400]

Для решения целого ряда задач желательно иметь способ, позволяющий легко выделять рекомбинантный провирус из инфицированных клеток путем молекулярного клонирования. В частности, это относится к использованию ретровирусных векторов для удаления интронов, так как клонирование провируса дает возможность после инфекциононго цикла получать кДНК-копии интересующего нас гена. Кроме всего прочего клонирование провируса наилучшим образом позволяет исследовать и подтвердить генетическую структуру любой ретровирусной конструкции после того, как она претерпела цикл вирусной репликации. Клонирование провирусов включает обычные генноинженерные манипуляции, в том числе создание геномной библиотеки и ее скрининг гибридизационными методами. Однако заметим, что это непростая задача ввиду того, что обычно лишь одна копия искомого провируса присутствует в клеточном геноме. [c.300]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология