Создание геномной библиотеки

Создание геномной библиотеки [c.62]

Векторы на основе бактериофага Л С помощью плазмидных векторов можно клонировать фрагменты ДНК длиной до 10 т. п. н. Однако при создании геномных библиотек час- [c.71]

Космиды имеют большое преимущество по сравнению с плазмидами в них можно встраивать более протяженные фрагменты ДНК, а это означает, что для создания геномной библиотеки нужно меньшее число клонов и потребуется меньше времени на их скрининг. [c.76]

Очень эффективным могло бы оказаться создание геномной библиотеки третьего типа, имеющей в своем составе клоны, соединяющие редко встречающиеся сайты рестрикции с прилегающими случайными последовательностями ДНК генома. Имея такую библиотеку, мы могли бы начинать движение по хромосоме с любой стартовой точки, а при встрече с редким сайтом рестрикции пускать в ход специфическую геномную библиотеку. К сожалению, пока эта задача не решена и подходы к ее решению здесь обсуждаться не будут. [c.99]

Ниже приводится методика создания геномной библиотеки. [c.108]

Проблемы создания геномной библиотеки [c.269]

Получение из клонированного фрагмента дрожжевой ДНК С Л/11-сегмента. Сконструированный плазмидный вектор, содержащий дрожжевой ген Г/ Р1 и, 4/ 5-по-следовательность, использовали для создания геномной библиотеки. После трансфекции дрожжевых клеток /7 еМ4 и Up были отобраны колонии, растущие на среде без метионина и триптофана. Клетки из одной такой колонии содержали плазмиду с геном МЕЛ 4 [c.210]

Создание геномной библиотеки. Высокомолекулярную геномную ДНК фрагментируют путем частичного гидролиза рестриктирующей эндонуклеазой или с помощью [c.305]

Для решения целого ряда задач желательно иметь способ, позволяющий легко выделять рекомбинантный провирус из инфицированных клеток путем молекулярного клонирования. В частности, это относится к использованию ретровирусных векторов для удаления интронов, так как клонирование провируса дает возможность после инфекциононго цикла получать кДНК-копии интересующего нас гена. Кроме всего прочего клонирование провируса наилучшим образом позволяет исследовать и подтвердить генетическую структуру любой ретровирусной конструкции после того, как она претерпела цикл вирусной репликации. Клонирование провирусов включает обычные генноинженерные манипуляции, в том числе создание геномной библиотеки и ее скрининг гибридизационными методами. Однако заметим, что это непростая задача ввиду того, что обычно лишь одна копия искомого провируса присутствует в клеточном геноме. [c.300]

Проведите пробную реакцию упаковки с 0,25 мкг лигирован-ного материала. Из-за больших количеств вектора, который надо лигировать для последующего создания геномной библиотеки (см. табл. 1), использовать коммерческие экстракты для упаковки нецелесообразно. Мы работаем со стандартным двухкомпонентным экстрактом [22]. Чтобы обеспечить эффективность упаковки, достаточную для создания полной геномной библиотеки прыжков по хромосоме , нужно иметь экстракты, осуществляющие контрольную упаковку ДНК фага дикого типа с эффективностью 3—4Х10 б. о. е./мкг ДНК. [c.109]

В случае же использования вирР-г на с дополнительными вставками редко встречающихся сайтов рестрикции (см. рис. 6) разделение половинок фрагмента, составляющего прыжок, упрощается, и зонды можно получать непосредственно из ми нилизата фаговой ДНК. После того как установлено что фрагмент- пры-жок представлен в геноме единичной копией, надо провести его гибридизацию с блотом геномной ДНК из гибридных соматических клеток, чтобы убедиться, что прыжок осуществлен в пределах нужной хромосомы. Это очень важный момент, так как при создании геномной библиотеки всегда существует опасность нециклического лигирования. [c.113]

Клонирование больших (50 100 т п.н. и более) фрагментов ДНК - важ 1ая проблема, поскольку при этом во-первых, существенно облегчается создание геномных библиотек (см. гл. 9), а. во-вторых, удается провести функциональный анализ полных больших генов или их комплексов. Действительно, многие гены эукариот состоят из нескольких сотен т .н. а своеобразным рекордсменом является ген дистрофина, чья транскрибируемая область превышает [c.222]

Векторы, основанные на использовании ДНК фага X или его os-сайта, имеют емкость до 22 (фаговые векторы и фазмиды) и даже 45 т.п.н. (космиды). Они практичны в работе, и поэтому их используют для создания геномных библиотек (см. гл. 9). Клонирование и анализ небольших фрагментов ДНК в них менее эффективны. [c.238]

Рис. 9.1. Схема создания геномной библиотеки с помощью вектора AEMBL3.

Справочник химика 21

Химия и химическая технология