Карбоксипептидаза предварительная обработка

Сиаловые кислоты, входящие в состав гликонротеинов, защищают их от действия протеолитических ферментов, поэтому необходимо предварительно отщепить их нейраминидазой. После удаления сиаловых кислот гликопротеины частично расщепляются протеолитическими ферментами (папаин, проназа) на гликопептиды, доступные для дальнейшего исследования. Гликопептиды затем обрабатывают ферментами, отщепляющими аминокислоты (например, карбоксипептидазой после защиты конечной аминогруппы), и превращают в олигосахариды, содержащие только одну аминокислоту. Углеводные компоненты гликапро-теинов, имеющих щелочелабильную связь углевод—аминокислота, отщепляют щелочной обработкой или ферментами, разрушающими связи такого типа. Полученные таким образом гетеросахариды или гетеросахариды с одной аминокислотой очищают от примесей пептидов и аминокислот переосаждением из водноорганических смесей (вода-спирт, вода—ацетон), экстракцией фенолом, хроматографией, электрофорезом или гель-фильтрацией. [c.76]

В ЭТОМ фрагменте углеводная цепь присоединена к остатку аспарагиновой кислоты. Связь Туг — Asp, входящая в состав недеградированного белка, количественно расщепляется проназой-Р. Однако смесь гликопептидов, образующаяся при расщеплении белка папаином [19J, содержит связь Туг — Asp, устойчивую к действию проназы-Р [12]. Выделение гликопептидов из яичного альбумина иллюстрирует упомянутые трудности. Обработка белка проназой-Р или последовательно пепсином и трипсином вместе с химо-трипсином дает продукты, которые еще содержат различные, но относительно большие количества лейцина и меньшие количества серина и треонина. Эти аминокислоты можно удалить действием карбоксипептидазы, однако только после предварительного замещения свободной аминогруппы карбобензоксирадикалом [12, 20]. Аналогичные проблемы возникают при получении гликопептидов из других белков и, по-видимому, могут быть решены аналогичным путем. [c.241]

Отщепление с помощью карбоксипептидазы С. Доступны коммерческие препараты карбоксипептидазы С из листьев апельсинового дерева [89] и карбоксипептидазы Y из дрожжей [34]. Фермент из первого источника может содержать переменные количества трипсина, химотропсиноподобной активности, аминопептидазы, которые инактивируются предварительным инкубированием с 0,001 М ДИФФ при pH 5,3—8,0. Такая же обработка частично ингибирует карбоксипептидазу С из цитрусовых и полностью —< карбоксипептидазу У из дрожжей. [c.511]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология