РНК фага

Ph , 165. Нуклеотидная последовательность концевых участков (4-) н (—) цепей РНК фага [c.319]

КОЙ. Полная первичная структура РНК фага MS2 была определена [c.21]

Рис. 10. Схема вероятной вторичной структуры (двуспиральной шпильки) участка РНК фага MS2, содержащего инициаторный кодон AUG цистрона белка оболочки фага (по J. А. Steitz, Nature, 1969, v. 224, p. 957 -964)

Регуляция трансляции РНК фага MS2 [c.234]

Рис. 199. Участок вторичной структуры РНК фага М52.

Оригинальный прием был применен для анализа 5 -концевой последовательности РНК фага Эта РНК может быть полу- [c.81]

Вирусные РНК-геномы удобно разделить на три группы. Во-первых, это однонитевые геномы положительной полярности, т. е. с нуклеотидной последовательностью, соответствующей таковой у мРНК (РНК фага QJ,, вирусов табачной мозаики, полиомиелита и др.). Во-вторых, это однонитевые ( )РИК-геномы-, здесь нуклеотидные последовательности генома и мРНК взаимно комплементарны (например, у вирусов гриппа, бешенства, везикулярного стоматита и др.). Третью группу составляют двухнитевые геномы (реови-русы, вирусы цитоплазматического полиэдроза насекомых и др.). Способы репликации/транскрипции геномов этих трех групп вирусов существенно различны. [c.317]

Репликаза фага Qp — высокоспецифичный фермент из природных РНК он использует в качестве матрицы только собственный геном, т. е. РНК фага Qp и некоторые родственные молекулы. Однако прн наличии затравки фермент может копировать любую РНК таким образом, специфичность проявляется на стадии инициации. Любопытно, что избирательность фермента по отношению к. матрице в значительной степени определяется входящи.ми в его состав клеточными белками белок S1 и хозяйский фактор требуются при использовании в качестве матрицы (—)нити РНК фага Qp, но эти белки ненужны, когда в рати матрицы выступает, например, (—)нить этой РНК. [c.319]

Поскольку З -концевым нуклеозидом (—)нити РНК фага является аденозин, можно было бы ожидать, что первым (т. е. 5 -концевым нуклеотидом в (— нпти будет UTP. На самом деле (—)н11ть начинается с GTP, который комплементарен предпослед-не.му остатку в ( )РНК фага Qp (рис. 165). Точно такая же картина Наблюдается и при синтезе (—)нити. Соответственно З -концевые аденознновые остатки как (-г)нити, так и (—)нити появляются в [c.319]

Следует отметить, что хроматография в системе ХОФ-5 является мягким способом фракционирования и очистки, по крайней мере в случае РНК. Известно, например, что нативная РНК фага MS-2, кодируюш,ая только три белка (оболочки фага, репликазу и белок А) в опытах in vitro ведет инициацию их синтеза в пропорции 70 25 5. После мягкой тепловой денатурации РНК эти синтезы инициируются уже с одинаковой скоростью, что можно объяснить утратой специфической третичной организации молекулы фаговой РНК. Оказалось, что после очистки в хроматографической системе ХОФ-5 РНК фага MS-2 полностью сохраняла нативные пропорции инициации указанныз выше синтезов. То же самое было показано и для РНК фага QP [ ampbell et al., 1980]. [c.173]

Волькерт и соавторы в ходе расшифровки первичной структуры РНК фага MS2 использовали тот же метод с небольшими модификациями. Так, для гомохроматографии они пользовались продажными [c.498]

РИС. 15-14. Предполагаемая схема расположения водородных связей между фрагментом 16S-PHK и участком инициации А-белка в РНК фага R17. Предполагается, что вторичная структура изображенного на этой схеме фрагмента 16S-PHK при физиологических условиях стабильна. На рисунке не показана другая схема расположения водородных связей, соответствующая столь же стабильному комплексу оснований, выступающая петля которой увеличивается до 9 оснований, а четверка оснований UU, расположенная на З -конце, спаривается с AAGG на 5 -конце нижней части стебля [c.232]

Если пройти несколько дальше влево по нуклеотидной последовательности фага Q , то можно встретить группу из четырех нуклеотидов, которая может связываться с 16S-PHK так же, как это показано на рис. 15-14 для инициаторного участка А-белка в РНК фага R17. Аналогичные защищенные рибосомами ннициаторные последовательности были обнаружены в молекулах многих вирусных РНК, а также в молекулах некоторых специфических мРИК [101, 102]. [c.242]

Для РНК фага MS2 была установлена полная последовательность всех 3569 нуклеотидов [118]. Некоторые участии этой последовательности показаны на, рис. 15-19. 5 -конец (средняя часть структуры, изображенной в верхнем левом углу) все еще несет трифосфатную группу инициаторного GTP. После ряда шпилек следует защищенный рибосомой участок [119а], который начинается инициаторным кодоном GUG. Этот факт служит прямым доводом в пользу того, что GUG, так же как и AUG, играет роль биологически важного инициаторного кодона. Нуклеотидная последовательность, расположенная вслед за инициаторным кодоном, в точности кодирует почти полностью установленную аминокислотную последовательность вирусного белка. Терминирующий кодон UAG обведен на рисунке рамкой. Вслед за ним расположена короткая межгенная область, включающая одну сторону шпильки, на конце которой расположен инициаторный кодон AUG для следующего гена. Далее расположена последовательность нуклеотидов, точно соот-в <ггву рщ я эцсрериментально установленной последовательности ами- [c.242]

Репликация одноцепочечного фага должна протекать в две стадии. Сначала на содержащейся в фаговой частице плюс-цепн образуется. комплементарная минус-цепь. Для инициации этой стадии необходимы еще один бактериальный белок, а именно фактор HF , и GTP. Образующиеся минус-цепи не остаются связанными с плюс-цепями. Они, по-внди-мому, освобождаются от репликазы в одноцепочечной форме и складываются, образуя высокоупорядоченные молекулы с большим числом шпилек. (Как и в случае плюс-цепей РНК фага MS2, показанных на рис. 15 19.) Далее минус-цепи копируются (фактор ИР для этого не нужен), образуя большое число новых плюс-цепей, которые включаются в готовые фаговые частицы. [c.245]

Рис. 6. Схема расположения кодирующих и неколирующих нуклеотидных последовательностей вдоль цепи РНК фага М82

В связи с рассмотрением РНК фага MS2, следует указать также на другой способ размещения разных кодирующих последовательностей в одной мРНК. Дело в том, что MS2 РНК кодирует еще и четвертый белок, названный белком лизиса, или L-белком (он, повидимому, участвует в лизисе хозяйской клетки на завершающей фазе инфекции). Этот белок закодирован участком РНК, начинающимся в конце С-цистрона, захватывающим всю 36-нуклеотидную вставку между С-цистроном и S-цистроном и заканчивающимся в пределах S-цистрона рамка считывания этого перекрывающегося L-цистрона сдвинута вправо на один остаток (+1 сдвиг), так что никакие его участки не транслируются при синтезе С-белка и S-белка. L-цистрон имеет свой инициаторный кодон AUG, не в фазе с кодонами С-цистрона, и, соответственно, свой терминаторный кодон UAA, не в фазе с кодонами S-цистрона. Эта ситуация изображена на рис. 7. Использование перекрывающихся кодирующих последовательностей в пределах одной мРНК встречается, однако, не часто и свойственно, по-видимому, в основном вирусным системам, где экономия места для размещения цистронов играет особенно важную роль. [c.21]

Рис. 11. Схема вторичной структуры фрагмента РНК фага R17, охватывающего конец цистрона белка оболочки и начало цистрона синтетазы (по J. Gralla et al. Nature, 1974, v. 248, p. 2 M-208).

Из трех терминирующих кодонов самым слабым является UGA. Он чаще всего может проскакиваться транслирующей рибосомой, по-видимому, за счет его узнавания триптофановой тРНК. В некоторых случаях этот терминирующий кодон специально используется в природе для того, чтобы в дополнение к основному белковому продукту, синтез которого завершается на этом кодоне, происходило образование небольших количеств другого физиологически важного белка из удлиненного полипептида. Такая ситуация наблюдается при трансляции РНК фага Q цистрон белка оболочки фага заканчивается терминаторным кодоном UGA, который время от времени проскакивается рибосомами, что приводит к синтезу небольших количеств значительно более длинного, чем белок оболочки, полипептида последний является необходимым продуктом трансляции фаговой РНК, так как требуется для сборки полноценной (инфекционной) фаговой частицы. [c.266]

Экспериментально показано, что трансляция действительно зависит от конформации мРНК. В работе [127] РНК фага R 17 инкубировалась в присутствии Mg , а затем вводилась в качестве матрицы в бесклеточную систему Е. соИ. Инкорпорация Фен и Гис в белок и количество синтезируемого белка оказывались иными, чем в случае применения РНК, не инкубированной с Mg++. Эти изменения нельзя объяснить деградацией РНК, так как они исчезают при надлежащей обработке РНК. В описанной ситуации происходит синтез трех белков. Последовательность их синтеза зависит от конформационного состояния РНК. [c.596]

Впервые последовательность нуклеиновой кислоты аланиновой тРНК нз дрожжей была расшифрована в 1965 г. Р. Холли. Для установления структуры использовалась методология, аналогичная разработанной Ф. Сенгером для определения аминокислотной последовательности белков. Усовершенствование этого подхода привело н 1975 г. к расшифровке последовательности целого генома — РНК фага MS-2. В настоящее время известны структуры многих тРНК, 5S и 5.8S рибосомных РНК, а также структуры больших рРНК (16S, 23S, I8S и 28S) нз ряда организмов. [c.308]

Рис. 4.9, А. Фаг Т2 168 000 х, негативный контраст (фосфорновольфрамовая кислота. Б. Фаг Т2 с сократившимся чехлом и пустой головкой 168 ООО х, негативный контраст (фосфорновольфрамовая кислота. В. Фаг лямбда 168 000 х, негативный контраст (уранилацетат). Г. Фаг Т7 с коротким отростком 168 ООО X, негативный контраст (уранилацетат). Д. РНК-фаг fr 168 ООО х, негативный контраст (уранилацетат). Е. Кольцевая молекула ДНК (репликативная форма) фага fd 50000 х, после расправления в цитохроме конусное напыление. Ж. Фаг fd с кольцевой одноцепочечной ДНК 50 000 х, напыление под углом, (Фото Н. Frank.)

РНК-зависимый синтез РНК (стр. 161) особенно интенсивно изучался на культуре Es heri hia oli, зараженной РНК-содержащими бактериофагами f2 или MS2 [142, 143, 145—147, 169— 173]. При заражении бактериальной клетки такими РНК-фагами синтез вирусной РНК может происходить непосредственно на [c.248]

Более того, меченая инфекционная вирусная иг-РНК сохраняется без изменений в течение всего цикла воспроизведения вируса и может затем быть выделена из лизата [146]. Следовательно, она не включается в вирусное потомство, а служит, вероятно, переносчиком необходимой информации для синтеза фермента, осуществляющего ее собственную репликацию и воспроизведение фаговых белков. Действительно, когда РНК фага 12 добавляют in vitro к системе, синтезирующей белок, то начинается синтез фагоснецифичных полипептидов, из которых строится оболочка фага (стр. 277). Таким образом, вирусная РНК несет генетическую информацию и может служить информационной РНК без всякой дальнейшей транскрипции. [c.249]

В клетках Е. соИ, зараженных фагом MS2, меченным по фосфору, у/ке через несколько минут после заражения образуется меченое соединение, устойчивое к действию РНК-азы [171]. Оно было идентифицировано как двухценочечная репликативная форма РНК фага MS2 (стр. 59 и стр. 161), во-первых, по профилю тепловой денатурации и температуре плавления, во-вторых, по поведению при центрифугировании в градиенте плотности сернокислого цезия и, в-третьих, по локализации радиоактивности в одной из цепей ( плюс -цепь), представляющей родительскую РНК фага MS2. Эта репликативная форма, но-видимому, аналогична репликативной форме ДНК фага фХПА (стр. 214). [c.249]

В Е. oli, зараженной фагом MS2, специфичная РНК-зависимая РНК-полимераза (РНК-синтетаза) появляется вскоре после заражения и достигает максимума через 30—45 мин. Эта полимераза была выделена в очищенном виде из экстрактов зараженных клеток и отделена от ДНК-зависимой РНК-полимеразы и от полинуклеотидфосфорилазы [142, 171—173]. В очищенной форме она представляет собой голофермент, тесно связанный со своей природной матрицей, двухцепочечной репликативной формой РНК фага MS2. Этот голофермент синтезирует in vitro вирусную РНК фага MS2 тина родительской в присутствии четырех рибонуклеозид- [c.249]

Было показано, что после заражения Е, oli бактериофагом Т4 на фаговой ДНК-матрице начинает синтезироваться фагоснецифичная РНК, которую можно отличить от бактериальной РНК. Оказалось, что в РНК, синтезируемой на мутантной Т4-ДНК, в которой один из участков выпал делеция), отсутствует специфическая нуклеотидная последовательность, имеющаяся в РНК фага дикого типа. Этот результат также можно расценивать как доказательство комплементарного спаривания оснований нри синтезе РНК. [c.513]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология