Субстрат, техника добавления

Приготовление среды для инкубации. При выявлении дегидрогеназ и диафораз с помощью образцов нитро-ТС, полученных указанным выше способом, мы пользовались инкубационной средой, рекомендуемой Гессом, Скарпелли и Пирсом [10] и основанной на оригинальной технике Нахласа, Валькера и Зелигмана [8, 9]. При этом оказалось необходимым увеличить концентрацию нитро-ТС до 2—3 мг/.чл, особенно при работе со слабоактивными тканями. Кроме того, мы с успехом пользовались субстратами в начальной концентрации до 0,2—0,5 моль/л. При исследовании тканей с высокой дегидрогеназной активностью добавление к инкубационной среде цианида или других ингибиторов ферментов дыхания (амита-ла, азида натрия) оказалось необязательным, так как их присутствие не изменяло характера образования диформазана. [c.145]

Метод рН-стата был использован для определения холинэстеразы Гликом [39] в 1938 г. обзор возможности его применения дан в работе Якобсена и др. [48]. Достоинства этого метода — его точность и чувствительность. Особое преимущество данного метода состоит в том, что он позволяет вести реакцию при различном pH, включая и те области pH, которые лежат за пределами возможности бикарбонатного буфера (с помощью манометрического метода измерение можно производить только в области этого буфера). При этом методе исключается также нежелательное изменение pH, характерное для дельта-рН-метода. рН-Статный метод более пригоден, чем манометрический для измерения активности фермента при низких концентрациях субстрата, так как в этих условиях вследствие быстрого расщепления субстрата реакция заканчивается за 5 мин, а только с помощью рН-статного метода можно регистрировать процесс немедленно после добавления субстрата. Другое преимущество этого метода перед манометрическим или методом дельта-рН состоит в том, что здесь нет помех со стороны буферных веществ. Его недостатком является сравнительно медленное выполнение измерения, а также то, что он таит в себе все технические и аналитические трудности, связанные с техникой титрометрии. [c.435]

Метаболиз.ч тканевых срезов, из.кельченных препаратов и препаратов разрушенных клеток. В 1912 г. Варбург начал исследования метаболизма тканевых срезов с использованием манометрической техники. Количественные изменения объема или давления газа регистрировались в приборе, предложенном ранее Холдейном. Метод Варбурга позволил исследовать метаболизм маленьких фрагментов определенной ткани или органа путем манометрического измерения скорости потребления Ог и выделения СОг (дыхательный коэффициент см. разд. 11.1.2). С помощью этого метода можно измерить также скорость утилизации какого-либо питательного вещества пли субстрата, добавленного в среду, в которую помещена ткаиь, и определяют природу и количество метаболитов, образующихся в течение эксперимента. Этот метод получил применение при работе со срезами ткани, гомогенатами ткани, препаратами разрушенных клеток или бесклеточиыми препаратами (см. ниже). [c.388]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология