Холинэстераза определение

Хлорэтанол, определение 8427 Холестерин, определение 6692, 8245, 8277 Холин, определение 7220, 8256 Холинэстераза, определение 7949, 8109 [c.397]

Применение холинэстераз для определения суперэкотоксикантов основано на зависимости скорости реакции К от концентрации субстрата [Л в соответствии с уравнением Михаэлиса-Ментен [c.290]

Разработаны несколько вариантов иммунохимического определения с электрохимическим контролем некоторых антигенов. Высокая чувствительность достигнута либо за счет использования каталитических токов выделения водорода на ртутном электроде, либо с помощью биосенсора на основе иммобилизованной холинэстеразы. [c.152]

Физиологическая роль этих двух видов холинэстераз различна. Они отличаются по субстратной специфичности, распределению в организме и многим другим признакам. Однако имеются и общие свойства. Одним из них является взаимодействие с ФОС. Именно это свойство, по-видимому, и следует прежде всего учитывать, рассматривая роль истинной и ложной холинэстераз кожи в процессе всасывания антихолинэстеразных веществ. В связи с этим мы в большинстве опытов не проводили раздельного определения истинной и ложной холинэстераз в коже. Ис- [c.140]

Во время хирургических операций (чаще по поводу аппендицита) под местной анестезией вырезали у людей кусочки кожи. При определении локализации холинэстеразы в норме тотчас после вырезания их фиксировали в 10% нейтральном формалине. В опытах по определению изменения активности холинэстеразы под воздействием фосфорорганического ингибитора на вырезанный кусочек кожи перед его фиксацией наносили водную эмульсию вещества, через 15—30 мин или 1 ч ее удаляли с помощью фильтровальной бумаги. И лишь после этого кожу фиксировали в нейтральном формалине. [c.141]

По своей сущности к экспозиционным тестам близок метод, по которому в организме определяют не само вещество или продукты его метаболизма, а специфическую реакцию, вызванную ими (чаще — угнетение ферментов). Примером такой реакции может служить угнетение активности холинэстеразы крови при воздействии большинства ФОС. Хотя было доказано, что между степенью токсичности ФОС, их физиологической активностью и антихолинэстеразными свойствами не всегда существует прямая количественная зависимость, для практических целей оказалось оправданным принять в качестве критерия опасности определенный уровень угнетения активности фермента. [c.170]

Количеств, определение осуществляют используя фермент холинэстеразу (по изменению ее активности при действии Д) по ионам F или N , образующимся при взаимод. Д. соотв. с алкоголятом щелочного металла или гидроксамовой к-той по степени разложения Н О при его взаимод. с Д. [c.56]

К теории взаимодействия ацетилхолина с холинэстеразой, но-видимому, приложима выдвинутая ранее гипотеза [58]. Согласно ей, активные центры энзима образуются в момент взаимодействия субстрата с энзимом и в результате конформационной перестройки третичной структуры молекулы энзима прп приближении молекулы субстрата [59]. Высказывалось также предположение, что и в холинорецепторе должны произойти определенные изменения конформации, чтобы он мог соединиться с ацетилхолином или с другим холинергическим веществом. [c.98]

Так, Ф. Калоянова и А. Байнова (1973) предложили для сельского хозяйства новый тип гигиенического норматива — минимальный срок безопасной работы (по примеру карантинных сроков, принятых в токсикологии питания). Безопасный срок работы определяется начальной концентрацией пестицидов на растениях. Путем комплексного исследования смывов с листьев, рук рабочих и экспозиционных тестов ингибирования холинэстеразы определен безопасный срок начала работы после обработки растений фосфорор-ганическими пестицидами. Предложены номограммы для практического иапользовааия. В число пунктов для устаиовления ПДК включено требование отсутствия изменений пищевых свойств растений и др. [c.287]

Большое различие е действии тиолов на центральную нервную систему обусловливает интерес к исследованию их влияния на основные ферментные системы мозговой ткани. В литературе отсутствуют данные о действии меркаптанов на активность холинэстеразы. Определение активности хо-линэстеразы производилось нами потенциометрическим методом, основанном на появлении уксусной кислоты при гидролизе ацетилхолина [121. Исследуемые меркаптаны вводились крысам внутрибрюшинно в дозах, близких к ДЛ5,,. На васоте отравления определялась активность данного фермента в головном мозгу, плазме крови и эритроцитах (табл. 6). [c.556]

Например, в присутствии фермента холинэстеразы ацетил-холин разлагается с образованием уксусной кислоты. Фермент чувствителен к изменению pH, и, чтобы создать оптимальные условия протекания реакции, необходимо поддерживать pH вблизи 7,4. Для этого используют рН-метр, присоединенный к сервосистеме, контролирующей движение поршня бюретки, которая подает по мере необходимости раствор NaOH. Такое устройство известно как рН-стат. На рис. 15-5 показана кривая, по которой определяли активность холинэстеразы из образца животной ткани [14]. Навеску ткани массой 0,3 г гомогенизировали в физиологическом солевом растворе (0,9 % -ный раствор Na l). После установления pH 7,4 (точка Р) выжидали 10 мин, регистрируя базовую линию, чтобы убедиться в отсутствии самопроизвольного выделения кислоты. Затем прибавляли избыток иодида ацетилхинолина (Ацх.1), после чего начинался приток NaOH. Активность холинэстеразы, определенная по наклону кривой, полученной в этом эксперименте, оказалась равной 4,96- моль/(г мин). [c.326]

Особенности ферментативного определения токсикантов с помощью чолинэстераз рассмотрены в обзоре 84 Получают холинэстеразы из различных источников. Они содержатся в нервной ткани большинства животных, в эритроцитах млекопитающих, в яде змей, сьшоротке крови овец и коз. В значительных количествах холинэстеразы содфжатся в плазме крови человека, лошади, собаки, морских свинок, в печени, легких и кишечнике млекопитающих. Промышленный вьшуск препаратов в настоящее время налажен в ряде стран, в том числе и в России (НПО "Биомед в Перми и др ) Некоторые холинэстеразы, например выделенные из сыворотки крови лошади или эритроцитов человека, сохраняют свою активность до 5 лет. [c.290]

Для удобства применения холинэстеразы иммобилизуют в по.шмер-ные пленки или гели. При этом существенно увеличивается устойчивость фермента к влиянию внешних факторов. Так, при иммобилизагщи холинэстеразы в желатиновый гель срок ее хранения составляет 2-3 года, а при непрерьганой работе активность препарата падает на 20% лишь через 10 дней. Наряд) с повьпиением стабильности иммобилизация хо.пинэстераз обеспечивает многократное использование препарата. Заметим, что при определении необратимых ингибиторов, например фосфорорганических пестицидов, повторное использование фермента в каждом случае требует специальных исследований В качестве реактиваторов применяют гидро-ксиламин, оксимы и др [c.290]

Оптимизация определений необратимых ингибиторов холинэстераз-достаточно сложный и трудоемкий процесс. Поэтому при вьшолнении анализа строго соблюдают последовательность операций по подбору фер-мергга, составу реакционной среды, концентрации субстрата и др Эго позволяет снизить пределы обнаружения ингибитора и повь сить то шость определений [c.291]

Определение обратимых ингибиторов холинэстераз менее распространено Тем не менее в настоящее время разработано множество тестов на основе холинэстераз для определения ионов тяжелых металлов и хлорорганических пестицидов [89,90], являющихся обратимыми ингибиторами Интерес представляет способ оценки общей токсичности водопроводной воды, основанный на суммарном эффекте снижения фермета-тивной активности холинэстеразы при введении в систему субстрат-фермент анализируемой пробы. Пределы обнаружения обратимых ингибиторов существенно зависят от природы ингибитора и субстрата. [c.291]

Наряду с холинэстеразой для определения органических токсикантов применяют пероксидазу хрена [86[. Однако, как правило, ее применение основано на иммобилизации в биослой соответствующих устройств, с по- [c.291]

Описаны многочисленные конструкции потенциометрических и амперометрических холинэстеразных биосенсоров [84 . В частности, интерес представляст потенциометрическая система на основе двух платиновых электродов. Измеряемой величиной является потенциал одного из элекфодов, который служит анодом В ячейку вносят раствор бутирил-тиохолиниодида (0,002 моль/л) с pH 7,4. При введении в раствор аликвоты пробы, содержащей холинэстеразу, потенциал анода понижается, причем скорость его изменения АЕ/А1 зависит от природы фермента и концентрации фосфорорганических веществ (систокс, паратион, зарин и др.) в растворе. Пределы обнаружения составляют для зарина - 0,0002, систокса - 0,01 и паратиона - 0,18 мкг/мл. Погрешность определений - [c.293]

Эфиры тиохолина можно использовать и для катодного депгектиро-вания реакций иммобилизованной холинэстеразы В этом случае определение ее активности основано на способности одного из продуктов ги,фО-лиза (бутирилтиохолиниодида) вступать в электрохимическую реакцию с материалом электрода - ртутью [c.295]

За ходом иммунохимической реакции образования комплексов АТ-пестицид можно следить также с помо1цью амперометрического биосенсора на основе иммобилизованной холинэстеразы При этом возможно определение до К) моль/л 2,4-Д кислоты (Ш]. Аналитическим сигналом служит пик на вольтамперофамме при -0,55 В. Его величина зависит не только от активности иммобилизованной на электроде холинэстеразы, но и от содержания пестицида, поскольку молекулы последнего связываются с иммобилизованными в пленку нитроцеллюлозы антителами и [c.303]

Рис. 40. Определение константы неконкурентного ингибирования гидролиза бутирилхолина, катализируемого холинэстеразой

Рис. 41. Определение в координатах Диксона константы неконкурентного ингибирования гидролиза бутирилхолина, катализируемого холинэстеразой. Концентрации субстрата (а) — МО-3 м- (б) 2,5-10- М (в)-9.1-10-5 М (г) -5-10-5 М

D. Heath (1961) и др. При соблюдении определенных условий (тип холинэстеразы, вид животного, способ введения вещества и др.) можно выявить зависимость между степенью ингибирующего действия соединений на холинэстеразу и их токсичностью. [c.61]

Ю. С. Каган и Ю. И. Кундиев (1961) для суждения о скорости всасывания через неповрежденную кожу кроликов меркаптофоса и его изомеров, препаратов М-74 и М-81 исследовали активность холинэстеразы крови сыворотки (ХЭ-сыворотки) и ацетилхолинэстеразы эритроцитов (АХЭ-эритроцитов). Установлена определенная зависимость степени угнетения холинэстера-.зы и последующего восстановления активности фермента от величины дозы препарата. При нанесении меркаптофоса на кожу в дозе 5 мг/кг резкое снижение активности холинэстеразы отмечено ун е через 1 ч, максимума оно достигало на 2-й день опыта, а затем начиналось постепенное восстановление. С увеличением дозы ФОИ, нанесенного на кожу, повышалась степень угнетения фермента и длительность периода восстановления его. [c.63]

В указанном отчете приведено описание следующего случая. Сельскохозяйственный рабочий утром готовил раствор тиофоса, затем он весь день е помощью тракторного опрыскивателя обрабатывал растения. У этого человека был респиратор, резиновые перчатки, накидка и обычная рабочая одежда. Под вечер он был обнаружен в поле, он неподвижно сидел на тракторе, раскинув руки, респиратор был одет. Непосредственной причиной смерти явилась аспирация рвотных масс. Отравление тиофосом было установлено посмертным определением активности холинэстеразы. На брюках погибшего и манжетях перчаток был обнаружен тиофос. Очевидно, при приготовлении раствора он вылил на себя концентрированный препарат. Рабочий не знал о том, что тиофое проникает в организм через кожу и поэтому даже не пытался сменить загрязнб1шую одежду и помыться. [c.67]

Выше подчеркивалось, что для установления кожно-венозных коэффициентов можно использовать не только ЛД50, но и другие дозы, вызывающие точно учитываемый эффект. Для многих ФОС таким точно учитываемым эффектом может быть степень угнетения активности холинэстеразы крови и, следовательно, определение дозы вещества, вызывающей снижение активности фермента на 50% (I50). [c.94]

Критериями резорбтивного токсического действия были время появления признаков отравления, степень их выраженности, исход отравления и сроки гибели. Кроме того, у всех животных определяли исходную активность ХЭ-сыворотки крови и АХЭ-эритроцитов, затем брали пробы крови через 15, 30 мин и через 1, 2 и 3 ч после аппликации препарата. Активность холинэстеразы, как и в других исследованиях, определяли колориметрическим методом, в основу которого положено определение аце-тилхолина по Хестрину. [c.112]

С этой целью нами был применен метод гистохимического определения холинэстеразы в коже интактных животных и животных, которым на кожу наносили ФОИ в различных дозах и концентрациях, исследованы также вырезанные кусочки кожи человека при хирургических операциях. Мы применили метод, предложенный в 1949 г. G. Koelle и J. Friedenwald. Описание этого и других методов гистохимического определения холинэстеразы приведено в работах В. В. Португалова (1955), Е. Реаг-se (1956), Д. Кисели (1962) и др. [c.139]

ГАЛАНТАМИН (нивалин), алкалоид из клубней подснежников. Гидробромид Г. (крист,, трудно раств. в воде, не раств. в сп.) — обратимый ингибитор холинэстеразы. ГАЛЛЕИН [пирогаллолфталеин 4,5,6-триокси-9-(2-карбок-сифенил-ЗН-ксантен-З-он) ф-лу см. в ст. Триоксифлуоро-ны], темно-красные крист, не растворяется в воде, раств. в СП., водно-спиртовых р-рах к-т и щелочей. Реагент для фотометрического определения Sn(IV) и ЗЬ(П1) в водно-спиртовой [c.117]

ХОЛИНЭСТЕРАЗА, см. Ацетилхолинэстераза. ХОЛОСТОЙ ОПЫТ (контрольный опыт), повторение процедуры хим. анализа в аналогич. условиях (с теми же реагентами, приборами и т. п.), но без анализируемого к ва. Проводят для определения поправки, к-рую необходимо вычесть из значения аналит. сигнала, измеренного при анализе исследуемого в-ва, чтобы получить правильный результат. Иногда поправку специально не определяют, а учитывают непосредственно в ходе измерений аналит. сигнала напр., в дифференц. спектрофотометрии р-р, полученный в X. о., используют в качестве р-ра сравнения. X. о., проведенный без анализируемого в-ва, не всегда позволяет найти правильное значение поправки, т. к. распределение определяемого компонента между фалами в разл. стадиях анализа может зависеть от содержания всех остальных компонентов. Флуктуации результатов X. о. определяют предел обнаружения вещества. Значения поправки X. о. зависят от чистоты реактивов и условий анализа. ХОНДРОИТИНСУЛЬФАТЫ, сульфатированные муко-полисахариды. Входят в состав соединит, тканн животных (хрящей, сухожилий). Углеводные цепи X. (см. ф-лу) по- [c.665]

Т. анализируют спектрофотометрич. методом, основанным на его р-ции с нитропруссидом Na или 5,5-дитио-6ис-(2-ш1тро6еизойной к-той, амперометрич. титрованием в присут. соед. Hg и др. На определении Т. основаны методы определения активности холинэстераз и их ингибиторов. [c.586]

Предложены биосенсоры для определения тиохолиновых эфиров на основе катализируемой холинэстеразой (ХЭ) реакции гидролиза [c.502]

Ферменты, которые обнаруживаются в норме в плазме или сыворотке крови, условно можно разделить на 3 группы секреторные, индикаторные и экскреторные. Секреторные ферменты, синтезируясь в печени, в норме выделяются в плазму крови, где играют определенную физиологическую роль. Типичными представителями данной группы являются ферменты, участвующие в процессе свертывания крови, и сывороточная холинэстераза. Индикаторные (клеточные) ферменты попадают в кровь из тканей, где они выполняют определенные внутриклеточные функцгп . Один из них находится главным образом в цитозоле клетки (ЛДГ, альдолаза), другие —в митохондриях (глутаматдегидрогеназа), третьи —в лизосомах ( 3-глюкуронидаза, кислая фосфатаза) и т.д. Большая часть индикаторных ферментов в сыворотке крови определяется в норме лишь в следовых количествах. При пораженгп тех или иных тканей ферменты из клеток вымываются в кровь их активность в сыворотке резко возрастает, являясь индикатором степени и глубины повреждения этих тканей. [c.579]

Однако для многих химических веществ, особенно новых, не существует достаточно точных количественных методов определения в крови и других биологических средах. В связи с указанным большее распространение получила группа методов, основанная на выявлении времени и силы общих или местных реакций организма, вызванных всосавшимся через кожу веществом. Так, И. С. Александров, изучая всасывание через кожу хвоста мышей различных амино- и питро-соединений бензольного ряда, регистрировал на кимографе дыхание и рефлекторное отдергивание конечности в ответ на раздражение индукционным током. Учет времени появления изменений дыхания и двигательных реакций, а также степени их выраженности позволили сделать выводы о силе токсического действия различных веществ при аппликации их на кожу. Ю. С. Каган, Ю. И. Кундиев и др. при изучении всасывания через кожу ряда фосфорорганических соединений определили угнетение активности холинэстеразы в крови и в других тканях. Для суждения о количестве всосавшегося через кожу вещества необходимо было установить корреляцию между степенью угнетения активности холинэстеразы и количеством яда. При этом необходимо учитывать возможность активации вещества после всасывания, а также другие превращения в организме. [c.116]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология