Место расщепления субстрата

Место расщепления субстрата [c.43]

С практической точки зрения представляют интерес альтернативные прототипы, различающиеся по месту расщепления субстрата, расширяющие потенциальные возможности проведения экспериментов. Например, при получении рекомбинантных молекул ДНК использование рестриктазы, дающей тупые концы вместо липких, позволяет клонировать по этому сайту вектора любые тупоконечные фрагменты. [c.65]

При определении субстратной специфичности первых обнаруженных рестриктаз в начале в основном применялись только прямые биохимические методы анализа. Задача определения специфичности и места расщепления сайта тогда практически сводилась в один эксперимент — определение первичной структуры концевых участков по месту расщепления субстрата (49, 116, 144, 195]. С момента открытия первых рестриктаз методы определения специфичности перетерпели большую эволюцию, характерной чертой которой явилось всевозможное использование более быстрых и более простых как прямых так и косвенных методов. Привлечение косвенных методов, в основном коснулось только изучения сайтовой специфичности рестриктаз задача определения места расщепления субстрата и по сей день решается прямыми биохимическими методами. [c.170]

Методы определения места расщепления субстрата [c.173]

В заключение можно сказать, что современные методы анализа нуклеиновых кислот позволяют определить место расщепления субстрата для рестриктазы любой специфичности. Выбор стратегии и метода определения зависит от особенностей узнаваемого участка и методов, которыми владеет экспериментатор. [c.180]

Из приведенных соображений вытекает, что при расщеплении ферментом гексамер-ного субстрата связи А—В, В—С, С—D и Е—Р не могут разрываться. Следовательно, единственным возможным местом расщепления субстрата является связь D—Е (рис. 7.11). [c.138]

Обнаружение одного атома 0 в неорганическом фосфате указывает, что местом расщепления субстрата является Р— 0-связь. Почти все фосфатаз-ные реакции протекают по этому пути. В то же время реакция фруктозы с глюкозо-1-фосфатом в воде, обогащенной 0 , дает сахарозу и неорганический фосфат, который не содержит избытка 0 . Следовательно, эта реакция должна протекать с разрывом С — 0-связи, что вообще характерно для фосфорилазных реакций. Именно такие эксперименты позволили установить, что фосфатазы являются ферментами, переносящими фосфорильную группу, а фосфорилазы — ферментами, переносящими гликозильную группу. [c.201]

Однако ферменты обычно присутствуют в таких низких концентрациях, что их не удается выявить в одной мухе или кусочке ткани с помощью стандартных методов окраски белков. Для того чтобы выявить тот или иной фермент, пластину с гелем погружают в ванну, содержащую субстрат этого фермента и краситель, который связывается или окрашивается в месте расщепления субстрата. Например, бесцветная окисленная форма красителя может переходить в окрашенную восстановленную в результате присоединения электронов, которые отщепляются при диссоциации дегидрогеназы и ее кофактора. Есть и более сложные реакции, содерлощие различные промежуточные звенья, однако принцип всегда одинаков в мест кон- [c.114]

В работах, посвященных изучению наиболее многочисленной группы эндонуклеаз, которые по своей субстратной специфичности могли бы быть отнесены к рестриктазам II типа, в основном их характеристика ограничивается определением узнаваемого участка, места расщепления субстрата и определением потребности в ионах магния. По мере накопления информации о типах построения узнаваемых участков выявилась определенная гетерогенность этой группы ферментов. Так рестриктазы, узнающие ассимметрическую последовательность нуклеотидов и расщепляющие ДНК в стороне от нее, обозначены IIS [364]. Закономерно вставал вопрос о том, что еще большая гетерогенность могла бы быть обнаружена при изучении других дифференцирующих признаков, например, структурной организации и реакции на другие кроме ионов магния кофакторы (АТФ, Адо-мет). [c.8]

Место расщепления субстрата не играет роли при физическом картировании ДНК. Но существует ряд задач, для которых структура концов имеет вполне определенное значение. Фрагменты с выступающим З -концом могут быть удлинены с помощью терминальной трансферазы [326]. Это находит применение в опытах по клонированию ДНК [187]. Наличе липких концов облегчает получение рекомбинантных ДНК in vitro. Однако рекомбинанты можно получать только с фрагментами, образованными действием на субстрат одной и той же рестриктазы или рестриктаз, узнающих различающиеся последовательности, но образующих идентичные липкие концы. Примерам может быть пара рестриктаз BamH I и Sau3A I, узнающих соот- [c.64]

Основной характеристикой специфичности эндонуклеаз является узнаваемая последовательность нуклеотидов. Ее определение позволяет каталогизировать новый фермент по отношению к известным, т. е. установить является ли он изошизомером или прототипом. Наличие этих сведений является отправной точкой для дальнейшей характеристики исследуемого фермента (место расщепления субстрата, специфичность по отношению к модификациям субстрата и т. д.) и служит одной из предпосылок для принятия решения об его перспективности для использования в качестве аналитического реагента. [c.170]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология