Определение активности С14 в гомогенате тканей

Мышцы ( 5 г) задних конечностей декапитированного животного помещают в ледяную среду выделения. После охлаждения ткань обсушивают фильтровальной бумагой, переносят в чашку Петри, стоящую на льду, очищают от жира и соединительной ткани, измельчают ножницами. Навеску тканевой кашицы гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе Поттера с тефлоновым пестиком, имеющим нарезку в 6-кратном по отношению к весу ткани объеме среды выделения. Тканевый гомогенат центрифугируют при 15000 д в течение 20 мин. Супернатант после центрифугирования, представляющий собой 14%-нук> растворимую клеточную фракцию, фильтруют через 4 слоя марли и хранят порциями при —5°С в течение 2 нед. Размораживают при комнатной температуре и перед определением активности пируваткиназы разводят средой выделения до конечного разведения 1 200. [c.334]

Удобным объектом для определения активности аргиназы является гомогенат печени животных или экстракт из ацетонового порошка этой ткани. [c.46]

Гидроксилирование допамина катализируется экстрактами из различных тканей бананов (Смит и Киршнер [81]), а также ферментативной системой, экстрагируемой из ацетонового порошка банановой пульпы. Аскорбиновая кислота по-разному действует на растительный фермент в то время как активность гомогената стимулируется, растворимый фермент ингибируется. Смит и Киршнер [82] получили результаты, подтверждающие точку зрения, что гидроксилирование идет непосредственно по -углеродному атому боковой цепи. Образование конечного продукта могло бы произойти при дегидрогенизации боковой цепи исходного субстрата и последующем присоединении воды. Такой механизм предусматривает отрыв одного атома водорода от а-угле-родного атома, несущего аминогруппу. Однако было показано, что при гидроксилировании смеси а-С -допамина и а-Н -допамина (взятых в определенном отношении) растительным и животным ферментами отношение С № оставалось тем же. Этот результат полностью исключает механизм а- -дегидроге-низации и последующей гидратации. [c.329]

Проводили определение удельной активности суммарного гликогена и отдельных его фракций, а также удельной активности углерода гомогената тканей. [c.152]

Определение активности С в гомогенате тканей [c.40]

Получение сухого остатка из гомогената тканей и определение его активности производится следующим образом. Берется тщательно измельченная навеска ткани Ю—15 мг и переносится в пробирку с 0,5—1,0 мл воды. Спустя 1—2 час. после набухания Ткани, содержимое пробирки энергично взбалтывается с помощью вибрационного аппарата до образования гомогенной массы, которая количественно переносится на предварительно взвешенные тарелочки и высушивается при температуре 105— 110° до постоянного веса. [c.40]

В данной схеме предполагается, что насосы, восстанавливающие исходный ионный гомеостаз в проводящих тканях после ПД, являются в основном Н -АТФазами паренхимных клеток проводящих тканей. Это подтверждает в определенной степени установленный факт увеличения общей АТФазной активности гомогената проводящих тканей стебля тыквы через 1 —3 мин после генерации ПД (177]. Такой эффект известен и для ритмически возбуждаемых животных тканей (мышца, нерв). Он может быть связан с биосинтезом новых молекул фермента под влиянием возбуждения или переходом неактивных форм фермента в активные [148]. [c.179]

Навеску ткани гомогенизируют с семикратным объемом 0,1 М К-фосфатного буфера (pH 7,8). Гомогенат центрифугируют при 40000 д в течение 40 мин и. надосадочную жидкость используют для определения активности фермента. [c.85]

После тщательного измельчения тканей брались необходимые навески для определения величины удельной активности компонентов углеводного и жирового обмена и гомогената тка- [c.16]

Это дает основание сделать вывод о целесообразности определения удельной активности углерода гомогената изучаемых тканей. [c.42]

Навеску (5 г) тканевой кашицы (приготовление см. на с. 65) взвешивают и переносят в стеклянный стакан гомогенизатора Поттера. Добавляют среду выделения из расчета 9 мл среды на 1 г ткани и гомогенизируют в течение 30 с с помощью тефлонового пестика без нарезки. Полученный гомогенат центрифугируют при 20 ООО в течение 15 мин. Супернатант после центрифугирования представляет собой 10%-ную растворимую клеточную фракцию. Препарат фильтруют через 4 слоя марли и хранят порциями при —5°С в течение 2 нед. Размораживание растворимой клеточной фракции проводят при комнатной температуре. Перед определением активности аспартатаминотрансферазы препарат фермента разводят средой выделения до конечного разведения 1 100. [c.352]

Определялась степень угнетения холинэстеразы в различных отделах мозга и в периферических тканях (кровь и мышца) при введении кошкам бронхоспастических доз этих веш,еств. Активность холинэстеразы определялась путем инкубирования гомогенатов тканей с определенными количествами ацетилхолина. Оставшийся неразрушенным ацетилхолин определялся по колориметрической методике Хестрина (Хестрин, 1949). [c.551]

Существуют два основных пути определения активности ферментов in vivo в каждый данный момент I) изменение активности в гомогенатах тканей, реже в срезах или целых тканях II) использование гистохимических методов. [c.221]

Описанный метод определения удельной активности углерода В осадке Ba Os имеет существенный недостаток, заключающийся в том, что углерод составляет только 6 % по отношению к углекислому барию. Вследствие этого приходится брать относительно большое количество осадка (3—6 мг на см ), что увеличивает самопоглощаемость -частиц и значительно уменьшает точность определения активности С в препаратах ВаС Оз Это побудило нас в дальнейшем определять удельную активность общего углерода в сухом остатке, полученном из гомогената соответствующей ткани. [c.39]

Результаты определения абсорбции антител к ОХ-45 тканевыми гомогенатами, представленные на рис. 5.6, Л, показывают, что антигенная активность ткани селезенки в пересчете на 1 мг белка примерно вдвое превышает антигенную активность тимуса и в 20 раз — активность мозговой ткани. На рис. 5.6,5 представлены результаты определения абсорбции антител препаратом несолюбилизированных мембран крысиных спленоцитов и дезоксихолатным экстрактом тех же мембран. Дезоксихолат несколько смещает кривую торможения связывания антител в сторону уменьшения антигенной активности в расчете на белок, однако данный метод анализа вполне пригоден для определения сорбции и выхода антигена в процессе аффинной хроматографии. [c.184]

Всю работу, связанную с подготовкой ткани для анализа, проводят при о—4°С. Навеску ткани (5—10 мг), взятую на микроторсионных весах с ценой деления 50 мкг, тщательно гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе с таким объемом буфера или раствора сахарозы, чтобы содержание ткани в гомогенате соответствовало приблизительно 1 мг в 1 мл. При определении активности фермента в экстрактах ткани гомогенат центрифугируют 15 мин при 10000—25000 g и для анализа используют надосадочную жидкость. [c.77]

Оптимум pH действия фермента в гомогенатах тканей печени, мозга, почек и селезенки мышей находится около 5,8 (Ю. В. Букин, 1973) при pH 5,5 или 6,1 активность фермента заметно снижается по сравнению с максимальной. В стандартных условиях определения пиридоксалькиназы количество образовавшегося пиридоксальфосфата пропорционально содержанию белка в пробах в пределах от 20 до 100 мкг и времени инкубации [c.78]

Для определения активности фосфорилазы в гомогенатах тканей используют способность фермента освобождать неорганический фосфат из глюкозо-1-фосфата в присутствии или отсутствии АМФ. Субстратная смесь, содержит 0,1 М глюкозо-1-фосфат, 2% гликоген, 0,03 М АМФ я 0,2 М NaF (pH 6,1). К 0,05 мл субстратной смеси добавляют 0,05 мл 1% гомогената ткани и инкубируют при 37 °С в течение О, 10, 20, 40 мин. После окончания инкубации к пробам добавляют 0,5 мл 10% раствора ТХУ и 3,7 мл ледяной дистиллированной воды. Выпавшие в осадок белки удаляют центрифугированием, а в надосадочной жидкости определяют количество образовавшегося неорганического фосфата по методу Фиске—Суббароу. Для этого к пробе добавляют 0,5 мл смеси, состоящей из равных количеств 2,5% раствора молибдата ам1мония и 5 и. раствора H2SO4 и 0,2 мл основного раствора эйконогена. Через 10 мин определяют оптическую -плотность раствора при 620 км я рассчитывают нол-ичество неорганического фосфата. В этих условиях количество освобождающегося неорганического фосфата пропорционально времени инкубации и количеству фермента. [c.143]

Первый метод (если применяются гомогенаты) встретил возражения в связи с возможностью возникновения артефактов, главным образом в результате перераспределения составных частей ткани при гомогенизации. При этом ингибитор, который в неповрежденной ткани пространственно отделен от фермента, может вступить с ним в контакт [137, 179]. Кевиц [99], например, перед определением высушивал и экстрагировал ткань (диафрагму мыши) хлороформом и на протяжении первых 10 час после отравления параоксоном нашел более высокую активность холинэстеразы, чем в не-экстрагированной ткани (рис. 34). Вероятно, в более поздние сроки избыток параоксона разрушался тканевыми ферментами. Однако Блебер и Кризи [26] считают, что процедура Кевица ведет к спонтанной реактивации угнетенной холинэстеразы и поэтому полученные им результаты являются артефактом. [c.221]

Пиридоксальфосфат, образующийся в пиридоксаль-киназной реакции в присутствии пиридоксаля, АТФ и Zn +, определяют в системе с апотриптофаназой В. oli (см. Ю. В. Букин, А. В. Сергеев, с. 68). Метод не требует выделения пиридоксальфосфата из инкубационной среды. Указанный принцип определения был использован ранее M ormi k и соавторами (1961,. 1970). Разработанная нами модификация метода (Ю. В. Букин, 1973) отличается высокой чувствительностью и позволяет количественно определять активность пиридоксаль-киназы в гомогенатах и экстрактах тканей. [c.76]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология