Гексокиназа как антиген

Реагентами для анализа служат глюкозо-6-фосфат—дегидрогеназа, иммобилизованная на гранулах агарозы совместно с антигеном (IgG человека), и антитела против IgG человека, меченные гексокиназой. При выполнении иммуноанализа эти реагенты смешивают с образцами. От конкуренции между антигеном из образца и иммобилизованным антигеном зависит количество антител, меченных гексокиназой, которое присоединится к твердой фазе. Активность пары ферментов, измеряемая по скорости образования NADH после добавления субстратов (глюкозы, АТР и NAD), уменьшается с ростом концентрации антигена в образце (рис. 8-11). IgG удалось определить при концентрации в конечной реакционной смеси 1 нг/мл. Чувствительность метода ограничена явлениями принципиального характера. При измерении ферментативной активности концентрация глюкозо-6-фосфата вначале ниже величины /См для глюкозо-б-фосфат—дегидрогеназы. Таким образом, по мере накопления глюкозо-6-фосфата скорость ферментативной реакции возрастает. Когда гексокиназа связывается с гранулами агарозы (в отсутствие антигена в образце), концентрация глюкозо-6-фосфата внутри гранул быстро повышается вследствие их малого объема и медленной диффузии. Напротив, когда гек- [c.115]

Это ограничение можно снять, удаляя глюкозо-6-фосфат из реакционной смеси. При добавлении фосфоглюкозоизомеразы, фосфофруктокиназы и АТР глюкозо-6-фосфат превращается во фруктозо-1,6-дифосфат, т. е. основная часть глюкозо-6-фосфата, образующегося под действием гексокиназы в свободной жидкости, исчезает, тогда как глюкозо-6-фосфат, выделяющийся внутри гранул, сохраняется. Кинетика образования NADH становится линейной, а модуляция сигнала антигеном — неограниченной во времени. [c.116]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология